Диагностическая лаборатория в Уфе
Определение резус фактора
Способы определения резус-фактора
Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.
Способы определения резус-фактора в клинике. Используются два так называемых экспресс-метода: экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева. Экспресс-метод на плоскости без подогрева.
Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.
Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.
Методика проведения реакции
Исследование проводят в центрифужных пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают но ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген - антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывании пробирки (без взбалтывания!).
Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности.
Лабораторные методы определения резус-фактора
Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.
Метод агглютинации в солевой среде
Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.
Метод конглютинации с желатином
В пробирку помещают равные объемы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48є C, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.
Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)
Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС). При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.
В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус- положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь - резус-отрицательная.
Реакция с aнти-D-моноклональными антителами.
На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-моноклональных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой крови. За реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-МКА образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстрое наступающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная - агглютинация отсутствует.
Методика определения резус фактора
29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок
Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы. Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).
Таблица 2
Определение групп крови с помощью стандартных сывороток
| Группа исследуемой крови | Стандартные сыворотки | ||
| 0(I) | А(II) | В (III) | |
| 0(I) | - | - | - |
| А(II) | + | - | + |
| В(III) | + | + | - |
| AB(IV) | + | + | + |
Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.
Таблица 3
Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов
| Группа исследуемой крови | Стандартные эритроциты | ||
| 0(I) | А(II) | В (III) | |
| 0(I) | - | + | + |
| А(II) | - | - | + |
| В(III) | - | + | - |
| AB(IV) | - | - | - |
Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови. После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 — 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.
Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.
Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 — 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.
Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 — 25 X.
-
Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
-
Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).
-
Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.
-
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
-
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
-
Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.
Таблица 4
Определение групп крови с помощью цоликлонов
| Группа исследуемой крови | Стандартные эритроциты | ||
| Анти-А | Анти-В | Анти-АВ | |
| 0(I) | _ | _ | - |
| А(II) | + | - | + |
| В(III) | - | + | + |
| АВ(IV) | + | + | + |
Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) — се отсутствие
При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-суперт рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.
Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.
StudFiles.ru
Определение в крови резус-фактора
Определение в крови резус-фактора производится врачами, прошедшими специальную подготовку на СПК и получившими сертификат.
Резус-фактор определяется с помощью стандартной сыворотки, в которой содержатся активные резус-антитела. Эта сыворотка готовится из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, это:
• резус-отрицательные женщины, сенсибилизированные к резус-фактору резус-положительным плодом во время беременности;
• доноры, у которых в крови обнаружены резус-антитела;
• лица, специально иммунизированные резус-антигеном;
• лица, перенесшие трансфузионные реакции или осложнения в связи с резус-конфликтом, в крови которых могут содержаться активные резус- антитела.
Готовая антирезусная сыворотка выпускается в ампулах или флаконах по 2-5 мл с наклеенными этикетками, на которых указано учреждение - изготовитель, номер серии, обозначена группа по системе AB0, специфичность, форма резус-антител и срок годности. На этикетках, по диагонали, наносят те же цветные полосы, что и на стандартных гемагглютинирующих сыворотках.
Сывороткой антирезус 0(I) группы определяют резус-фактор только в эритроцитах первой группы, сывороткой антирезус А(II) группы - в эритроцитах первой и второй групп, а сывороткой антирезус В (III) группы в эритроцитах первой и третьей группах крови. Сывороткой антирезус группы АВ(IV), специально приготовленной (универсальной), определяют резус-фактор в эритроцитах группы АВ(IV) и в других группах крови по системе AB0.
При каждом исследовании на резусную принадлежность необходимо ставить контроль для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус. Для контроля применяют стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты первой или той же группы, что и исследуемая кровь.
Кровь для исследования берут, в количестве 5 мл, в обычную пробирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови лица, у которого взята кровь, отделение и дату. После свертывания крови на дне образуется сгусток из эритроцитов, которые и следует брать для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сгусток для отделения большего их количества.
Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого натрия (0,25 мл на 1 мл крови), но в этом случае необходимо отмыть эритроциты. Для этого в пробирку доверху наливают изотонический раствор хлористого натрия, хорошо перемешивают и центрифугируют. Отмытые эритроциты берут для исследования.
