Главная » Статьи » Правила подсчета элементов осадка мочи

Правила подсчета элементов осадка мочи


Методы количественного определения форменных элементов в моче

При обычном микроскопическом исследовании осадка мочи не всегда удается выявить патологию, особенно в начальных стадиях заболевания. Несоблюдение стандартных условий при проведении данного исследования, когда не учитывается количество выделенной мочи, объем мочи, взятой для центрифугирования, площадь поля зрения микроскопа, толщина слоя мочи и другие моменты, значительно снижает ценность анализа и ограничивает возможность динамического наблюдения за патологическим процессом. Поэтому методы количественного определения форменных элементов в моче, позволившие в значительной мере объективизировать исследование мочи, получили значительное распространение.

Количественные методы микроскопического исследования осадка мочи по сравнению с ориентировочным методом обладают следующими преимуществами:

  • строго стандартизованы,

  • подсчет элементов производится в счетной камере,

  • подсчет лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров производится в определенном объеме (1 мл) или за определенное время (сутки, час, минута).

К методам количественного определения форменных элементов в моче относятся:

  • метод Каковского-Аддиса,

  • метод Нечипоренко,

  • метод Амбурже.

В практике отечественных лечебных учреждений большую распространенность получил метод Нечипоренко, как наиболее простой и удобный.

Независимо от избранного метода определения количества форменных элементов в моче, необходимо строгое соблюдение стандартных условий, что обеспечивает воспроизводимость и точность результатов.

Клиническое значение методов количественного определения форменных элементов в моче

Методы количественного определения форменных элементов в моче:

позволяют определить точное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров, выделенных с мочой;

выявляют скрытую (не обнаруживаемую при ориентировочной микроскопии) лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита;

помогают в диагностике заболеваний почек (для многих болезней почек характерно определенное соотношение между клеточными элементами, их диссоциация: при хроническом пиелонефрите количество лейкоцитов, как правило, преобладает над числом эритроцитов (характерное соотношение может отсутствовать при калькулезном пиелонефрите), а при хроническом гломерулонефрите и артериосклерозе почек отмечается обратная зависимость);

позволяют проводить динамическое наблюдение за течением заболевания и осуществлять контроль за проводимым лечением.

Следует отметить, что при отрицательных результатах количественного исследования лейкоцитурии у пациентов с подозрением на латентно текущий хронический пиелонефрит следует проводить повторный подсчет лейкоцитов после провокационной пробы (например, преднизолонового теста).

Диагностическая ценность количественных методов исследования мочи увеличивается, если одновременно с подсчетом количества клеток определять их морфологические особенности, то есть качественный состав лейкоцитов в осадке мочи.

Метод Каковского-Аддиса

Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время.

Подготовка пациента. При исследовании мочи по методу Каковского-Аддиса во избежание получения заниженных данных, обусловленных распадом форменных элементов в нейтральной или щелочной моче, а также в моче с низким удельным весом, пациенту в течение суток, предшествовавших исследованию, назначают мясную диету и ограничивают прием жидкости. При этих условиях обычно стандартизуется удельный вес мочи (1020 - 1025) и ее pH (5,5).

Сбор мочи. Классический вариант исследования мочи по методу Каковского-Аддиса требует строго соблюдать правила сбора мочи и ее хранения в течение длительного времени. При этом мочу собирают в течение суток: утром больной освобождает мочевой пузырь, а затем в течение 24 часов собирает мочу в сосуд с 4 - 5 каплями формалина или 2 – 3 кристаллами тимола, мочу следует хранить в холодильнике.

Однако на практике чаще пользуются другим, более простым способом сбора мочи - мочу собирают за 10 – 12 часов. При этом способе страдает точность результата. При данном варианте сбора мочи для метода Каковского-Аддиса перед сном больной опорожняет мочевой пузырь и отмечает это время. Утром, через 10 – 12 часов после вечернего мочеиспускания, пациент мочится в приготовленную посуду, вся моча отправляется в лабораторию для исследования. На бланке направления должно быть указано, в течение какого времени была собрана моча. При невозможности удержать мочу в течение 10 - 12 часов пациент собирает ее в несколько приемов, соблюдая условия ее хранения. У женщин мочу собирают катетером.

Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп.

Ход исследования: доставленную мочу тщательно перемешивают, измеряют ее количество и отбирают для исследования количество, соответствующее 12 минутам или 1/5 часа. Это количество определяют по формуле:

Q = V/(t*5), где

Q – количество мочи (в мл), выделенное за 12 минут,

V – общий объем собранной мочи (в мл),

t – время (в часах), за которое собрана моча,

5 – число для расчета объема мочи, выделенной за 12 минут.

Рассчитанное количество мочи помещают в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3500 об/мин, или 5 минут при 2000 об/мин. Отсасывают верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок с надосадочной жидкостью тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева (или другую счетную камеру). В этой камере подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров (эпителиальные клетки мочевыводящих путей не считают).

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.

Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи (x). При подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3.

Затем, исходя из того, что для исследования было взято 0,5 мл, или 500 мм3, полученные количества форменных элементов в 1 мм3 умножают на 500 (а при осадке в 1 мл – на 1000), и получают количество форменных элементов, выделенных с мочой за 12 минут. В пересчете на 1 час это количество умножают на 5, а при расчете за сутки – еще на 24. Так как, 500, 5 и 24 являются постоянными числами, то соответственно полученное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров (x) умножают на 60 000, если в пробирке для исследования было оставлено 0,5 мл мочи, или на 120 000, если осадок был обильный и был оставлен 1 мл.

Нормальные значения форменных элементов для метода Каковского-Аддиса

Число Каковского-Аддиса для нормальной мочи составляет до 1 000 000 для эритроцитов, до 2 000 000 для лейкоцитов, до 20 000 для цилиндров. Некоторые авторы указывают другие цифры для метода Каковского-Аддиса: эритроцитов – до 2 000 000 – 3 000 000, лейкоцитов – до 4 000 000, цилиндров – до 100 000.

Преимущество метода Каковского-Аддиса. Преимущество метода заключается в том, что при сборе мочи за 24 часа учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой.

Недостаток метода Каковского-Аддиса.

