Главная » Статьи » Цоликлоны группа крови

Цоликлоны группа крови


Цоликлоны: что это, определение группы крови

   Цоликлоны, как бы ни звучало это непонятное название, представляют собой лишь моноклональные антитела, помещенные в солевой раствор. Названием отдали должное месту работы изобретателей растворов – цоли (Центральный Ордена Ленина Институт). Ныне это Гематологический научный центр.

Препараты, названные цоликлонами применяются в качестве реагентов для определения группы крови и ее резус-фактора. Поставляются цоликлоны в пластиковых флаконах по 10 мл. или же в стеклянных (5 мл) в жидком виде. Флаконы для удобства снабжены капельницами.

Метод определения группы крови цоликлонами прост и точен. По этой причине он используется как основной.

Справочно. Агглютинация — склеивание и выпадение в осадок.

Принцип действия заключается в соединении с агглютиногенами – химическими компонентами, находящимися на верхнем слое определенных эритроцитов. В зависимости от реакции становится возможным определение группы крови цоликлонами. О наличии в составе агглютиногена А говорит реагент анти-А, соответственно, агглютиноген B выявляют с помощью вещества анти-B.

Отметим, что цоликлоны являются достаточно универсальным инструментом. Они позволяют определять группу крови как в системе AB0 (с использованием реагентов анти-А (красная жидкость) и анти-B (синяя жидкость)), так и в системе резус (с использованием реагента анти-D (прозрачная жидкость)).

Справочно. Для исследования используется нативная (живая) кровь в консерванте или без него, взятая из пальца.

Чтобы узнать ГК, используя цоликлоны, необходимо взять изделие с плоской поверхностью (планшет), сами реагенты и две капли крови. Для анализа подходит практически любая жидкость независимо от состояния (законсервированная или без консерванта) и способа забора (из вены/пальца). Перед нанесением на поверхности планшета делаются пометки, показывающие, где будет использоваться тот или иной цоликлон.

После подготовки поверхности лаборант наносит на нее по крупной капле реагента: обычно анти-А располагают слева, а анти-B – справа. Затем к веществу добавляют по кровяной капле, ее размер должен быть десятикратно меньше объема нанесенной жидкости.

Планшет требуется осторожно раскачивать из стороны в сторону, чтобы цоликлоны и кровь перемешались, но капли с разными реагентами не слились друг с другом. Спустя несколько минут можно наблюдать полное соединение жидкостей либо реакцию агглютинации, когда эритроциты склеиваются, а и наступает свертывание.

Результаты исследования расшифровывают следующим образом:

  • Отсутствие агглютинации в обоих случаях определяет первую группу.
  • Сворачивание при воздействии цоликлона анти-А говорит о том, что кровь относится ко второй группе.
  • Агглютинация в капле с реагентом анти-B – признак третьей группы.
  • Выпадение осадка в обоих каплях говорит о принадлежности к четвертой группе.

В случае появления последней реакции данные требуется проверить с помощью повторных анализов: кровяная капля смешивается с цоликлоном анти-AB, появление агглютинации подтвердит результат первого исследования. Вторая проверка исключает склеивание эритроцитов неспецифичного типа, которое может произойти при наличии ряда тяжелых болезней.

В рамках второго исследования кровь добавляют в раствор хлорида натрия: если жидкость относится к четвертой группе, положительной реакции на физраствор быть не должно, иначе речь идет о наличии заболевания, меняющего свойства кровяных телец.

Определение резус-фактора

  • На поверхность планшета наносится приблизительно 0,1 мл реагента.
  • Рядом капают 0,01 исследуемой крови.
  • Цоликлон и изучаемую жидкость смешивают специальной стеклянной палочкой, каждые полминуты планшет необходимо покачивать.

Важно! Возникновение агглютинации отмечается спустя 15 секунд после перемешивания, ярко заметный эффект наступает через 60 секунд, однако результат, который допустимо считать достоверным, наблюдается только через 3 минуты. В течение всего времени планшет нужно покачивать.

При склеивании и выпадении осадка из эритроцитов кровь считается резус-положительной, а при отсутствии агглютинации резус-фактор получает отрицательную отметку. Увидеть результат при появлении хлопьев эритроцитов можно без использования специального лабораторного оборудования.