Стандартные антирезусные сыворотки активны только в определенных условиях, поэтому методика определения резус-фактора этими сыворотками указывается в сопроводительной инструкции. Резус-фактор в крови можно определять следующими способами:
• с помощью универсального реагента в пробирках без подогрева;
• реакцией с применением 10% желатина в пробирках с подогревом (+46- 48°С);
• реакцией агглютинации в солевой среде;
• с помощью цоликлона анти-Д Супер.
На практике чаще пользуются первым способом. Стандартный универсальный реагент представляет собой смесь сыворотки АВ(IV) группы крови и 33% раствора полиглюкина в соотношении 2:1. Его приготавливают на СПК. Универсальный реагент не содержит групповых агглютининов (в сыворотке АВ(IV) группы крови их нет), поэтому он может быть использован для определения резус-антигена Д в эритроцитах любой группы крови системы AB0. Исследованию может подвергаться кровь, взятая из пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке с кровью, взятой без стабилизатора, но после образования сгустка.
Методика проведения реакции:
1. В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объемом до 10 мл, по количеству образцов эритроцитов. Дополнительно устанавливают еще две пробирки, для контроля реакции с резус- положительными и резус-отрицательными эритроцитами. Попарно, из первого и второго ряда пробирок, производят надписи фамилии и инициалов лиц, у которых исследуют кровь.
2. Во все пробирки первого ряда и в две контрольные пробирки вносят по две капли стандартного универсального реагента-антирезус; во все пробирки второго ряда вносят по две капли изотонического раствора хлористого натрия и по одной капле 33% раствора полиглюкина;
3. В пробирки первого и второго ряда вносят по одной капле исследуемых эритроцитов; в первую контрольную пробирку вносят одну каплю стандартных резус-положительных эритроцитов, во вторую контрольную пробирку - такую же каплю стандартных резус-отрицательных эритроцитов.
4. Пробирки встряхивают, затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального уровня, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки, что делает реакцию более выраженной.
Оценка результатов исследования:
Агглютинация может появиться уже на первой минуте, но ожидать необходимо три минуты, так как реакция может быть замедленной. Через три минуты в пробирки наливают по 2-3 мл изотонического раствора хлористого натрия, перемешивают двух - трехкратным плавным переворачиванием пробирок (не встряхивать!). Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу, выявляя наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой антирезус, считаются резус-положительными, а не давшие агглютинации - резус-отрицательными.
В контрольных пробирках должна произойти аналогичная реакция - отсутствие агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами и наличие ее со стандартными резус-положительными эритроцитами. В пробирках второго ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации указывает на возможность ее появления за счет аутоантител. В таких случаях следует повторить реакцию с эритроцитами, отмытыми в теплом изотоническом растворе хлористого натрия, для удаления с них аутоантител. При сомнительном результате определения резус- принадлежности, следует применить метод агглютинации в солевой среде с использованием сыворотки антирезус, содержащей полные антитела, или провести исследование с цоликлонами анти-Д Супер.
Определение резус-принадлежности крови только по сыворотке анти-Д считается недостаточным. В случаях резус-отрицательной реакции необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных засчитываются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов. Это особенно важно при обследовании доноров, беременных женщин с подозрением на изосенсибилизацию и некоторых других категорий больных.
Реакция агглютинации на плоскости
с помощью цоликлонов анти-D супер
1. Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.
2. Наносят рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой.
3. Через 10-20 секунд мягко покачивают пластинку.
4. Результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания, несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 секунд.
5. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.
6. Для определения резус-принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином).
Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.
studopedia.ru
Определение резус-фактора
Под определением резус-фактора у пациента подразумевается определение только Rhо(D).Резус-отрицательными считаются лица, у которых RhоD не обнаружен.
В отличие от реципиентов, определение резус-принадлежности крови доноров проводится в два этапа: сначала определяется наличие Rhо(D), а затем, при его отсутствии - rh'(C) и rh''(E).
В число резус отрицательных доноров зачисляются только лица, кровь которых не содержит всех трех доминантных антигенов системы Резус: Rhо(D), rh'(C), rh''(E), то есть имеет фенотип Hro(d), hr'(c), hr''(e).