  • не каждый больной может удержать мочу в течение 12 часов, особенно при никтурии;

  • не каждый пациент может самостоятельно полностью опорожнить мочевой пузырь (аденома, рак предстательной железы);

  • получение мочи путем катетеризации возможно лишь в лечебном учреждении;

  • метод Каковского-Аддиса трудно применим в детской практике;

  • повышение показателей при данном исследовании может наблюдаться не только при патологии почек, но и при хронических гнойных процессах, воздействии ядов (отравление сулемой, угарным газом), гепаринотерапии;

  • главный недостаток метода – более низкая информативность: при сборе мочи за 12 или 24 часа частями необходимость длительного хранения мочи ведет к частичному лизису форменных элементов (особенно лейкоцитов) за счет щелочного брожения, что приводит к ложным результатам;

  • метод Каковского-Аддиса не является экспресс-методом;

  • метод непригоден при одностороннем поражении почек (дает суммарный результат).

Метод Амбурже

Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту.

Подготовка больного. Больному ограничивают прием жидкости днем и исключают ночью.

Сбор материала осуществляется в соответствии с основными правилами сбора мочи, отличительной особенностью сбора мочи для метода Амбурже является то, что утром больной опорожняет мочевой пузырь, замечает время и ровно через 3 часа собирает мочу для исследования. Мочу сразу отправляют в лабораторию на исследование.

Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп.

Ход исследования: доставленную порцию мочи измеряют, хорошо перемешивают и отливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин, затем осторожно отсасывают верхний слой, оставляя точно 1 мл вместе с осадком. Осадок с надосадочной жидкостью перемешивают и взвесью заполняют счетную камеру. Раздельно подсчитывают число лейкоцитов и эритроцитов во всей камере.

Производят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи (x). Если подсчет производился в камере Горяева или Бюркера x=H/0,9, где H - количество подсчитанных в камере клеток (отдельно лейкоцитов и эритроцитов), а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x=H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3. Расчет числа форменных элементов, выделенных за 1 минуту, проводят по формуле:

A=x•(1000•V)/(S•t), где

A – количество клеток, выделенных с мочой за минуту,

x – число клеток в 1 мкл осадка (раздельно для лейкоцитов и эритроцитов),

1000 – объем осадка (в кубических миллиметрах),

V – объем мочи, выделенной за 3 часа (в миллилитрах),

S – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах),

t – время, за которое собрали мочу (в минутах).

Нормальные значения. В норме количество лейкоцитов в минутном объеме мочи составляет 2000, эритроцитов – 1000. Иногда в литературе можно встретить другие цифры нормы: лейкоцитов в минутном объеме мочи – 2500, эритроцитов – 2000.

При необходимости цифры минутного объема можно рассчитать на 24 часа и таким образом получить число Каковского-Аддиса.

Цель исследования. Технология «Клинический лабораторный анализ мочи: определение количества форменных элементов в моче»

Cтандартизованная аналитическая технология

клинического лабораторного анализа мочи: определение количества форменных элементов в моче

Технология «Клинический лабораторный анализ мочи: определение количества форменных элементов в моче» выполняется с целью диагностики

и дифференциальной диагностики заболеваний почек, мочевого пузыря, мочевыводящих путей, а также для наблюдения за динамикой патологического процесса и оценки эффективности терапии

Определение количества форменных элементов (лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров) в моче – выполняется с использованием нескольких методик в зависимости от поставленной задачи: определить количество форменных элементов, выделяемых с мочой за сутки, скорость выделения клеток (в мин.) или их количество в определенном объеме мочи (в мл). 2. Требования к обеспечению выполнения технологии

2.1. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу

2.1.1. Перечень специалистов с высшим и средним образованием, участвующих в выполнении данной технологии:

- врач клинической лабораторной диагностики или биолог;

- специалист со средним медицинским образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, фельдшер-лаборант, лаборант). 2.1.2. Требования к образованию специалистов

Врачи клинической лабораторной диагностики или биологи должны иметь последипломное образование и периодически проходить повышение квалификации в установленном порядке. Врачи должны иметь сертификат специалиста. Врачи или биологи выполняют микроскопическое исследование – подсчет клеток и др. форменных элементов в моче.

Специалисты со средним образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, фельдшер-лаборант, лаборант) должны иметь соответствующую квалификацию по диплому, сертификат специалиста и проходить в установленном порядке повышение квалификации. Они проводят макроскопическую оценку, измерение количества, центрифугирование мочи для получения осадка, который используется для подсчета форменных элементов под микроскопом, измерение рН мочи.

П р и м е ч а н и е 1 ─ допускается проведение подсчета форменных элементов в моче специалистами со средним образованием (медицинскими технологами, фельдшерами-лаборантами), квалификация которых подтверждена. Знания и умения специалистов, выполняющих данное исследование, должны соответствовать требованиям образовательных стандартов. (2).

2.2. Требования к обеспечению безопасности труда медицинского персонала

Лица, отвечающие за получение, доставку и анализ образцов мочи, должны быть осведомлены о биологической опасности, так как все образцы биологического материала считаются потенциально инфицированными. Персонал должен соблюдать общие правила техники безопасности, принятые для работы в клинико-диагностических лабораториях. Рекомендуется строго соблюдать общие меры предосторожности при ручной обработке образцов мочи и работе с другими материалами, используемыми при выполнении анализа.

Для обеспечения безопасности работы в лаборатории необходимо следовать правилам стандарта ГОСТ Р ИСО 52095 —2007 [1].

Правила биологической безопасности:

- прием доставленного в лабораторию образца мочи и работа с ним проводится в индивидуальных средствах защиты (халаты, резиновые перчатки);

- после окончания работы проводится дезинфекция лабораторного инструментария, стеклянных изделий, поверхности рабочих столов и помещений лаборатории. Все работы проводятся в резиновых перчатках.

Потенциально опасные отходы, загрязненные остатками биологического материала, образующиеся в процессе выполнения технологии, дезинфицируют. После дезинфекции отходы собирают в одноразовую твердую герметическую упаковку, маркируют надписью с указанием класса отходов, («Опасные отходы, класс Б, или др.), кода подразделения, фамилии ответственного за сбор отходов лица, затем помещают в специальные контейнеры, установленные в определенных местах на территории лечебного учреждения [2].

Правила работы со специальным оборудованием и соблюдение пожарной безопасности.

Все сотрудники должны выполнять инструкции и правила техники безопасности, изложенные в технических паспортах к электрическим приборам, используемым при выполнении технологии (микроскопы, центрифуги); персонал, работающий с реактивами, должен быть обучен обращению с ними, обязан использовать средства персональной защиты и соблюдать правила личной гигиены.

Для предупреждения пожаров необходимо соблюдать правила пожарной безопасности в соответствии с действующими нормативными документами.

2.3.Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование

2.3.1. Микроскоп бинокулярный с осветителем.

2.3.2.. Центрифуга лабораторная.

Для приготовления осадка мочу центрифугируют при относительном центробежном ускорении 400 G в течение 5 мин. Угловая скорость центрифугирования зависит от радиуса центрифуги. Угловую скорость вращения ротора в об/мин либо рассчитывают по формуле, либо определяют по номограмме Доула и Котциаса. При использовании центрифуги необходимо строго следовать инструкции производителя.

П р и м е ч а н и е 2 — G – это относительное центробежное ускорение, которое зависит от радиуса центрифуги. В инструкции к современным центрифугам указывается радиус и формула пересчета центробежного ускорения в угловую скорость. Предлагается следующая формула пересчета:

об/мин = [√(G/r х 1,118)] х 1000,

где: G - относительное центробежное ускорение, r - радиус центрифуги в мм.

П р и м е ч а н и е 3 ─ при использовании центрифуги старого образца типа ОПН-1 и аналогичных с фиксированной угловой скоростью время центрифугирования увеличивается (при 1500 об/мин – до 10 мин).

2.3.3. Счетчик-калькулятор для подсчета лейкоцитарной формулы крови (для подсчета клеток и цилиндров в образце мочи).

2.3.5. Стеклянные (пластиковые) изделия:

- Мерные центрифужные пробирки (10 мл).

Для центрифугирования мочи используются мерные центрифужные пробирки из cтекла или пластика, которые должны иметь коническую форму для концентрирования осадка, градуировку, закрываться крышками для уменьшения опасности разбрызгивания биологического материала. Пробирки должны быть чистыми и маркированными для правильной идентификации пациента.

- Счетные камеры: камера Горяева, камера Фукса-Розенталя, слайд-планшеты.

Счетные камеры представляют собой толстое предметное стекло с нанесенными на них поперечными желобками, которые разделяют три поперечно расположенных плоских площадки. Средняя площадка расположена ниже боковых на 0,1 мм в камере Горяева или 0,2 мм в камере Фукса-Розенталя и разделена поперечным желобком на две половины, на поверхности которых нанесены две одинаковых сетки. Покровное стекло притирается к боковым площадкам до появления «радужных» колец. Каплю исследуемой жидкости наносят на выступающий конец средней площадки, в силу капиллярности капля подтекает под покровное стекло и покрывает соответствующую сетку. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделенных на 16 малых. Площадь сетки 9 мм 2, объем камеры примерно соответствует 0,9 мкл (точный объем указан в инструкции к камере).

Сетка камеры Фукса-Розенталя состоит из 16 больших квадратов, каждый из которых разделен на 16 малых. Площадь сетки – 16 мм 2, глубина камеры – 0,2 мм, объем камеры – 3,2 мкл.

Подсчет форменных элементов в осадке мочи проводят во всем объеме камеры.

П р и м е ч а н и е – 4. Использование камер позволяет получить стандартную толщину препарата, а наличие сетки, нанесенной на поверхность камеры, дает возможность рассчитать количество форменных элементов в определенном объеме биологического материала.

Счетная камера Горяева используется преимущественно для подсчета форменных элементов в моче, а камера Фукса-Розенталя – для подсчета клеток в ликворе. Однако при необходимости они могут использоваться для подсчета клеток в другом жидком биологическом материале.

Количественные характеристики камер представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Количественные характеристики камер Горяева и Фукса-Розенталя

Параметры камер Камера Горяева Камера Фукса-Розенталя
Глубина мм 0,1 0,2
Площадь сетки мм2 9 16
Объем мкл 0,9 3,2

Использование пластиковых слайд-планшетов значительно ускоряет и упрощает процедуру анализа.

Пластиковые слайд-планшеты представляют собой прозрачную пластиковую пластину размером с предметное стекло, покрытую тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Она закреплена так, что образуется 10 камер (карманов).

Расстояние между основой слайд-планшета и «покровным стеклом» стабильно и равно 0,1 мкм, что позволяет клеточным элементам располагаться однослойно.

Слайд-планшет рассчитан для микроскопии мочи 10 пациентов.

Изделия не подлежат мытью, а только дезинфекции и утилизации.

В настоящее время предлагается два вида слайд-планшетов – без сетки и с нанесенной на пластинку каждой камеры слайд-планшета сеткой.

Слайд-планшеты без сетки могут использоваться для микроскопии осадка при проведении общего анализа мочи (без подсчета количества клеток в определенном объеме). Слайд-планшеты с нанесенной на пластинку сеткой могут использоваться как для микроскопии осадка при проведении общего анализа мочи, так и для количественного подсчета форменных элементов.

Заполнение слайд-планшета мочой производится через выемку (паз) в верхней пластинке.

Сетки слайд-планшетов отличаются у разных производителей формой и объемом. Каждая сетка слайд-планшета состоит из малых окружностей или квадратов, которые объединены в секции. Секция – это часть сетки слайд-планшета, содержащая определенное количество окружностей или малых квадратов (в большинстве случаев 9). Границы секций выделены либо формой сетки, либо дополнительной разделительной линией в пределах сетки слайд-планшета и хорошо различимы при микроскопии.

Например, в камере слайд-планшета может быть одна секция, состоящая из 9 окружностей (объем секции 0,1 мкл), или две таких секции; могут быть участки, представленные в виде больших квадратов, разделенных на 9 или 16 малых квадратов, сгруппированных в секции по 2, 3, 5, 9 или 10 больших квадратов в каждой секции.

При использовании слайд-планшетов для подсчета форменных элементов необходимо иметь инструкцию, в которой должен быть указан объем биологического материала, в котором проводится подсчет элементов осадка мочи (одного большого квадрата или секции и общий объем камеры (кармана). При отсутствии исходных данных пользоваться слайд-планшетами для подсчета форменных элементов не допускается.

П р и м е ч а н и е 5 - если в инструкции к слайд-планшетам общий объем камеры не указан, его можно рассчитать из приведенных в инструкции данных: например, если указаны длина, ширина и глубина камеры общий объем камеры получают путем умножения этих величин.

2.4. Прочий расходуемый материал

-Перчатки резиновые.

-Дезинфицирующие средства.

3. Характеристика методики выполнения технологии исследования мочи

3.1 Получение образцов мочи.

Для правильного проведения преаналитического этапа необходимо соблюдать требования стандарта ГОСТ Р 53079.4—2008 [3].

3.2 Идентификация образца

В направлении на исследование должна быть включена следующая информация: фамилия и инициалы пациента, возраст или дата рождения, пол, отделение медицинского учреждения и палата в стационаре, номер медицинской карты (идентификационный номер), диагноз, дата и время сбора образца мочи, время доставки образца в лабораторию.

Немаркированные или неправильно маркированные образцы не пригодны для исследования и отбрасываются, о чем необходимо уведомить врача, назначившего анализ.

3.3 Приемлемость образца

Правильность результатов исследования во многом зависит от качества доставленного образца, поэтому необходимо неукоснительно следовать правилам хранения и транспортировки образцов мочи (приложение А).

После доставки образца мочи в лабораторию сотрудник лаборатории, принимающий материал, должен проверить правильность оформления направления на анализ, маркировку посуды (код или фамилия больного и другие данные должны быть идентичны данным, указанным в бланке-направлении) и зарегистрировать поступивший материал.

3.4. Определение форменных элементов в 1 мл мочи по методу Нечипоренко.

Подсчет количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи производят с помощью счетной камеры или слайд-планшета.

3.4.1. Образец мочи для исследования: средняя порция утренней мочи. Допускается сбор средней случайной порции мочи. Правила сбора, хранения и транспортировки мочи изложены в приложении А («Сбор образцов мочи, условия хранения и доставки. Преаналитический этап»).

3.4.2. Ход определения.

Перед исследованием необходимо проверить рН мочи, который отмечают в бланке ответа, так как в моче со щелочной реакцией может быть частичное разрушение клеток.

При подсчете форменных элементов в моче проводится их концентрирование. В мерную центрифужную пробирку после тщательного перемешивания наливают 10 мл мочи, центрифугируют при относительном центробежном ускорении 400G в течение 5 мин.

П р и м е ч а н и е 6 - В центрифугах старого образца, диаметром 37см, наличии трех угловых скоростей (1000, 1500 и 3000 об/мин), без плотно закрывающейся крышки и таймера центрифугирование рекомендуется проводить при угловой скорости 1500 об/мин в течение 10 мин.

После центрифугирования отбирают верхний слой, оставляя вместе с осадком 1 мл. Таким образом, соотношение взятого для центрифугирования количества мочи и оставленного с осадком составляет 10:1, то есть моча концентрируется в 10 раз.

П р и м е ч а н и е 7 - Объем мочи для центрифугирования может меняться, так как при использовании пробирок для транспортировки мочи он не может быть больше 8, объем мочи для микроскопии осадка должен быть стандартным, т.е. 1мл (1000мкл).

Заполняют счетную камеру Горяева (или Фукса-Розенталя).

Подсчитывают отдельно количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров (эпителиальные клетки не считают) и рассчитывают содержание форменных элементов в 1 мкл осадка мочи по формуле 1.

А

Х = -------------------(1)

V кам

где Х число форменных элементов в 1 мкл, А – число форменных элементов, полученных во всей камере, Vкам – объем камеры (мкл).

Установив количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи, рассчитывают их количество в 1 мл мочи по формуле 2:

X • 1000

N= -------------------(2)

V

где N - количество форменных элементов в 1 мл мочи, Х - число форменных элементов в 1 мкл, 1000 – количество мочи, оставленное с осадком для микроскопии (мкл), V – объем мочи, взятой для центрифугирования (в мл).

П р и м е ч а н и е 8- При использовании камеры Горяева, если объем взятой для центрифугирования мочи составляет 10 мл, а объем оставленной с осадком мочи - 1 мл (1000 мкл), формула приобретает вид:

А • 1000

N = --------------- = А • 111 (3)

0,9 • 10

где А – количество форменных элементов во всей камере Горяева, 0,9 – объем камеры Горяева в мкл. 1000 – объем мочи для микроскопии осадка в мкл, 10 – объем мочи, взятой для центрифугирования в мл.

Подсчет количества цилиндров: при отсутствии цилиндров или их количестве 2 и более в камере ограничиваются просмотром одной камеры Горяева и расчет проводят по указанной выше формуле; при обнаружении в камере одного цилиндра дополнительно просматривают на наличие цилиндров 4 камеры Горяева, а расчет цилиндров проводят по той же формуле, но объем одной камеры 0,9 мкл заменяют на объем 5 камер.

Подсчет форменных элементов при помощи слайд-планшетов.

Для правильного подсчета форменных элементов при помощи слайд-планшетов необходимо знать объем исследуемого образца, в котором производили подсчет форменных элементов (V пробы мкл).

Подсчет форменных элементов рекомендуется проводить по всей сетке камеры слайд-планшета, , так как чем больше количество анализируемого материала, тем меньше статистическая погрешность. Однако при большом количестве клеток их подсчет допускается проводить в одном большом квадрате или одной секции сетки камеры, но при этом окончательный расчет проводится, исходя из реального объема биологического материала, в котором считали клетки. Объем исследуемого материала в секции и в сетке камеры отличается в разных образцах слайд-планшетов и указан в инструкции к изделию.

Вычисление количества форменных элементов в моче проводится по формуле 4.

A • 1000

N = ------------------------------- (4)

(V пробы мкл) •V

N– количество клеток в 1 мл мочи,

A – число клеток, подсчитанных в известном объеме (V пробы мкл) мочи,

1000 – количество мочи, оставленное с осадком для микроскопии (мкл),

V пробы мкл – объем пробы, в котором проводился подсчет клеток,

V – объем мочи, взятой для центрифугирования (мл).

При объеме мочи, взятом для центрифугирования, равном 10мл расчет проводится по формуле 5.

A • 100

N = ------------------------ (5)

V пробы мкл

В инструкциях к некоторым слайд-планшетам указывается коэффициент пересчета количества форменных элементов на 1 мкл (называемый также «коэффициентом перевода» или «фактором приведения» к 1 мкл). С учетом этого коэффициента расчет проводят по формуле 6:

A • К • 1000

N = ---------------------------------- (6)

Z • V

где N– количество клеток в 1 мл мочи

A – число клеток, подсчитанных в определенном количестве секций или больших квадратов,

К – коэффициент пересчета на 1 мкл (фактор приведения к 1 мкл),

1000 – количество мкл мочи, оставленное с осадком для микроскопии,

Z – количество секций или больших квадратов, в которых проводили подсчет,

V – объем мочи, взятый для центрифугирования (мл).

Подсчет количества цилиндров при помощи слайд-планшетов:

При отсутствии цилиндров над всей сеткой камеры их в расчет не принимают.