Нюансы процедуры

Точность исследования ГК и резус-фактора с помощью цоликлонов очень высока, однако порой анализ выдает неправильные результаты: причиной является фактор человеческой ошибки, когда процедуру проводят с нарушениями.

Чтобы снизить риск такой ошибки, нужно помнить о следующих аспектах:

  • Цоликлоны хранятся в холодильнике, оптимальный температурный режим – +2… +8 градусов по Цельсию. Если флакон распечатан, его содержимое нужно использовать в течение 30 дней, крышка должна быть плотно завинчена. Реагенты очень чувствительны к внешним воздействиям и при несоблюдении правил хранения или по истечении срока теряют свои качества, что приводит к ошибкам. 
  • Исследование проводится при ярком освещении, оптимальный режим в лаборатории – +15… +25 градусов по Цельсию. Если климатические условия не дают возможности соблюсти нужную температуру воздуха, поверхность планшета перед процедурой охлаждают. 
  • Важно не спутать, какие цоликлоны где находятся на планшете, для этой цели их местоположение обозначается на поверхности маркером. Хотя реагенты анти-А и анти-B имеют цветовое различие, после добавления крови оно практически исчезает. 
  • Следует соблюдать пропорции жидкостей: если эритроцитов будет слишком много, реакцию агглютинации будет сложнее отследить, в противоположном случае (слишком малый объем) склеивание происходит в замедлении. 
  • Нельзя допустить, чтобы две капли соединились: даже касание краями приводит к искажению результатов анализа. Если жидкости все же слились, исследование с помощью цоликлонов проводят сначала. 
  • При смешении при помощи лабораторной стеклянной палочки необходимо брать отдельный предмет для каждой изучаемой капли. 
  • Минимальная продолжительность наблюдения – 3 минуты, при неоднозначных результатах исследование длится до 5 минут.

В ходе процедуры можно отметить и реакции, способные ввести в заблуждение: например, замедленное склеивание происходит при воздействии второго реагента. Когда реакция затягивается, со временем жидкость подсыхает, что сопровождается естественным выпадением эритроцитов в осадок, поэтому этот результат не считается достоверным.

Также в ряде случаев отмечается оседание кровяных телец по краям: неопытные специалисты принимают эффект за склеивание, но в действительности это случается, если планшет оставили в неподвижном состоянии, наблюдая за реакцией. Только если поверхность слегка раскачивали, результат можно считать правильным.

Также определить группу может быть сложно, если пациент страдает от одной из болезней, изменяющих свойства кровяных телец. К таким заболеваниям относят проблемы печени, селезенки, пневмонию, ожоги различной степени, сепсис. Наличие таких болезней сильно обостряет способность эритроцитов выпадать в осадок, и панагглютинация наблюдается даже при воздействии физраствора.

Справочно. Панагглютинация представляет собой искажение процесса склеивания (агглютинации). Изменение белкового состава сыворотки крови может привести к склеиванию всех со всеми.

С другой стороны, цоликлоны не вызовут агглютинацию, если пациент страдает лейкозом: при этой болезни кровяные тельца не реагируют даже на высокоактивные раздражители, такое же явление характерно для младенцев.

Важно. У близнецов и людей, перенесших операцию по пересадке костного мозга или частые переливания жидкости иной группы, может появиться кровяная химера, при которой в кровеносной системе уживаются эритроциты различных типов.

В этом случае анализ особенно труден, для максимально точного определения химического состава требуется провести дополнительные лабораторные исследования с использованием специального оборудования и других способов.

Определение группы крови с помощью цоликлонов

Рубрика: анализ крови Опубликовано 19.11.2017   ·   Комментарии: 0   ·   На чтение: 5 мин   ·   Просмотры:

Определение группы крови – обязательный анализ, который проходят все люди, поступающие на стационарное лечение. Без этого параметра специалист не сможет назначить грамотное лечение, а также отправить пациента на любое хирургическое вмешательство.

Провести определение группы крови с помощью цоликлонов сможет любой лаборант, если у него есть необходимые инструменты и реагенты. При этом использование цоликлонов является достаточно точным исследованием и крайне редко показывает ошибочные результаты.