Поскольку антирезусные антитела обычно бывают неполными, в большинстве способов создаются дополнительные условия, облегчающие реакцию взаимодействия антиген-антитело — коллоидная среда, повышенная температура (см. Приложение).
Разработано несколько реагентов для определения Rho(D) фактора. В большинстве случаев эти реагенты лишены групповых антител системы АВО (не имеют групповой специфичности) и называются «универсальными».
До 70-х годов ХХ столетия определение Rhо(D) производилось с помощью«Сывороток антирезус» с групповой специфичностью (антирезусных сывороток). Использование их было весьма неудобным, поскольку необходимо было сначала определить группу крови по системе АВО, а затем подобрать совместимую сыворотку для определения резус-фактора:
Сыворотки антирезус изготовлялись из крови специально отобранных резус-отрицательных доноров, ранее сенсибилизированных к антигену Rh вследствие резус-конфликтных беременностей, переливания резус-положительной крови или специально иммунизированных малыми дозами одногруппной резус-положительной крови.
Поскольку изготовление реагентов для определения резус - принадлежности связано с риском для здоровья (сенсибилизацией) доноров, они не могут выпускаться большими партиями. Кроме того, определение резус-фактора с помощью антирезусных сывороток было длительным (10 мин) и трудоемким (на водяной бане).
В настоящее время в России повсеместно используется определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента,содержащего антирезусную сыворотку группы АВ(IV), которая не содержит естественных агглютининов α и β и коллоидную среду (33% полиглюкин), необходимую для выявления неполных антител.
В целях экономии реагента в лечебных учреждениях первичное определение резус - принадлежности проводится централизовано в отделениях переливания крови или клинических лабораториях. В отделениях лечебных учреждений определение резус - принадлежности выполняется при контрольной проверке Rh- фактора донора (из контейнера с эритроцитами) и реципиента при проведении гемотрансфузий.
Определение резус - принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева).
Реакция с ним происходит быстрее (3 мин), чем с антирезусными сыворотками, поэтому получила название «экспресс -реакции» или «экспресс-метода».
В пробирку вносят по 2 капли (0,1 мл) стандартного универсального реагента антирезус и 1 каплю (0,05 мл) исследуемой крови.
Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием и затем медленно поворачивают по оси, наклонив почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по стенкам.
Через 3 минуты в пробирки добавляют по 2-3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают 2-3-кратным переворачиванием пробирок, не встряхивая. Пробирки просматривают на свет.
При наличии агглютинации и просветлении раствора резус-фактор считают положительным, при отсутствии агглютинации и равномерном розовом окрашивании раствора — отрицательным.
Исследование других антигенов системы Резус проводится теми же способами специальными реагентами, содержащими соответствующие антитела.
StudFiles.ru
Техника определения резус – фактора экспресс - методом
Цель:определение резус- фактора.
Показания:гемотрансфузия.
Приготовить:пипетки, пробирки, физиологический раствор, универсальный антирезус-реагент, скарификатор, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы.
Алгоритм действия:
- Внести пипеткой 2 капли сыворотки в конусную пробирку;
- Добавить пипеткой 1 каплю крови;
- Добавить в пробирку 2 капли физиологического раствора;
- Встряхнуть пробирку или вращать между ладонями в течении 5 минут;
- Посмотреть на стенки пробирки и оценить результат. Если есть реакция, то у пациента резус-положительный фактор.
Примечание: температура воздуха должна быть в пределах 15- 25о С для профилактики ложной агглютинации.
Можно произвести определение резус-принадлежности с помощью цоликлона анти-Д
Техника постановки пробы на индивидуальную совместимость по АВ0
Цель:определить совместимость крови донора с кровью реципиента.
Показания:гемотрансфузия.
Приготовить:донорская кровь, сыворотка крови реципиента, стеклянные палочки, пипетки, чашка Петри, шприц, игла, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы.
Алгоритм действия:
- Взять у пациента кровь до 5 мл в пробирку из вены;
- Отцентрифугировать пробирку с кровью для получения сыворотки;
- Нанести пипеткой на тарелку 1 каплю сыворотки пациента и мазок крови донора;
- Смешать стеклянной палочкой сыворотку и кровь;
- Добавить 1 каплю физиологического раствора;
- Наблюдать за реакцией в течении 5 минут.