При наличии 2-х и более цилиндров расчет производится аналогично клеткам.

При наличии 1 цилиндра рекомендуется посчитать цилиндры на малом увеличении микроскопа во всей камере слайд-планшета над сеткой и вне ее, т.е. по всему карману слайд-планшета, так как использование при работе со слайд-планшетами дополнительно камеры Горяева нецелесообразно, а еще нескольких камер слайд-планшетов для одного анализа нерентабельно.

Расчет количества цилиндров проводится по одной из приведенных формул (4 или 5), при этом V пробы в мкл соответствует общему объему камеры в мкл. Полученное значение округляется до целого числа.

Референтные величины: в одном мл мочи выделяется до 2000 лейкоцитов и до 1000 эритроцитов, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного цилиндра на 5 камер Горяева (до 20 в 1 мл).

3.5. Определение количества форменных элементов, выделенных за сутки, по методу Каковского-Аддиса.

По методу Каковского-Аддиса проводят подсчет количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров), выделенных за сутки, с помощью счетной камеры или слайд-планшетов.

3.5.1. Сбор мочи.

Классический вариант исследования требует сбора мочи за 24 часа при условии строгого соблюдения правил хранения мочи на протяжении этого периода (см. приложение А «Сбор образцов мочи. Условия хранения и доставки. Преаналитический этап»).

Нейтральная или щелочная реакция мочи, а также ее низкая относительная плотность может вызвать разрушение клеток, поэтому требуется подготовка пациента: в течение суток, предшествующих исследованию, пациенту назначают мясную пищу с ограничением жидкости, чтобы получить мочу кислой реакции и уменьшить число мочеиспусканий.

Для упрощения процедуры сбора мочи, снижения влияния внешних факторов и уменьшения риска разрушения форменных элементов в процессе хранения допускается собирать мочу в течение 10 часов ночного времени. В 10 часов вечера перед сбором мочи пациент опорожняет мочевой пузырь. С 10 часов вечера до 8 часов утра пациент опорожняет мочевой пузырь в контейнер для сбора мочи, соблюдая все условия сбора (консерванты) и хранения (охлаждение), как при сборе мочи за сутки (см. приложение А). Всю полученную порцию доставляют в лабораторию (интервал времени – 10 часов). Время сбора мочи отмечают в бланке-направлении.

3.5.2. Ход исследования.

Собранную мочу тщательно перемешивают и измеряют объем и рН для предварительной оценки степени разрушения форменных элементов. Для исследования получают осадок из количества мочи, выделенного за 12 мин., которое рассчитывают по формуле 7:

V

Q= -------- , (7),

t• 5

где:

Q - количество мочи, выделенной за 12 мин. (1/5 часть часа),

V – количество мочи, собранной за все время сбора (в мл),

t - время сбора мочи (часы),

5 – коэффициент пересчета на 1/5 часть часа.

Рассчитанное количество мочи центрифугируют в мерной центрифужной пробирке при 400 G в течение 5 мин.

П р и м е ч а н и е 9 - В центрифугах старого образца, диаметром 37см, наличии трех угловых скоростей (1000, 1500 и 3000 об/мин), без плотно закрывающейся крышки и таймера центрифугирование рекомендуется проводить при угловой скорости 1500 об/мин в течение 10 мин.

Отбирают верхний слой пипеткой, оставляя 1 мл (1000 мкл) мочи с осадком, тщательно перемешивают и заполняют счетную камеру (Горяева, Фукса-Розенталя или камеру слайд-планшета). Подсчитывают отдельно количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров (эпителиальные клетки не считают) и рассчитывают содержание форменных элементов в 1 мкл осадка мочи по формуле 1(см. метод Нечипоренко).

П р и м е ч а н и е 10 - При использовании слайд-планшетов объем всей камеры берется из инструкции, при наличии большого количества клеток их допускается считать в одной секции слайд-планшета, тогда в формулу вводится объем секции, указанный в инструкции.

Количество форменных элементов, выделенных с мочой за сутки (24 часа), рассчитывают по формуле 8:

В= Х ● 1000 ● 5 ● 24 = Х ● 120000 (8),

где: В – число форменных элементов, выделенных за сутки,

Х – число форменных элементов в одном мкл мочи, оставленной для исследования с осадком,

1000 – количество мочи, оставленной с осадком из 12-минутной порции в мкл;

умножение на 5 и 24 дает расчет количества клеток на 24 часа.

П р и м е ч а н и е 11: ─ При отсутствии цилиндров или их количестве 2 и более расчет проводят по указанной выше формуле. При обнаружении одного цилиндра дополнительно просматривают еще одну камеру Фукса-Розенталя или 4 камеры Горяева. При использовании слайд-планшетов цилиндры считаются по всей камере слайд-планшета, то есть над сеткой и вне ее. Расчет количества цилиндров в 1 мкл проводят, исходя из общего объема просмотренного биологического материала.

Референтные величины суточной экскреции форменных элементов с мочой: до 2 млн лейкоцитов, до 1 млн эритроцитов и до 20 000 цилиндров.

3.6. Определение количества форменных элементов, экскретируемых с мочой за 1 мин, по методу Амбурже

Проводят определение с помощью счетной камеры или слайд-планшета количества форменных элементов, выделенных с мочой за 1 мин.

3.6.1. Сбор мочи для исследования:

собирают мочу за 3 часа (180 мин). Пациент опорожняет мочевой пузырь, эту порцию выливают и отмечают время, через 3 часа собирают всю порцию мочи и доставляют ее в лабораторию для исследования.

3.6.2. Ход определения.

Мочу тщательно перемешивают, отбирают 10 мл и центрифугируют, как описано выше. Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя 1 мл мочи с осадком, перемешивают и заполняют счетную камеру. Производят подсчет клеток в 1 мкл, как в методе Нечипоренко (формула 1).

Расчет форменных элементов, выделенных за 1 мин, проводят по формуле 9:

Х • 1000 • V3 час

Н = ----------------------- (9),

V • t

где: Н – число клеток в минутном объеме мочи, Х– число клеток в 1 мкл осадка, 1000 мкл – количество мочи, взятое с осадком для микроскопии , V 3час– объем мочи за 3 часа, V - количество мочи , взятое для центрифугирования (мл), t – время, за которое собрали мочу в мин. (180 мин).

Референтные величины: за 1 мин с мочой выделяется до 2000 лейкоцитов, до 1000 эритроцитов, до 20 цилиндров.

4. Регистрация результатов подсчета форменных элементов в моче

Каждый сотрудник лаборатории должен использовать одни и те же формы (бланки результатов анализов) для сообщения полученных результатов. Форма бланка должна содержать название лаборатории и медицинский организации; информацию о пациенте, достаточную для его идентификации; название биологического материала и всех исследуемых показателей; дату получения пробы и, если это необходимо, время получения; результаты исследования; референтные интервалы; фамилию и подпись сотрудника, выполнившего исследование. Порядок выдачи результатов должен быть определен инструкцией, утвержденной руководителем медицинской организации

5. Обеспечение качества выполнения технологии анализа

5.1. Программы обеспечения качества

Программы обеспечения качества включают последовательный мониторинг каждого аспекта процедуры для обеспечения гарантии достаточно высоких возможностей диагностики и наблюдения состояния пациента. Программы обеспечения качества должны включать все этапы работы и устанавливать связи между всеми составляющими процесса (пациент, лаборатория, клиницист). Контроль необходим и на этапах взятия образца, хранения, доставки, ручной обработки, ведения регистрации, выдачи документов. Нуждается в контроле также и техническая компетентность персонала, непрерывное продолжение образования. Для успешного осуществления всех контрольных мероприятий необходимо следовать правилам, изложенным в стандарте ГОСТ Р ИСО 15189 —2009 [4].

5.2. Ведение регистрации контрольных мероприятий

Регистрация проведения контроля должна осуществляться на всех уровнях: преаналитическом, аналитическом и постаналитическом, для каждого этапа должны быть разработаны и документированы правила проведения всех процедур.

Для клиницистов должна быть разработана форма запроса на исследование, включающая дату назначения и взятия пробы, информацию для идентификации пациента, диагноз, сведения о приеме лекарств или диагностических процедурах, если они могут влиять на результаты исследования.

Методика взятия образцов мочи должна быть стандартизована и подробно описана в соответствующей инструкции для медицинских сестер, отвечающих за сбор образца мочи.

В инструкцию по доставке пробы должны быть включены условия и сроки хранения проб и правила безопасной транспортировки.

Для персонала лаборатории должны быть определены критерии для приема и отказа в приеме проб, требования по регистрации пробы, обработке, маркировке и хранению пробы до анализа. Аналитический этап проводится в соответствии с методиками исследований. На постаналитическом этапе необходимо разработать правила оценки приемлемости результатов анализа, которые должны включать оценку интерференции лекарственных препаратов, сравнение результатов с референтным интервалом, проверку правильности регистрации. Форма выдачи результатов должна быть утверждена в учреждении и согласована с лечебными отделениями.

5.3. Инструкции к используемым методикам лабораторных исследований

Методика процесса выполнения лабораторных исследований должна быть оформлена в виде документа и быть доступна на рабочем месте. Методика должна быть основана на методических указаниях или других документах, утвержденных в установленном порядке. Она должна включать критерии приемлемости или отбрасывания образцов мочи (учитываются продолжительность срока хранения образца после взятия, достаточное количество мочи для исследования); референтные интервалы; способ регистрации результатов; предосторожности, связанные с биологической опасностью исследуемого материала; причины получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

5.4. Контроль качества микроскопических исследований.

При разработке требований к аналитической надежности микроскопического метода должны использоваться в качестве ориентира результаты исследования образцов биоматериала, произведенного исследователем, имеющим большой опыт микроскопических исследований клеток и подсчета их в камере Горяева и Фукса-Розенталя.

5.5. Непрерывное образование специалистов как гарантия обеспечения качества исследования.

Для обеспечения качества анализа квалификация персонала должна соответствовать сложности выполняемого исследования. Весь персонал лаборатории должен периодически (раз в пять лет) проходить обучение на циклах усовершенствования, которые проводятся медицинскими образовательными учреждениями, имеющими соответствующую лицензию. Каждый специалист должен заниматься самообразованием. Лаборатория должна иметь доступную для пользования современную литературу, включая периодические издания по лабораторной диагностике и атласы. Специалистам лаборатории необходимо участвовать в конференциях и семинарах.

6. Требования к режиму труда и отдыха, диете и ограничениям при подготовке пациента

Для персонала, осуществляющего взятие материала, должна быть разработана инструкция, содержащая, кроме процедуры взятия, условия подготовки пациента.

(Приложение А).

7. Трудозатраты на выполнение технологии клинического лабораторного анализа мочи «Определение количества форменных элементов в моче».

Таблица 2 - Трудозатраты в УЕТ на выполнение технологии «Клинический лабораторный анализ мочи. Определение количества форменных элементов в моче»

.

Код услуги

Количественные методы определения мочевого осадка

Количественные методы позволяют определить точное содержание лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров, выделенных с мочой. Это особенно важно для диагностики заболевания почек, динамического наблюдения за его течением и контроля за проводимым лечением, особенно при скрытом, хроническом или вялотекущем течении.

Определение проводится с помощью счетной камеры Горяева (объем 0,9 мкл) или Фукс-Розенталя (объем 3,2 мкл).

Используют для определения количества форменных элементов в моче, собранной за сутки.

Сбор мочи.

Классический вариант: утром больной опорожняет мочевой пузырь, а затем в течение 24 ч собирает мочу в один сосуд. Для предотвращения разрушения форменных элементов в сосуд добавляют 4–5 капель формалина и 2–3 кристалла тимола, желательно мочу хранить в холодильнике. В день сбора мочи необходимо назначить больному мясную пищу с ограничением приема жидкости для поддержания постоянных величин плотности и рН мочи, что важно для подсчета форменных элементов, которые легко разрушаются в щелочной моче или при низкой ее плотности.

Если нет возможности собрать мочу с учетом описанных условий, то можно собирать мочу 10–12 ч. Наиболее рационально собирать ночную порцию мочи: больной освобождает мочевой пузырь перед сном, отмечая время, и затем собирает мочу в течение 10–12 ч в один сосуд. Ход определения. Собранную мочу тщательно размешивают и измеряют ее объем. Для исследования получают осадок из количества мочи, выделенной за 12 мин (1/5 часа), которое рассчитывают по формуле:

Q = V / (t x 5)

где Q — объем мочи, выделенной за 12 мин (мл); V — объем мочи, собранной за время исследования (мл); t — время сбора мочи (часы);

5 — коэффициент пересчета за 1/5 часа.

Рассчитанное количество мочи центрифугируют в мерной центрифужной пробирке при 3500 об./мин в течение 3 мин или при 2000 об./мин в течение 5 мин. Отделяют верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок тщательно перемешивают и заполняют счетную камеру.

Подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров (эпителиальные клетки не считают) и рассчитывают содержание форменных элементов в 1 мкл осадка мочи.

Расчет.

Если подсчет проводят в камере Горяева, объем которой равен 0,9 мкл, то количество форменных элементов в 1 мкл рассчитывают по формуле:

X = A / 0,9

где Х — число форменных элементов в 1 мкл; А — число форменных элементов, подсчитанных во всей камере;

0,9 — объем камеры в мкл.

Количество форменных элементов, выделенных с мочой за сутки, рассчитывают по формуле:

В = Х × 500 × 5 × 24 = Х × 60 000,

если для исследования взято 0,5 мл (500 мкл) из 12-минутной порции мочи или

В = Х × 1000 × 5 × 24 = Х × 120 000,

если осадок был обильным и был оставлен 1,0 мл (1000 мкл),

где В — число форменных элементов, выделенных за сутки; Х — число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной для исследования с осадком;

500 или 1000 — количество мочи (мкл), оставленное вместе с осадком для исследования из 12-минутной порции мочи.

Умножение на 5 и 24 дает расчет выделенного количества клеток за 24 часа.

Норма суточной экскреции форменных элементов с мочой:

  • эритроциты — до 1 000 000,
  • лейкоциты — до 2 000 000,
  • цилиндры — 20 000.

Определение количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи.

Ход определения.

Для исследования берут одноразовую порцию мочи (желательно утреннюю) в середине мочеиспускания, определяют рН (в моче со щелочной реакцией может быть частичный распад клеточных элементов). 5–10 мл мочи центрифугируют при 3500 об./мин в течение 3 мин. Отделяют верхний слой, оставляя вместе с осадком 0,5 мл (500 мкл) мочи при небольшом осадке или 1 мл (1000 мкл) — при большом. Осадок тщательно перемешивают и заполняют счетную камеру. Подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров по всей сетке камеры.

Расчет.

Если подсчет проводят в камере Горяева, объем которой равен 0,9 мкл, то количество форменных элементов в 1 мкл рассчитывают по формуле:

X = A / 0,9

где Х — число форменных элементов в 1 мкл; А — число форменных элементов, подсчитанных во всей камере;

0,9 — объем камеры в мкл.

Установив эту величину, рассчитывают число форменных элементов в 1 мл мочи по формуле:

N = X x 500 / V

если для исследования взято 0,5 мл (500 мкл) мочи с осадком, или

N = X x 1000 / V

если оставлен 1,0 мл (1000 мкл) мочи с осадком,

где N — число форменных элементов в 1 мл мочи; X — число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной для исследования с осадком; 500 или 1000 — объем мочи (мкл), оставленный вместе с осадком;

V — количество мочи (мл), взятое для центрифугирования.

Норма в данном случае:

  • эритроциты — не более 1000 в 1 мл мочи;
  • лейкоциты — 2000–4000 в 1 мл мочи;
  • цилиндры — отсутствуют или не более 1 на 4 квадрата камеры Горяева.

В основе метода лежит суправитальная (прижизненная) окраска лейкоцитов с целью выявления их качественных особенностей.

Активные лейкоциты — это нейтрофилы, которые, как считают, проникают в мочу из воспалительного очага (в почках, простате). К этим клеткам применяется также термин клетки Штернгеймера — Мальбина. Активные лейкоциты встречаются при остром и хроническом пиелонефрите (в 79–95 % случаев), их количество увеличивается при обострениях. Однако они могут обнаруживаться (не чаще, чем в 10 % случаев) при гломерулонефритах, волчаночном нефрите, миеломной болезни, а также при хроническом простатите. Подчеркивается особенно частое выявление этих клеток при хронической почечной недостаточности, независимо от этиологии уремии, что связывают с изостенурией. При циститах обнаружение активных лейкоцитов не характерно.

Активные лейкоциты (клетки Штернгеймера — Мальбина) не окрашиваются многими реактивами, поэтому на фоне хорошо прокрасившихся обычных лейкоцитов они выглядят как бледно-серые (бледно-синие), увеличенные в размере клетки, в которых обнаруживается броуновское движение гранул. Для их выявления в цент рифугате утренней мочи можно использовать различные реактивы.

Реактив Штернгеймера — Мальбина (водно-спиртовая смесь 3 частей генцианового фиолетового и 97 частей сафранина) окрашивает ядра обычных лейкоцитов в красный цвет, а ядра клеток Штерн геймера — Мальбина — в бледно-синий. Раствор метиленового синего (водный 1%) не окрашивает активные лейкоциты, окрашивая ядра остальных лейкоцитов в синий цвет.

Препараты рассматривают при увеличении в 40 раз или с иммерсионной системой. В настоящее время сочетают подсчет лейкоцитов в камере с одновременным определением числа активных лейкоцитов, которое может быть выражено в процентах (соотношение активных и неактивных лейкоцитов) и в виде абсолютного числа их в 1 мл мочи.

Считают, что в моче здорового человека активных лейкоцитов либо нет, либо их число не превышает 200 в 1 мл.

Используются для выявления скрытой лейкоцитурии (для диагностики латентно протекающего хронического пиелонефрита). Эти методы выявляют лейкоцитурию, вызывая кратковременное обострение воспалительного процесса (преднизолоновый и пирогеналовый тест) или механически вымывая лейкоциты из воспалительного очага (тест с водной нагрузкой).

Преднизолоновый тест: через час после того, как больной сдал контрольную порцию мочи, вводится медленно внутривенно 30 мг преднизолона (в 10 мл изотонического раствора хлорида натрия), после чего больной сдает 4 порции мочи: первые 3 — каждый час, четвертую — спустя сутки.

В каждой порции определяют общее количество лейкоцитов по методу Нечипоренко, число активных лейкоцитов (клеток Штернгеймера — Мальбина). Тест считается положительным, если хотя бы в одной из 4-х порций (по сравнению с контрольной) в 2 раза возрастает общее количество лейкоцитов или активных лейкоцитов.

Важно отметить, что преднизолоновый тест недостаточно специфичен, может быть положительным при хроническом простатите, уретрите, хронических гломерулонефритах. В связи с этим при проведении преднизолонового теста целесообразно определять степень бактериурии. Раздельное взятие мочи из правой и левой почки при выполнении преднизолонового теста также существенно повышает его специфичность и информативность.

NB! Применяется в специализированных лечебных учреждениях с осторожностью.

Другие провокационные тесты применяются реже. Тест с водной нагрузкой (или диуретиками) малочувствителен, пирогеналовый тест плохо переносится больными.

Определение степени бактериурии (количества микробных тел в 1 мл мочи) имеет важное значение в диагностике инфекций мочевых путей и пиелонефрита. Для последнего особенно характерна высокая бактериурия — более 105 в 1 мл.

Для экспресс-диагностики бактериурии применяют химические методы, улавливающие в моче продукты жизнедеятельности бактерий:

  • тест восстановления трифенилтетразолий хлорида (ТТХ-тест),
  • глюкозоспецифический тест,
  • нитритная и каталазная проба.

Однако химические методы могут применяться лишь как ориентировочные: их разрешающая способность недостаточна — 106 микробных тел в 1 мл.

Из химических методов предпочтительней нитритный тест, не дающий ложноотрицательных результатов. Однако этот тест не должен применяться при резко щелочной моче, при инфекции, вызванной синегнойной палочкой, и у детей, если моча почти не содержит нитратов.

Бактериологические методы оценки степени бактериурии более чувствительны, однако требуют больше времени: ответ получают через 24–48 ч. Общепринятым являетсяметод Гоулда: посев мочи стерильной платиновой петлей на агар в определенные секторы чашки Петри с оценкой степени бактериурии по количеству выросших через 24 ч колоний (по специальной таблице).

Модификация бактериологического метода — тест «Урикульт» (фирма «Орион», Финляндия) может применяться не только в клинике, но и для массовых профилактических осмотров. При исследовании стерильные пластинки, с обеих сторон покрытые двумя видами питательной среды, погружают в исследуемую мочу, затем инкубируют в термостате (16–24 ч при 37 °С). Степень бактериурии учитывают по плотности роста колоний (по специальной стандартной шкале).

Жив ли Христос? Воскрес ли Христос из мертвых? Исследователи изучают факты

Тема № 7 Микроскопическое исследование осадков мочи.

ориентировочным методом.

Микроскопическое исследование осадков мочи производится двумя способами: 1) ориентировочным; 2) количественным.

1) Ориентировочный метод является распространённым методом, но менее точным и даёт приблизительное представление о содержании элементов в осадке.

Результаты зависят от количества мочи, взятой для центрифугирования, от оборотов центрифуги, от правильного приготовления препарата.

Приготовление препарата.

Предварительно размешать мочу в банке, налить в центрифужную пробирку 10 мл, центрифугировать 5-10 минут при 1500-2000 об/мин. После центрифугирования быстро опрокидывают пробирку с мочой, сливая 1/3 часть в пустую банку и затем переводят в исходное положение. Необходимо провести эту манипуляцию так, чтобы не взболтать осадок. Осадок размешивают пипеткой с тонким концом и резиновым баллоном и небольшую каплю помещают на чистое предметное стекло и покрывают покровным. В правильно приготовленном препарате не должно быть пузырьков воздуха и избыток жидкости не должен выходить за пределы покровного стекла. Препарат микроскопируют сначала объектив №8, окуляр 7 или 10 (т.е. малое увеличение), а затем переводят на объектив №40, окуляр №10 и №7 (т.е. большое увеличение). Количество найденных элементов (эр., L, цилиндров) указывают сколько их в п/зр. При малом количестве элементов осадка указывают их число в препарате. Для элементов (эпителиальные клетки, кристаллы) принято давать оценку «большое», «небольшое», «незначительное» количество.

2) Количественный метод позволяет определить число форменных элементов (эр., L, цилиндров) в единице объёма мочи с помощью счётной камеры. Это проба Нечипоренко, Амбурже, Аддис-Каковского.

Метод Нечипоренко. Диагностическое значение: для диагностики скрытого пиелонефрита.

Собирается средняя порция утренней мочи, отливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин. Отсасывают надосадочную жидкость до объёма 1 мл, заполняют камеру Горяева. Через 3-5 мин приступают к подсчёту форменных элементов (окуляр 7х, объектив 40х при опущенном конденсоре в 100 больших квадратах сетки). Пересчёт по формуле:

х - число форменных элементов в 1 л мочи; А - число форменных элементов в 100 больших квадратах сетки камеры Горяева; 4000 - коэффициент перевода объёма одного малого квадрата(1/4000 мкл) в объём, равный 1 мкл; 1600 - число малых квадратов в 100 больших; 10 - отношение объёма центрифугированной мочи к объёму надосадочной жидкости вместе с осадком; 106 - количество микролитров в 1 л.

Норма: L 4,0 ∙ 106/л

эр. 1,0 ∙ 106/л

0,02 ∙ 106/л (0-1 на 4 камеры подсчёта).

Метод Аддис-Каковского. Для диагностики скрытого гломерулонефрита.

Мочу для исследования собирают в течение 10-12, 24 часов. Первую порцию - в отдельную посуду, остальную - во второй сосуд. К моче добавляют консервант - 4-5 капель формальдегида или кристаллик тимола или несколько капель трикрезола - для предотвращения разрушения форменных элементов.

После регистрации объёма доставленной мочи, рассчитывают количество мочи, выделенное за 12 мин (1/5 ч) по формуле:

Q - количество мочи, выделенное за 12 мин, мл; V - объём доставленной исследуемой мочи, мл; t - время, за которое была собрана моча, мин; 5 - коэффициент пересчёта на 1/5 ч. Рассчитанное количество мочи помещают в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3500 об/мин. Отсасывают надосадочную жидкость, оставляя при этом 0,5 мл мочи с осадком. Заполняют камеру Горяева. Раздельно подсчитывают лейкоциты, эритроциты и цилиндры. Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл. При подсчёте в камере Горяева: ;при подсчёте в камере Фукса-Розенталя: ,где А - количество форменных элементов, подсчитанных во свей камере; 0,9 и 3,2 - соответственно объём камеры. Затем производят перерасчёт форменных элементов на суточное количество мочи по формуле: В = х ∙ 500 (1000) ∙ 5 ∙ 24, где В - содержание форменных элементов в суточной моче; х - количество форменных элементов в 1 мкл; 500 (1000) - количество взятой мочи при осадке, равном 0,5 или 1 мл, мкл; 5 - перевод количества мочи, выделенной за 12 мин, на 1 ч; 24 - перевод количества мочи, выделенной за 1 ч, на сутки.

Норма: L до 2 ∙ 106/сут

эр. 1 ∙ 106/сут

цилиндры до 0,02 ∙ 106/сут.

Смотрите также