Что это такое?

Цоликлон – антитело, которое появляется в результате генной инженерии. Обычно оно получается вследствие подсаживания специальных веществ в организм мыши.

Он начинает вырабатывать эти антитела, которые и синтезируются из асцитной жидкости животного. Ее и используют для изучения группы крови человека.

По своей морфологии, цоликлоны схожи с иммуноглобулинами класса М – антителами острой фазы. Механизм их действия работает за счет комплекса антиген-антитело.

Препараты цоликлонов

На сегодняшний день во всех лабораториях применяют 3 различных типа цоликлонов. Все они стандартизированы и прошли исследования. Выделяют цоликлоны – анти-А, анти-В, анти-АВ.

Каждый их них является специфическим, вызывают различные реакции. Из-за этого они вызывают развитие иммунной реакции.

Все препараты для определения группы крови выпускаются в специальных ампулах либо же флаконах, в которых содержится 5/10 мл раствора. Препарат имеет специальную окраску, которая помогает определить реагент.

  1. Красный цвет – во флаконе находится цоликлон анти-А.
  2. Синий цвет – во флаконе находится цоликлон анти-В.
  3. Не имеет окраски – комбинированный цоликлон анти-АВ. При этом в некоторых случаях его называют анти-Д.

Определение группы крови с помощью цоликлонов

Способ определения группы крови

Используя цоликдонов позволяет быстро и точно определиться группу крови чедовека. Преимуществом такого исследования можно назвать то, что самого человека не нужно готовить к исследованию – любая кровь пригодна для изучения.

Перед тем, как приступить к исследованию, специалист берет небольшую пластинку. На ней высечены лунки, в которых присутствуют цоликлоны. В каждое углубление специалист добавляет по одной капле воды. При этом качество жидкости не влияет на точность результатов.

После этого специалист делает укол в палец и забирает определенное количество капиллярной крови. При этом для определения группы крови может использоваться кровь как с консервантом, так и без его использования.

Учитывайте, что для получения точного результата необходимо четко следовать всем правилам. Важно, чтобы соблюдались параметры окружающей среды: помещение должно быть светлым, проветриваемым, с определенным уровнем влажности.

Также следите, чтобы кровь была взята правильно, а реагенты – с нормальным сроком годности и не вскрытыми.

После этого специалист в каждое углубление, куда вы заранее добавили каплю жидкости, опускается 1 капля крови пациента. Специалист берет стеклянную палочку, после чего тщательно перемешивает компоненты.

Это необходимо для того, чтобы растворить цоликлоны. После этого на специальную планшетку наносятся по 1 капле каждого антитела на расстоянии нескольких миллиметров друг от друга. При этом необходимо использовать стеклянную палочку, которая не влияет на протекание реакции.

Располагать реагенты лучше всего следующим образом – А, В, АВ. После каждой капли размещайте небольшое количество человеческой крови, после чего постепенно перемешивайте компоненты. Следите, как происходит реакция.

Первые результаты от проведенного исследования вы сможете оценить уже через 5-10 секунд после начала анализа. Обычно уже спустя это время лаборант делает вывод о наличии либо отсутствии склеившихся эритроцитов. Такой процесс называется агглютинацией.

Именно это позволяет сделать вывод об определенной группе крови человека. Если же никаких изменений не происходит, то пациент отправляется на дополнительные исследования и диагностичесаие исследования.

Интерпретация результатов

Определение группы крови с помощью цоликлонов основано на визуальном исследовании. Врач должен определить, как жидкость взаимодействует с веществом. Возможно протекание множество различных реакций.

Расшифровка выглядит следующим образом:

  1. Кровь относится к 1 группе, если во всех образцах крови отсутствует реакция.
  2. Кровь относится ко 2 группе, если кровяные клетки начали взаимодействовать с цоликлоном анти-А.
  3. Кровь относится к 3 группе, если эритроциты склеились с цоликлоном анти-В.
  4. Кровь относится к 4 группе, если кровь взаимодействует со всеми веществами.

Для обучения максимально точных и правильных результатов, а также для определения резус-фактора, во все биоматериалы добавляют цоликлоны АВ. Если же кровь сворачивается, врач делает вывод о положительном резусе, если изменений не происходит – об отрицательном.

Что нужно помнить при проведении анализа?

Чтобы определение группы крови с помощью цоликлоном было максимально точным и достоверным, необходимо придерживаться следующих условий:

  • Реагенты необходимо хранить при 2-8 градусов тепла. При этом они должны быть плотно закрыты в специальных флаконах.
  • Категорически запрещено использовать цоликлоны с истекшим сроком годности. В таком случае препарат теряет эффективность, может показать совершенно неправильный результат.
  • Проводить исследование необходимо в светлом и проветриваемом помещении, которое защищено от грязи, пыли и других внешних факторов.
  • Обязательно соблюдайте пропорции при нанесении реагентов и биоматериала на поверхность планшетки.
  • Не допускайте, чтобы в одной капли крови смешивались реагенты разных групп. В противном случае вам придется полностью переделывать анализ.
  • Не стоит использовать слишком большое количество крови, так как реагент может не прореагировать с каждой клеткой.

Длительность анализа составляет не менее 3 минут. Если же врач не может сделать однозначный вывод об конкретной группе крови, исследование может затянуться на 5 минут.

По прошествии 10 минут кровь начинает подсыхать, сами эритроциты – выпадают в осадок. Такому результату доверять не стоит.

Что может повлиять на результат?

При проведении определения группы крови с помощью цоликлонов необходимо учитывать, что эти организмы крайне зависимы от условий окружающей среды.

Именно по этой причине для получения точного результата необходимо придерживаться всех правил гигиены и температурного режима. Учитывайте, что помещение, в которой проводится исследование, должно быть сухим и чистым, все компоненты крови не должны контактировать между собой.

Даже если самая малая капля крови смешается в другим материалом, жидкость начинает менять свои характеристики – это значительно осложняет процесс проведения анализа.

Кроме того, при проведении исследования необходимо учитывать состояние организма. Возможна панагглютинация крови – состояния, когда эритроциты оседают даже при контакте с физраствором.

Обычно такое состояние возникает могут вовсе не реагировать на раздражители – чаще всего такое встречается у людей, больных лейкозом, и у младенцев.

Учитывайте, что в организме одного человека могут находится разные типы эритроцитов. Такое явление появляется у пациентов, которые в прошлом перенесли серьёзное переливание крови, пересадку костного мозга. В таком случае определение группы крови возможно только при наличии специального оборудования.

Определение группы крови с помощью цоликлонов – наиболее простой, но при этом точный метод определения группы крови. Если специалист будет соблюдать все правила и требования, человек сможет получить точный и безошибочный результат. В таком случае вероятность ошибки крайне мала.

Правила определения группы крови цоликлонами

Очень часто определение группы крови выполняется цоликлонами. Цоликлоны подразделяются на анти-А и анти-В. Их использование в медицине популярно из-за возможности определения не только группы крови. Резус они также демонстрируют. Для этого используется система АВО, которая заменяет обычные сыворотки, основой которых является агглютинирующий изогем.

Чтобы определить группу или резус, реагентами осуществляется поиск указанных выше антигенов, которые присутствуют в эритроцитах. Для этого применяются антитела стандартного типа. Также стандартными эритроцитами выявляются агглютины, вне зависимости от того, используется плазма или специальная сыворотка для исследования. Когда речь идет об анализе донорских образцов, требуется в обязательном порядке определить также и присутствие в сыворотке агглютининов. Применяются для этого эритроциты стандартного типа.

В качестве основы цоликлонов используются гибридомные линии клеток. Получаются они в результате совмещения антителообразующих В-лимфоцитов мышиного происхождения с клетками миеломы того же живого организма. С помощью гибридомов, которые являются индивидуальными, продуцируются антитела гомогенного типа. При этом может быть в итоге только один иммуноглобулический класс. Эти вещества почти полностью повторяют структуру и активность с биологической точки зрения.

Содержание:

  • Подготовка к работе
  • Определение результатов

Подготовка к работе

Чтобы определить цоликлонами группу крови и резус, существует специальный алгоритм. Такая техника работы предполагает лабораторное определение. В лаборатории должны поддерживаться определенные температурные показатели – в пределах от 15 до 25 градусов по Цельсию. Кроме этого, требуется хорошее освещение.

Для хранения всех реагентов используются плотно закрытые сосуды. Это необходимо, чтобы не допустить высыхания. В результате этого процесса может серьезно снизиться активность антител.

Для работы запрещено пользоваться мутными с присутствием хлопьев реагентами. Используется для работы индивидуальная пипетка. Для проведения процедуры предполагается использование планшета, окрашенного в белый цвет с хорошо смоченной поверхностью. За счет такого фактора, как высокая авидность и активность цоликлонов, достаточно одной реагентной серии для использования.

Чтобы выполнить исследование на группу крови, предварительно нужно подготовить все оборудование и реагенты. В частности:

  • подготавливается типовая тарелочка, сухая, на ней будет выполняться весь анализ;
  • подготавливаются цоликлоны обоих типов, а также две пипетки для работы с каждым по отдельности и две палочки, выполненные из стекла, которыми выполняется перемешивание;
  • потребуется одноразовый шприц с иглой, которой осуществляется забор крови.

В лоток, прошедший стерилизацию, выкладываются три шарика, которые предварительно смачиваются спиртом, а также три стерильные салфетки. Для забора потребуется резиновый жгут. Сбор осуществляется в пробирку центрифужного типа без какой-либо жидкости. На ней с помощью стеклографа требуется отчетливо прописать фамилию пациента. Кроме этого, заполняется бланк, который служит лабораторным направлением. Врач-лаборант повторно определит все основные показатели и поставит печать и подпись.

Определение результатов

Чтобы получить верный результат анализа, требуется провести внутривенную пункцию с соблюдением всех правил по забору. Достаточно для определения будет пяти миллилитров.

Цоликлоны анти-А и анти-В в условиях лаборатории наносятся на планшеты. Потребуется одна большая капля. Каждая помечается соответствующими надписями. Рядом с ними необходимо нанести капли крови в небольшом количестве.

Индивидуальная палочка из стекла служит для перемешивания образца и реагентов. Соотношение крови к реагентам должно составлять один к десяти. Для наблюдения реакции достаточно двух с половиной минут.

Всего пяти минут при помешивании капель достаточно для наблюдения результата. Он должен быть оценен врачом. Таблица, расположенная ниже, содержит результаты, на которые стоит ориентироваться при работе с сывороткой при использовании эритроцитов стандартного типа.

Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлонами Исследуемая кровь принадлежит к группе
анти-А анти-В
– – 0(I)
+ – A(II)
– + B(III)
+ + AB(IV)

Если определяется группа крови АВ у новорожденных для исключения аутоагглютинации, то требуется контрольное исследование. Для этого одна капля изотонического раствора хлористого натрия смешивается в указанной выше пропорции с кровью, направленной на исследование. Если реакции агглютинации нет, то кровь действительно соответствует группе АВ.

Для определения резус-фактора алгоритм подготовки используется тот же самый. После того, как все предметы для определения резус-фактора готовы, выполняется исследование.

Для этого на планшет требуется нанести большую каплю реагента анти-D-супер. Рядом в той же пропорции один к десяти наносится капля крови, отправленной на исследование. С помощью индивидуального инструмента производится смешивание реагента и крови, затем оценка результата.

Если процесс агглютинации начался, то кровь имеет положительный резус-фактор, если процесс не начинается, соответственно, речь идет об отрицательном резус-факторе. Стоит подчеркнуть, что у моноклональных реагентов имеются некоторые преимущества в сравнении со стандартными сыворотками. В частности, результат в таком случае куда точнее, а сама процедура более безопасная, безболезненна и не отнимает много времени.

Точное определение группы крови цоликлонами

Многие люди хотят знать, какая группа крови у них. Такой показатель является очень важным для каждого из нас. Может случиться разная ситуация, поэтому обязательно нужно ее знать. Во время операции и при тяжелых родах, возможно, понадобиться срочное переливание крови, поэтому чтобы не терять драгоценные минуты нужно заранее определить свою группу.

Существует в лабораторной практике определение группы крови при помощи цоликлонов. Они являются моноклинальными антителами, которые синтезировали из крови стерильных мышек с помощью генной инженерии. Их применяют для определения группы крови в системе АВО. Обычно цоликлоны применяют вместо обычных сывороток, так как реакция агглютинации и высокая их активность ускоряет процесс выявления группы крови.

Главные антитела называются:

  • анти-А;
  • анти-В;
  • анти-0;
  • анти-АВ.

Именно с их помощью находят резус-фактор и группу крови.

Проведение определения группы и резуса

Таким способом определение группы производят в лабораторных условиях. Температурный режим в лаборатории обязаны поддерживать от + пятнадцати до +двадцати пяти 0С. Освещение помещения необходимо сделать довольно ярким. Реагенты необходимо сохранять в плотно закупоренном виде, так как при высыхании их работоспособность сильно понижается. Цоликлоны с хлопьями и мутным содержимым нельзя использовать для определения группы.

При проведении анализа нужно использовать разные пипетки. Применяется специальная тарелочка или планшет с белой поверхностью и отличными смачивающимися качествами. По 1 серии реагентов анти-А и анти-В можно применить в анализе, так как у них отличная активность и авидность.

Планшет отмечают надписями антител. На поверхность с соответствующей надписью капают 0,1 мл цоликлонов. Оттенки желтого и розового цветов присутствуют в анти-А реагентах, синим, окрашен анти-В.

Около антител капают капельку крови, а затем смешивают ее стеклянной палочкой или углом предметного стекла. Когда нужно смешать следующую пару необходимо обязательно хорошо промыть и вытереть насухо.

Планшетку начинают слегка раскачивать около 2,5 минуты, чтобы агглютинации проходил в правильном режиме. Потом смотрят результат. Наблюдают за процессом без каких-либо вмешательств и дополнительных предметов. Антитела отлично видны лаборанту. Процесс их слияния прекрасно выявлен в виде объемных хлопьев. При определении не склеивания моноклинальных антител они окрашиваются в красный цвет.

Список определения группы крови с помощью этого анализа:

  1. Когда нет склеивания ни с анти-А, ни с анти-В, то такая кровь имеет 1 группу.
  2. Только реагент анти-А взаимодействует с эритроцитами, то — это 2 группа.
  3. Клетки крови соединяются только с анти-В, то такая группа 3.
  4. Если оба антитела соединяются с эритроцитами, то — это группа 4.

При этой проверке могут провести дополнительное исследование, смешивая изотонический раствор хлорида натрия и кровяных телец.

Определение резус-фактора

На поверхность планшетки капают очень большую каплю реагента анти-D, а рядышком очень маленькую капельку крови. Все это смешивают и ждут результата. Когда происходит агглютинация, значит, кровь с положительным резусом, а если ее нет, то резус-фактор — отрицательный.

Факторы, влияющие на отсутствие соединения антител с эритроцитами

Существуют определенные причины, по которым агглютинация может остаться незамеченной:

  • температура в помещении выше 25 0С, поэтому реакция запоздалая или очень слабо выражена;
  • может быть, неправильное соотношение антител и крови, капля их должна превышать кровяную в восемь раз;
  • в эритроцитах слабая реакция склеивания;
  • антитела неправильно хранятся или срок их действия уже истек.

Действия при ошибочной установке склеивания

  • появляются монетные столбики, необходимо добавить физраствор;
  • температура в помещении довольно низкая, поэтому эритроциты соединяются в зерна;
  • эритроциты могут соединяться со всеми сыворотками;
  • если долгое время процесс взаимодействует с воздухом;
  • пробирки маркированы нечетко, тогда лучше провести реакцию с другими сыворотками.

Современная медицина шагнула далеко вперед. Лабораторные исследования проводятся суперсовременными реагентами и приборами. Когда возникает непредвиденная ситуация врачи могут в быстрые сроки определить не только группу крови, но и резус. 

Конечно, все люди обязаны знать, какая кровь и резус его ребенка. Люди, имеющие наследственные заболевания, связанные с кровью должны иметь специальные визитки, на которых указана группа и резус крови. Посещайте почаще врачей и не бойтесь их, ведь всегда запущенная болезнь лечится дольше, чем ее можно предотвратить на ранних стадиях. В наши дни своевременное обращение к доктору может спасти вам жизнь.

Смотрите также