- Если нет агглютинации, то проба отрицательная и кровь совместима и ее можно переливать.
Техника постановки пробы на индивидуальную совместимость по резус – принадлежности
Цель:определить совместимость крови донора с кровью реципиента.
Показания:гемотрансфузия.
Приготовить:донорская кровь, сыворотка крови реципиента, стеклянные палочки, водяная баня, пипетки, чашка Петри, шприц, игла, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы.
Алгоритм действия:
- Взять у больного кровь до 5 мл в пробирку;
- Отцентрифугировать пробирку с кровью больного для получения сыворотки;
- Нанести пипеткой на чашку Петри 1 каплю сыворотки больного и каплю крови донора;
- Смешать стеклянной палочкой сыворотку с кровью;
- Добавить 1 каплю физиологического раствора;
- Поставить чашку Петри на водяную баню (температура – 50С);
- Ждать результат в течении 10 минут.
- Если агглютинация отсутствует, то проба отрицательная и переливать кровь можно.
studopedia.ru
Читайте также
Определение резус фактора алгоритм
Определение резус-фактора со стандартной сывороткой анти-резус.
1Вступительное слово: Мы проводим определение группы крови со стандартной сывороткой анти-резус в процедурном кабинете по назначению врача. На мне шапочка, очки, маска, халат, фартук, перчатки. Руки предварительно обработаны гигиеническим способом.
2 Оснащение:
-
Стандартная сыворотка анти-резус
-
Стерильная пробирка
-
Исследуемая кровь ( в пробирке)
-
Физиологический раствор ( в пробирке)
-
Стерильные пипетки 2 шт
-
Ёмкость с 3% раствором хлорамина
3 Техника манипуляции:
-
Внести пипеткой в пробирку две капли сыворотки анти-резус
-
Внести отдельной пипеткой одну каплю крови
-
Вращать между ладонями 5 мин
-
Внести 1 каплю физраствора в случае если наблюдается агглютинация.
-
Встряхнуть пробирку, наблюдать агглютинацию 5 мин.
-
Форма ответа: при определении резус фактора со стандартной сывороткой анти-резус..
-
Агглютинация не наблюдается – резус фактор отрицательный
-
Агглютинация наблюдается – резус фактор положительный
-
После проведения манипуляции все использованные предметы замачиваются в емкости с трехпроцентным раствором хлорамина.
4 Возможные ошибки:
Грубые ошибки:
-
Не использование средств защиты медработника.
-
Нарушение пропорции сыворотки и крови 2:1
-
Не соответствие картины агглютинации заключению о резус пренадлежности.
-
Не продезинфицированы предметы контактировавшие с кровью
Не грубые ошибки:
-
Время ожидания агглютинации менее 5 мин.
-
Не внесен физраствор в случае наблюдаемой агглютинации.
-
Выполнение манипуляции «на весу».
5 Критерии оценивания:
Сдал – отсутствие грубых ошибок, наличие не более двух не грубых ошибок.
Не сдал – наличие грубых ошибок, наличие более двух не грубых ошибок.
При совершении грубой ошибки преподаватель может попросить повторить соответствующий этап манипуляции. Если ошибка повторяется – не сдал. Допускается не более одного повторения.
StudFiles.ru
Определение резус фактора экспресс методом с помощью стандартного универсального реагента без подогрева в пробирке
Для определения резус-фактора может быть использована свежая не свернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед исследованием, или консервированная, без всякой предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после образования сгустка и отстаивания сыворотки.
Техника определения.
- 1мл стандартного универсального реагента (антирезусная сыворотка группы AB(IV)+33% раствор полиглюкина);
-1мл исследуемой крови(эритроцитов)
На дно пробирки внести 1 каплю стандартного универсального реагента и 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов).
Содержимое пробирки перемешать встряхиванием и затем медленно поворачивать, наклоняя пробирку почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по её стенкам. после 3-минутного покачивания ,
для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавить 2-3мл физиологического раствора хлористого натрия и перемешать, не взбалтывая, путём 2-3-х кратного перевёртывания пробирки. Оценку производить визуально.
Оценка результата.
Резус-(+) -наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветлённой жидкости .
Резус-(-) -отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость).
Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (цоликлон анти-d , анти-d супер).
Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде
Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.
Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом.
Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек.
Результаты реакции считывают через 3 мин.
Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.
Метод агглютинации на чашках Петри.
- исследуемые эритроциты;
-две серии стандартных сывороток антирезус всех групп системы АВО;
-контрольные образцы резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов:
-водяная баня с постоянной температурой 46-48 С°
-чашки Петри
В чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева - одной серии, справа - другой в 3 ряда для 3 исследований. В каждую серию прибавляют по 1капле эритроцитов (1.исследуемые, 2.контрольные Rh-положительные и 3.контрольные Rh-отрицательные). После смешивания (стеклянными палочками) сывороток в каждой точке с добавленными эритроцитами чашку помещают в водяную баню при t° 46—48° на 7—10 мин, после чего рассматривают в проходящем свете.
Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее - об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.
Метод агглютинации с 10% желатином:
Реакция конглютинации с желатиной обычно проводится в пробирках емкостью 8—10 мл. В штатив устанавливают 2 ряда пробирок для двух различных серий стандартной сыворотки. В контрольные пробирки каждого ряда вводят по 1 капле стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов, в остальные пары пробирок — исследуемые эритроциты. Исследование можно проводить как с отмытыми, так и с неотмытыми эритроцитами.
Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле подогретой до разжижения желатины (10% раствор) и по одной капле стандартной сыворотки. Содержимое пробирок смешивают путем встряхивания и помещают в водяную баню при t° 46—48° на 5 мин., по истечении которых в каждую пробирку доливают 5—8 мл подогретого до t° 46—48° физиологического раствора NaCl и рассматривают на свет, определяя наличие или отсутствие агглютинации (рис. 2).
Метод агглютинации в солевой среде.
При исследовании сывороткой, содержащей полные антитела, применяют метод агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках (высотой 2—2,5 см, диаметром 0,5 — 0,6 см).
В штатив устанавливают 2 ряда пробирок (по количеству исследуемых образцов и по 2 для контроля), в которые вводится по 2 капли стандартной сыворотки и по 1 капле 2% взвеси эритроцитов, предварительно дважды отмытых физиологическим раствором NaCl.
Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час.
О резус-принадлежности судят по форме осадка, который рассматривают через лупу с 5—7-кратным увеличением над источником света, закрытым матовым стеклом. Результаты учитывают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации в исследуемых эритроцитах после проверки контрольных образцов.
studopedia.ru
Техника постановки пробы на резус совместимость с полиглюкином
Цель:определить совместимость донорской крови с кровью реципиента по резус принадлежности.
Показания:гемотрансфузия.
Приготовить:донорская кровь, 33% раствора полиглюкина, сыворотка крови реципиента, стеклянные палочки, пипетки, чашка Петри, шприц, игла, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы, водяная баня.
Алгоритм действия:
- На дно пробирки внести 2 капли сыворотки больного, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% полиглюкина;
- Встряхнуть пробирку;
- Пробирку наклонить почти горизонтально и медленно поворачивать вокруг оси в течении 5 минут;
- Долить в пробирку 3-4 мл изотонического раствора хлорида натрия;
- Перемешать путем 2-3 кратного переворачивания пробирки ( не взбалтывать!);
- Посмотреть на свет и оценить результат;
- Если есть реакция агглютинации на фоне просветленной жидкости, то кровь переливать нельзя!;
- Если агглютинации не произошла, то реакция отрицательная и кровь переливать можно.
Примечание: температура воздуха должна быть в пределах 15- 25о С для профилактики ложной агглютинации.
Техника постановки биологической пробы
Цель: для определения совместимости крови донора и реципиента.
Показания:гемотрансфузия.
Приготовить:донорская кровь, систему для переливания крови, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки.
Алгоритм действия:
- Перелить струйно 10-15 мл крови или кровезаменителей внутривенно;
- Закрыть систему на 3 минуты;
- Оценить состояние пациента;
- Перелить струйно 10-15 мл крови или кровезаменителей внутривенно;
- Закрыть систему на 3 минуты;
- Оценить состояние пациента;
- Перелить струйно 10-15 мл крови или кровезаменителей внутривенно;
- Оценить состояние пациента.
Примечание:При появлении болей в животе, груди, пояснице, рвоте, головной боли, одышке, тахикардии, сыпи на коже – кровь или кровезаменители вводить нельзя!
studopedia.ru
34. Оказание помощи врачу при наложении лейкопластырного скелетного вытяжения и вытяжения с помощью петли Глиссона
-
Уложить пациента на горизонтальную поверхность кровати с системой блоков и грузом в изголовье
-
Закрепить петлю Глиссона на голове либо из лейкопластыря сформировать петлю в основании черепа так, чтобы она фиксировалась у основания черепа (под подбородком и под большими затылочными буграми)
-
Прикрепить груз весом 6 кг (вес груза зависит от вида повреждения и определяется врачом)
35. Применение эластичных бинтов и чулок на нижние конечности
Эластичный бинт
-
Накладывать утром для предупреждения кровенаполнения и растяжения вен
-
Придать ноге возвышенное положение под углом 45 град.
-
Первые туры сделать у основания пальцев
-
Далее по спирали бинтовать до паховой складки
-
Туры должны оказывать умеренное давление на мягкие ткани; не должны вызывать неприятные ощущения; пальцы на стопе должны быть розовыми
36. Применение съемного бандажа, корсета
-
Предназначением бандажа, корсета является фиксация части туловища в функциональном состоянии, предупреждение осложнений, связанных с анатомическими дефектами тела, приводящими в отсутствии бандажа или корсета к более грубым анатомическим и функциональным расстройствам
-
Бандаж (корсет) должен содержаться в чистоте
-
Пациент должен принять горизонтальное положение перед надеванием бандажа (корсета)
-
При надевании не защемлять кожу; не допускать болезненных ощущений
Пуговицы и петли должны располагаться на лицевой стороне бандажа; лямки не должны «впиваться» в мягкие ткани.
-
Пребывание в бандаже (корсете) не должно приводить к нарушениям дыхания и сердечной деятельности
37. Выявление признаков непригодности крови к переливанию, транспортирование крови из отделения переливания крови
-
Непригодная кровь к переливанию, если:
- нарушены сроки и условия хранения крови
- флакон с кровью не имеет герметичности
- верхний слой во флаконе с кровью розовый (гемолиз эритроцитов)
- имеются капли жира, пленки, сгустки
- нечеткая граница между слоями крови во флаконе
-
Хранится кровь в холодильнике при температуре 4 град; транспортировка в специальных контейнерах, нивелирующих изменяющийся температурный режим окружающей среды
38. Составление наборов и определение групповой принадлежности и резус-фактора крови
Определение группы крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В
-
Приготовить тарелку, цоликлоны, стеклянные палочки, часы, исследуемую кровь
-
Разделить тарелку полосой фломастера на 2 части
-
Нанести на тарелку по одной капле цоликлона анти-А и анти-В
-
Нанести на тарелку по одной капле крови (рядом с каплей цоликлона), каждая из которых в 10 раз меньше капли цоликлона
-
Разными концами стеклянных палочек перемешать
-
Покачивать в течение 2,5 минут
-
Читать результаты реакции:
агглютинации нет – 1 группа крови
агглютинация в анти-А - 2 группа крови
агглютинация в анти-В - 3 группа крови
агглютинация в обеих каплях – 4 группа крови
Определение резус-фактора
-
Приготовить пробирки, пипетки, физраствор (раствор хлорида натрия 0,9 %), универсальный реагент-антирезус, исследуемую кровь
-
Нанести на стенку пробирки каплю универсального реагента-антирезуса и каплю крови, равных по размеру
-
Добавить 3 мл. физраствора
-
Перевернуть, не встряхивая
-
Читать результаты реакции:
Наличие агглютинации – исследуемая кровь резус-положительная
Отсутствие агглютинации – исследуемая кровь резус-отрицательная
StudFiles.ru
Читайте также
MED24INfO
Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.- СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ RH-ФАКТОРА В КЛИНИКЕ
- Экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.
- Экспресс-метод на плоскости без подогрева.
- ЛАБОРАТОРНЫЕ СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА
