Главная » Статьи » Иммунохимический тест на скрытую кровь в кале

Иммунохимический тест на скрытую кровь в кале


Иммунохимический тест на скрытую кровь в кале

Люди, страдающие заболеваниями желудка и кишечника, регулярно сдают анализ кала на скрытую кровь. Этот тест применяется для выявления бессимптомных кровотечений из разных отделов пищеварительного тракта.

Исследование проводится в клинической лаборатории, не считается трудоемким. Имеет значение в дифференциальной диагностике анемий. Врачам хорошо известны правила, согласно которым следует организовать сбор кала на скрытую кровь для получения достоверных результатов. С ними непременно должны ознакомиться пациенты при направлении в лабораторию.

Методы диагностики постоянно совершенствуются. Кроме испытанной годами практики бензидиновой пробы (реакции Грегерсена), появился и стал доступным иммунохимический анализ. Выявление в кале скрытой крови оказывает существенную помощь врачам в диагностике заболевания, выборе лечения.

Какая кровь считается скрытой?

Прежде всего следует определиться с терминологией. Если кровь видна на поверхности кала после акта дефекации, то она не относится к скрытому кровотечению. Его и так видно без каких-либо анализов. Причиной такого признака у взрослых людей наиболее часто является разрыв геморроидальных вен, трещины в прямой кишке.

Тест на скрытую кровь в кале имеет в виду выявление незаметного по характеру испражнений признака, когда присутствие крови не видно не только на глаз, но также не определяется при микроскопическом исследовании.

Лабораторные методики способны показать наличие желудочно-кишечного кровотечения при объеме кровопотери менее 50 мл. Это характерно для острых стадий следующих заболеваний:

  • язвенной болезни;
  • полипов кишечника;
  • опухолей;
  • неспецифического язвенного колита;
  • эрозивного гастродуоденита;
  • дивертикулов желудка и кишечника.
Злокачественное новообразование — одно из причин появления скрытой крови в каловых массах

В дифференциальной диагностике врач должен учитывать возможный положительный результат:

  • при кровотечениях из носа, десен;
  • воспалительных заболеваниях небных миндалин и глотки,
  • варикозном расширении вен пищевода, вызванном циррозом печени;
  • язвах пищевода и эрозивном эзофагите;
  • болезни Крона;
  • туберкулезном поражении кишечника;
  • гельминтах у ребенка;
  • заболеваниях крови.

Оценка результатов анализа кала на скрытую кровь проводится врачом в комплексе с другими исследованиями и клиническими проявлениями. Методы выявления имеют свои особенности. В диагностике нужно учитывать их целевое предназначение.

Исследование кала с помощью бензидиновой пробы

Бензидиновая проба получила свое название по основному реактиву в реакции с калом на скрытую кровь. Чаще применяется в модификации Грегерсена (проба Грегерсена), который добавил к бензидину (парадиаминодифенилу по химическому строению) перекись бария и уксусную кислоту для большей активации тестового раствора.

Суть реакции: использование свойства гемоглобина эритроцитов окислять бензидин. Этим методом можно выявить микропримеси крови (гемоглобина эритроцитов) не только в испражнениях, но и в рвотных массах, желудочном соке. Применяется для экспертизы пятен, похожих на кровь, в судебной медицине. Чувствительность пробы составляет 1:100 000. Вспомните опыты Шерлока Холмса (стоит напомнить, что Конан Дойль был врачом).

Важный момент: положительный результат получается не только при воздействии гемоглобина, но и при реакции миоглобина мышечной ткани (в мясе), некоторых витаминов и лекарств с бензидином. Это требует соблюдения подготовительного периода, ограничений в диете.

Техника проведения бензидиновой пробы

Собранный кал в небольшом количестве размазывается по предметному стеклу. На него наносят несколько капель реактива. Если присутствует кровь, то получается сине-зеленая окраска.

При жидком стуле реакцию проводят на фильтровальной бумаге, сквозь которую впитывается лишняя жидкость

Кому назначается реакция Грегерсена?

Основное направление применения — диагностика кровотечений из желудка и кишечника:

  • при уточнении характера и причины анемии;
  • геморрагическом диатезе;
  • подозрении на раковую опухоль и полипоз кишечника;
  • выявлении активности язвы желудка и двенадцатиперстной кишки;
  • подозрении на язвенный колит.

Простота исследования делает возможным его применение для профилактических осмотров лиц в возрасте 50 лет и старше раз в два года. Это помогает в ранней диагностике рака.

Какая нужна подготовка?

Возможность перекрестной реакции с миоглобином требует предварительной подготовки пациента за 3 дня перед взятием кала:

  • необходимо исключить из питания мясные и рыбные продукты, блюда из печени;
  • одновременно нельзя употреблять богатые железом овощи и фрукты (яблоки, шпинат, болгарский перец, белый сорт фасоли, зеленый лук, кабачки, помидоры, цветную капусту);
  • следует прекратить прием препаратов железа, витамин С, Аспирин и содержащие его средства от головной боли, нестероидные препараты противовоспалительного действия (Диклофенак, Напрофен, Ибупрофен);
  • противопоказаны слабительные лекарства и клизмы;
  • для исключения влияния кровоточивости десен не рекомендуется чистить зубы.

Если незадолго до направления на исследование использовались такие диагностические методы, как ректороманоскопия, колоноскопия, рентген желудка и кишечника, то взятие кала на скрытую кровь необходимо отложить на трое суток. Девушки и женщины не должны сдавать анализ кала на скрытую кровь во время месячных. Отсутствие подготовки приводит к ложным положительным результатам.

У детей грудного возраста материал для исследования берут из подгузника

Оценка результатов бензидиновой пробы

Расшифровка анализа кала на скрытую кровь и интерпретация результатов — дело врача. Реакция оценивается только качественно, отрицательный результат отмечается в заключении лаборатории.

Насколько интенсивен исход пробы можно судить по количеству крестов: от одного (+) до четырех (++++). Иногда вместо (+) пишут «следы». В любом случае это означает возможность бессимптомного кровотечения, если не нарушены правила подготовки и сбора кала на скрытую кровь.

Как собрать кал на проведение анализа?

Кал для анализа на скрытую кровь должен быть получен в день исследования естественным путем без клизм и слабительных. Людям с запорами придется, имея направление на руках, подождать стула.В аптеке продаются специальные стерильные емкости с ложечкой и плотной крышкой.

У детей кал собирают из горшка, у грудничков — с подгузника. Взрослому человеку тоже правильно было бы приспособить акт дефекации в чистый горшок или судно, на целлофан или лист бумаги.

Специального подмывания перед сбором не требуется, подходят обычные гигиенические процедуры с теплой водой.

Доставить в лабораторию контейнер нужно до 10 часов утра

Для исследования достаточно количество кала объемом с чайную ложку. Забрать биоматериал нужно понемногу из 2–3 разных участков.Собирать материал для исследования следует в тот же день, на который назначена сдача анализа. Лучше не задерживать транспортировку. Разрешено кратковременное хранение в холодильнике при температуре не ниже +6 градусов.

Иммунохимический метод и его преимущества

Исследование кала на скрытую кровь иммунохимическим методом имеет ряд преимуществ перед реакцией Грегерсена:

  • чувствительность значительно выше;
  • специфичен только к человеческому гемоглобину, не реагирует на миоглобин мяса, витамины и лекарства;
  • не требует специальной диетической подготовки;
  • более подходит для диагностики кровотечений из нижних отделов кишечника, потому что в методике используется реакция на белковую часть гемоглобина, а она активно переваривается в верхних отделах желудочно-кишечного тракта.

Тест включен в алгоритм обследования пациентов при подозрении на колоректальный рак (с локализацией в ободочной и прямой кишках). Результат анализа не содержит информации о конкретном участке кровоточащей пищеварительной системы и причинах кровотечения.

Не следует относиться к нему, как к готовому диагнозу. В случае положительного результата тест показывает, что рекомендуется дополнительно провести колоноскопию для выявления причины кровотечения. Суть метода: использование антител к гемоглобину человека позволяет выявить наличие антигенов в исследуемом материале и дать количественную характеристику.

Когда показано иммунохимическое исследование?

Главными показаниями исследования патологии нижних отделов кишечника является подозрение:

  • на опухоль;
  • полипы;
  • язвенный колит;
  • болезнь Крона.

Использование методики в ранней диагностике колоректального рака (наиболее частой причины онкологической смертности населения) помогает своевременно провести последующее обследование и улучшить прогноз течения болезни.

Алгоритм скрининга населения предусматривает первоочередное проведение иммунохимического исследования со сдачей кала всеми лицами старше 50 лет, а при наследственном неблагополучии с 40 лет – трехкратное. При выявлении положительного результата — назначение колоноскопии.

Специалисты считают, что следование этой программе позволяет сократить показатель смертности от колоректального рака на 25%.

Техника проведения иммунохимического исследования

В методике используется принцип иммунохроматографии:

  • каплю исследуемого материала помещают в лунку планшета, в который предварительно нанесен реактив со специфическими антителами и красителем;
  • при наличии антигена из гемоглобина эритроцитов между ними происходит реакция;
  • образуется окрашенный комплекс;
  • с жидкостью комплекс переходит в тестовую зону, по ходу соединяется дополнительно с антителами;
  • в зоне тестирования задан определенный пороговый уровень концентрации гемоглобина, его превышение в образце проявляется маркировкой розово-фиолетового цвета.
Лаборант может проводить сразу несколько анализов

Как проводится интерпретация результатов?

Тест дает ложноотрицательный ответ при отсутствии в сданной пробе кала свободного гемоглобина, наличии только неразрушенных эритроцитов, например, если имеется наружное кровотечение из трещины заднего прохода.

Физиологическая потеря эритроцитов с калом формирует предел для нормального уровня результата —14 нг/мл. Диагностические пороги устанавливаются в зависимости от целей исследования. Например, для выявления рака в группе риска — 50 нг/мл считается нормальной концентрацией свободного гемоглобина.

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

В отличие от бензидиновой пробы не требуется специальных ограничений диеты. Но есть свои особенности:

  • необходимо решить с лечащим врачом вопрос о возможности до исследования применения препаратов, повышающих риск кровотечений (производных Аспирина, нестероидные противовоспалительных препаратов);
  • анализ не проводится в течение 14 дней после инструментальных исследований желудка и кишечника, очищающих клизм, колоноскопии, ректороманоскопии (они могут вызвать повреждение слизистой);
  • не рекомендуется делать забор фекалий из унитаза, лучше использовать лист бумаги, клеенку, целлофан;
  • стандартный контейнер нужно заполнить на 1/3;
  • доставка в лабораторию должна быть обеспечена в течение 12 часов после дефекации;
  • можно до транспортировки хранить образец в холодильнике при температуре плюс 4–8 градусов.
Кал нужно получить без клизм и слабительных

Возможна ли ускоренная экспресс-диагностика?

Вопрос сколько времени делается анализ нужно узнать в лаборатории, куда доставляют материал исследования. В аптечной сети можно найти специфичный тест «ИммуноХРОМ-ГЕМ-Экспресс». Это вариант иммунохимического быстрого определения гемоглобина.

Провести можно в домашних условиях. Но предварительно очень внимательно следует ознакомиться с инструкцией и выполнить требования подготовки. На получение результата бензидиновой пробы уходит несколько минут. Заключение пациент может получить к концу рабочего дня. Проведение иммунохимического теста потребует 3–6 дней.

Проведение исследования кала на скрытую кровь — важный момент диагностики многих заболеваний. К подготовке и правилам сдачи анализа следует относиться серьезно. Это позволит избежать тяжелых осложнений в будущем.

Иммунология и биохимия

Источник кровотечения и внутрипросветный метаболизм гемоглобина (Hb) 

Кровь в кале - результат желудочно-кишечных кровотечений, которые теоретически могут происходить из всех отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), но место кровотечения определяет внутрипросветный метаболизм Hb. Таким образом, Hb и его фрагменты - гем и глобин, появляются в кале в различных формах в зависимости от источника кровотечения. Hb из верхних отделов ЖКТ расщепляется на гем и глобин желудочным пепсином и панкреатическими протеазами. Часть гема, которая не реабсорбируется в тонкой кишке, превращается в порфирины и железо. Таким образом, если источник кровотечения находится в верхней или средней части ЖКТ, показателем крови в кале является частично расщепленный гем, тогда как цельный гем появляется в кале в том случает, если источник кровотечения находится в нижней части желудочно-кишечного тракта.

Глобин, белковая часть Hb - в верхних отделах ЖКТ расщепляется пепсином, а также протеазами поджелудочной железы и кишечника. При кровотечениях из верхнего отдела отсутствует в фекалиях и не может использоваться как показатель крови в кале. Частично расщепленный глобин может присутствовать в кале, если кровотечение происходит из среднего отдела ЖКТ, неповрежденный глобин можно найти в кале, если кровь поступает в кал из нижней части ЖКТ. Так как глобин переваривается в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, то глобин (гемоглобин) является лучшим, чем гем или порфирины, маркером крови в кале из нижнего отдела ЖКТ.

В то время как структура гема и его метаболитов одинакова у животных и человека, глобин - видоспецифичный, т.е. человеческий гемоглобин как таковой отличен от гемоглобина животных благодаря глобину.

Принцип иммунохимического определения скрытой крови в кале из нижних отделов кишечника

Специфичность Hb человека определяется его белковой частью - глобином. При иммунизации животных Нb человека получают анти-Hb антитела. При наличии в кале крови человека анти-Hb антитела специфически связывают Hb фекалий и не реагируют на Hb пищи. Продукт этой реакции называется иммунный комплекс. Имеющиеся на рынке тест системы отличаются способом выявления иммунного комплекса, образующегося при наличии скрытой крови в кале. К каждой системе прилагается правила взятия кала для анализа, его проведение и учет результатов.

Специфичность Hb человека снимает какие-либо диетические или лекарственные ограничения при проведении теста на скрытую кровь с использованием принципов иммунохимии. Иммунохимический тест выявления крови в кале характеризуют высокие специфичность и чувствительность, он наиболее экономически эффективный.

На последнем Европейском конгрессе гастроэнтерологов в Лондоне в ноябре 2015 года эксперты четко указали, что иммунохимический тест выявления скрытой крови в кале является анализом сегодняшнего и завтрашнего дня, гваяковый тест относится к прошлому и устаревшему.

Чувствительность иммунохимического теста при колоректальном раке более 80%. Кровотечения из верхних отделов кишечника не оказывают влияние по результат теста.

Понятие о чувствительность и специфичности 

Чувствительность представляет собой долю действительно больных людей, которые идентифицированы как больные с помощью теста. Чувствительность - мера вероятности правильного диагностирования состояния. Специфичность - это доля действительно здоровых людей, выявленных с помощью теста. Следовательно, если чувствительность теста 80%, то это значит из 100 человек, больных КРР, тест на скрытую кровь положительный у 80 пациентов.

Какие исследования назначают, если тест на скрытую кровь положительный

При положительном гваяковым или иммунохимическом тесте назначают ректороманоскопию или колоноскопию, которые позволяют врачу увидеть слизистую толстой кишки, выявить полипы или, другие отклонения.

Иммунохимический тест на скрытую кровь в кале в скрининговой диагностике колоректального рака

С.И. ПИМАНОВ, Е.И. МИХАЙЛОВА, В.М. БОНДАРЕНКО

ИММУНОХИМИЧЕСКИЙ ТЕСТ НА СКРЫТУЮ КРОВЬ В КАЛЕ В СКРИНИНГОВОЙ ДИАГНОСТИКЕ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА

УО «Витебский государственный медицинский университет», УО «Гомельский государственный медицинский университет», Гомельский областной клинический онкологический диспансер, Республика Беларусь

Колоректальный рак представляет собой одну из самых актуальных проблем современной медицины, так как занимает в структуре онкологических заболеваний по частоте третье и по смертности второе место после рака легких. Однако в половине случаев диагностика колоректального рака запаздывает. В то же время существуют надежные доказательства того, что снижение уровня смертности от колоректального рака может быть достигнуто путем выявления и лечения ранних его форм путем проведения массового скринингового обследования населения старше 50 лет. Для этих целей необходим экономически целесообразный, неинвазивный метод, которым, по мнению большинства исследователей, в настоящее время является гемоккульт-тест. Целью нашего исследования явилось изучение диагностических возможностей иммунохимического теста на скрытую кровь в кале в скрининго-вой диагностике колоректального рака в сравнении с гемоккульт-тестом. В результате исследования установлено, что иммунохимический тест позволяет быстро и эффективно проводить скрининговую диагностику колоректального рака, превосходя по точности гемоккульт-тест.

The colorectal cancer represents one of the most actual problems of the modern medicine as it occupies the third place on frequency and the second on mortality rate after carcinoma of the lungs in the structure of the oncological diseases. However, in half of cases the diagnostics of the colorectal cancer is belated. At the same time there are reliable proofs that the mortality decrease from the colorectal cancer can be achieved by revealing and treatment of its early forms by carrying out mass screening examination of the population at the age elder than 50 years. For these purposes, economically expedient, noninvasive method is necessary which, in opinion of the majority of researchers, actually the hemoccult test is. The purpose of our research was the studying of the diagnostic possibilities of the immunochemical test for the occult blood in feces in the screening diagnostics of the colorectal cancer. As a result of the research, it was determined, that the immunochemical test allows making the screening diagnostics of the colorectal cancer quickly and effectively, surpassing on accuracy the hemoccult test.

Колоректальный рак представляет собой одну из самых актуальных проблем современной медицины, так как занимает в структуре онкологических заболеваний по

частоте третье и по смертности второе место после рака легких. По данным IDCA (International Digestive Cancer Alliance) ежегодно в мире регистрируется 950 000 новых

случаев колоректального рака, накопленный для анализа контингент составляет более 3,5 млн. человек. Максимальная заболеваемость колоректальным раком зарегистрирована в штате Коннектикут (США) и Саскачеване (Канада) - 50 случаев на 100 000 населения [1]. В России в настоящее время колоректальный рак занимает 3-е место [2]. При этом частота рака ободочной кишки составляет 11,6 у мужчин и 9,2 у женщин на 100 тысяч взрослого населения. Заболеваемость раком прямой кишки соответственно составила среди мужчин 11,0 и среди женщин 7,1 на 100 тысяч взрослого населения. Если в 1991 г. в Республике Беларусь заболеваемость колоректальным раком составляла 11,5 на 100 тыс. населения, то к 2003 г. этот показатель вырос до 17,8 [1].

Пятилетняя выживаемость больных колоректальным раком за последние 5 лет возросла с 46 до 62%, однако величина этого показателя целиком определяется стадией болезни на момент постановки диагноза [1, 3]. При локальной форме рака она составляет 92%, при раке с регионарными метастазами - 64%, при раке с отдаленными метастазами - 7%. В 41% случаев диагностика происходит на стадии не распространяющегося за пределы кишки рака, в 43% -рака с метастазами в регионарные лимфатические узлы, в 16% - рака с отдаленными метастазами [3]. За рубежом структура выявляемое™ колоректального рака по стадиям сходная. Во время первичной диагностики в США у 37% больных рак выявляется без метастазов, у 28% - с регионарными метастазами и у 35% - с отдаленными [1]. В Республике Беларусь аналогичные показатели ранней диагностики колоректального рака также неудовлетворительные. Так, в 1995 г. только у 29,7% больных этот диагноз установлен на 1-2 стадиях заболевания, в то время как у 32,0% пациентов диагностирован уже на 4 стадии [1]. В 2003

г. аналогичные показатели составили 50,0% и 21,6% соответственно [2].

Даже исходя из этих цифр, приходится признать, что в половине случаев диагностика колоректального рака запаздывает. В то же время существуют надежные доказательства того, что снижение уровня смертности от колоректального рака может быть достигнуто путем выявления и лечения ранних его форм наряду с выявлением и удалением аденоматозных полипов [4]. Применение широкомасштабных эндоскопических и рентгенологических методов обследования в этих целях потребовало бы значительных экономических затрат от общества, что не реально на сегодняшний день. Так, при проведении колоноскопии в качестве скрининговой программы 1 раз в 10 лет стоимость продления жизни больного колоректальным раком на один год составляет $9000-$22000 [4]. Нельзя не учитывать при этом и негативное отношение практически здоровых людей к инвазивным методам диагностики. Для проведения массового профилактического обследования населения необходим экономически целесообразный, неинвазивный метод, кото -рый позволил бы заподозрить заболевание и указал на необходимость углубленного обследования. По мнению большинства исследователей, таким методом в настоящий момент является тест на скрытую кровь в кале, основанный на гваяковой реакции, модернизированный Грегором и названный «гемоккульт-тест». Гемоккульт-тест позволяет снизить смертность от колоректального рака на 15-33% [5]. Тем не менее, несмотря на то, что чувствительность гемоккульт-теста к колоректальному раку превышает 60%, при ранних его формах она невысока и не достигает даже 30% [5]. В то же время гемоккульт-тест не в со -стоянии выявить до 59% аденом толстой кишки [1], что создает благоприятные условия сначала для их перерождения в аде-

нокарциному, а в дальнейшем и для про -грессирования самой злокачественной опухоли [5]. По этой причине поиск простых неинвазивных способов ранней диагностики колоректального рака, определяющих показания к проведению эндоскопического исследования, является по-прежнему актуальным.

Целью нашего исследования явилось изучение диагностических возможностей иммунохимического теста на скрытую кровь в кале в скрининговой диагностике колоректального рака в сравнении с гемок-культ-тестом.

Материалы и методы

В группу исследования вошли 58 больных колоректальным раком (средний возраст 65,88±12,11 лет), 37 пациентов с полипами кишечника (средний возраст 62,16±2,17 лет), 57 больных синдромом раздраженного кишечника (средний возраст 50,05±14,87 лет) и 26 здоровых добровольцев (средний возраст 59,68±18,28 лет).

Диагностика рака и полипов толстой кишки производилась с помощью колонос-копии со взятием биопсии. Использовались общепринятые эндоскопические визуальные признаки диагностики патологии толстой кишки [7]. Морфологическая верификация включала гистологическое исследование биоптатов кишки и микроскопию препаратов из операционного материала [8].

Гистологическая классификация опухолей произведена в соответствии с рекомендациями ВОЗ (№ 15 ВОЗ, Женева, 1981): опухоли подразделены на высоко-, умеренно-, низко-дифференцированные аденокар-циномы и недифференцированные новообразования [9]. Выделение стадий колоректального рака осуществляли, основываясь на разработанной Международным Противораковым Союзом системой TNM: T (tumor) - первичная опухоль, N (nodulus) - ре-

гиональные лимфатические пути, M (metastasis) - метастазы [10].

Среди больных колоректальным раком было 29 женщин и 29 мужчин. У 24 больных колоректальным раком опухоль локализовалась в прямой кишке, у 19 - в левых отделах толстой кишки и поперечной ободочной кишке, у 12 - в правых отделах толстой кишки, и у 3 пациентов был обнаружен синхронный рак толстой кишки. При гистологическом исследовании у 54 больных была выявлена аденокарцинома толстой кишки различной степени дифферен-цировки (высокодифференцированная - 8, умереннодифференцированная - 34, низко-дифференцированная - 12) и у 4 пациентов - недифференцированное новообразование. Распространенность опухоли была следующей: Т1 - у 3 больных, Т2 - у 6, Т3 - у 13 иТ4 - у 36 пациентов.

Здоровые добровольцы, не имевшие симптомов заболевания кишечника и не подвергавшихся абдоминальным хирургическим вмешательствам, составили группу контроля.

Всем больным синдромом раздраженного кишечника диагноз был выставлен на основании Римских II критериев, а также клинически определено отсутствие иной органической патологии. Для исключения синдромосходной патологии пациентам проводились также дополнительные лабораторные и инструментальные методы исследования (ирригоскопия, ректороманоскопия и/или колоноскопия, копрологическое исследование, микробиологический анализ кала, биохимический анализ крови на сахар, общий белок, трансаминазы, билирубин, креатинин), по показаниям - фиброгастроскопия, рентгеноскопия желудка, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, дуоденальное зондирование.

Наличие гемоглобина в кале определялось с помощью гемоккульт-теста, произве-

денного фирмой «gabOkkult» (Германия), и иммунохимического теста на скрытую кровь в кале наборами фирмы «Biotech Atlantic, Inc.» (США).

Гемоккульт-тест, действие которого основано на клее «гваяк», который может окисляться в присутствии пероксидазы и перекиси водорода, проводили с пробами, взятыми из 3 последовательных дефекаций спустя 3 дня после исключения из употребления пищевых продуктов и лекарственных средств, искажающих результаты исследования.

Иммунохимические тесты на скрытую кровь в кале, основанные на иммунологической реакции с человеческим гемоглобином, не требуют специальной диеты и ограничения приема медикаментов. Кал для постановки иммунохимических тестов забирали из одной дефекации без соблюдения больным предварительной диеты. Чувствительность теста составляет 50 нг гемоглобина человека на 1 мл кала или 12,5 мкг гемоглобина на 1 г кала. Если невозможно было выполнить тест сразу же после взятия образца, то образец хранился в течение одной недели в плотно закрытом приемнике при температуре от 2 до 8°С.

Статическая обработка данных проведена с применением пакета прикладных программ STATISTICA 6 фирмы StatSoft 1пс.(США). Для анализа различия частот в двух независимых выборках использовался двусторонний тест точного критерия Фишера. Выявление статистической взаимосвязи между качественными признаками производилось по таблицам сопряженности с помощью метода Пирсона. Для анализа точности диагностического метода использовались общепринятые диагностические характеристики [11]. Сравнение диагностических характеристик проводили с использованием критериев МакНемара. Статистически значимыми считали различия при уровне р0,05) и стадией процесса (Х2= 3,51; р>0,05).

Чувствительность гемоккульт-теста в диагностике колоректального рака составила 53,8%, специфичность - 81,1%, эффективность - 67,5%, точность - 69,8%, прогностическая ценность положительного результата - 66,7%, прогностическая ценность отрицательного результата- 71,4% (рис. 1). Количество ложноположительных результатов, по нашим данным, составило 18,9%.

Полученные нами данные согласуются с результатами других исследований. Учитывая, что биохимической основой этого теста является индикация активности пе-роксидазы, что делает возможным обнаружение гемоглобина, миоглобина, гема, а также и негемовых пероксидаз в слайдах-отпечатках кала больного, реакция приводит к большому числу ложно по ложитель-ных ответов - 19-21% [8]. Для повышения специфичности методики обследуемые должны в течение трех дней перед проведением теста соблюдать специальную диету с ограничением продуктов, содержащих

пероксидазу (мясо, сырые овощи, например, редис, турнепс, брокколи), а также избегать приема некоторых лекарственных средств (препараты железа, аскорбиновая кислота и др.), что делает применение подобных программ обременительным для пациентов. Проба имеет чувствительность на уровне 53-82% [1], что было показано на примере нескольких контролируемых исследований в ряде Европейских стран. При проведении подобной программы в Дании во время первичного скрининга был пропущен каждый второй рак ободочной кишки [12], в Великобритании — каждый третий [13], а по результатам небольшого исследования в Швеции — более трех случаев из четырех [14].

Таким образом, недостатки гваякового теста на скрытую кровь в кале многочисленны и включают обременительное соблюдение диеты, длительный и неудобный забор кала, невысокую чувствительностью и издержки, связанные со специфичностью теста.

Чувствительность иммунохимического теста в диагностике колоректального рака

Чувствительность Эффективность ПЦОР

Примечание: ПЦПР - прогностическая ценность положительного результата; ПЦОР -прогностическая ценность отрицательного результата

Рис. 1. Диагностические характеристики гемоккульт-теста в скрининговой диагностике колоректального рака.

Чувствительность Эффективность ПЦОР

Примечание: ПЦПР - прогностическая ценность положительного результата; ПЦОР -прогностическая ценность отрицательного результата

Рис. 2. Диагностические характеристики иммунохимического теста на скрытую кровь в кале в скриниговой диагностике колоректального рака

оказалась равной 93,8%, специфичность -88,9%, эффективность - 91,4%, точность -90,9%, прогностическая ценность положительного результата - 85,7%, прогностическая ценность отрицательного результата - 95,2% (рис.2). Количество ложно -положительных результатов, по нашим данным, составило 11,1%, а ложноотри-цательных - 6,3%.

Полученные нами данные также согласуются с результатами других исследований. Чувствительность иммунохимического теста, по данным различных авторов, весьма вариабельна и колеблется в пределах 26-95%, специфичность приближается к 90%. [1]. Биохимической основой данной пробы является иммунореакция с человеческим гемоглобином: гемагглютинация и поздние агглютининовые тесты, поэтому тест не реагирует с нечеловеческим гемоглобином и пероксидазой, содержащейся в овощах и фруктах, что исключает зависимость от соблюдения предварительной диеты. Количе-ство ложноположительных результатов, по литературным данным, стремится к 5% [1].

Гемоккульт-тест в нашем исследовании уступал иммунохимическому тесту на скрытую кровь в кале по диагностической точности в выявлении колоректального рака (р

Скрытая кровь в кале, количественно (метод FOB Gold): исследования в лаборатории KDLmed

Иммунологический метод количественного определения гемоглобина в кале, который позволяет диагностировать незначительное скрытое кровотечение из нижних отделов желудочно-кишечного тракта.

Синонимы русские

Скрытая кровь в кале (количественный иммунохимический метод).

Синонимы английские

FOB Gold Test, Immunological faecal occult blood test (iFOBT).

Метод исследования

Иммунохимический метод.

Единицы измерения

Нг/мл (нанограмм на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Кал.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонны, пилокарпина и др.), за 72 часа до сбора кала.
  • Исследование проводить перед выполнением ректороманоскопии и других диагностических манипуляций в области кишечника и желудка или не менее чем через 2 недели после таковых.

Общая информация об исследовании

Колоректальный рак – один из самых распространенных видов опухолей как по частоте заболеваемости, так и по летальным исходам. Он занимает второе место по смертности среди злокачественных новообразований у мужчин и женщин. Каждый год регистрируется более 1 миллиона новых случаев заболевания во всем мире, а ежегодная смертность превышает 500 000. Риск развития заболевания увеличивается с возрастом, 90 % заболевших – это население в возрасте более 55 лет. По эпидемиологическим данным, наследственность является причиной развития колоректального рака у 5-30 % больных. К наследственным синдромам, при которых значительно повышается риск заболеть им, относятся семейный аденоматозный полипоз, синдром Линча, ювенильный полипоз и некоторые более редкие состояния. 5-тилетняя выживаемость пациента зависит от стадии рака на момент диагностики.

Колоректальный рак развивается медленно, в течение нескольких лет. Опухоль нередко возникает в результате преобразования полипа слизистой оболочки кишечника. Данный процесс может занимать от 8 до 12 лет. Не все виды полипов способны превращаться в опухоль, однако их наличие, особенно в больших количествах, существенно увеличивает риск развития колоректального рака. К другим предраковым состояниям относится дисплазия, которая характерна для людей с язвенным колитом, болезнью Крона.

При колоректальном раке кровь с каловыми массами может выделяться задолго до первых симптомов болезни. Скрининговое исследование кала на скрытую кровь среди людей из групп риска помогает вовремя диагностировать болезнь и снизить смертность от колоректального рака на 15-33 %. Эффективность такого скрининга подтверждена несколькими исследованиями.

Для выявления скрытой крови в кале наиболее часто используются гваяковая или бензидиновая пробы, однако для их проведения требуется строгое выполнение некоторых правил, в частности соблюдение диеты за несколько дней до сдачи анализа. Кроме того, в отличие от гваяковой пробы современные иммунохимические методы обладают высокой чувствительностью и специфичностью.

Доказано, что иммунологический тест на скрытую кровь в кале (FOB) – это самый удобный тестовый метод, благодаря простоте и эффективности работы с пациентами. Он позволяет точно определить количество гемоглобина (НЬ) в кале, при этом пациентам не требуется соблюдать диету или менять свой образ жизни. Метод основан на реакции агглютинации антиген-антитело между присутствующим в образце гемоглобином человека и анти-гемоглобин-антителом на латексных частицах. Агглютинация измеряется как увеличение при абсорбции в 570 нм, единица которой пропорциональна количеству гемоглобина человека в образце. При исследовании определяется скрытая кровь, которая попала в просвет кишечника в нижних отделах желудочно-кишечного тракта, так как гемоглобин из верхних отделов разрушается при прохождении через пищеварительный тракт.

Положительный результат анализа требует дальнейшего обследования для уточнения причин, так как источником незначительной кровопотери может служить доброкачественный полип, дивертикул, геморрой или воспалительные заболевания кишечника. Тест на скрытую кровь положителен в среднем у 1-5 % людей, из них у 2-10 % выявляется рак, а у 20-30 % – аденоматозные полипы толстой кишки. При положительной реакции на скрытую кровь проводится дополнительное обследование в целях обнаружения рака, полипа или другой причины, вызывающей кровотечение. Для подтверждения диагноза больным при отсутствии противопоказаний назначается колоноскопия, сигмоскопия или рентгенография с двойным контрастированием. Отсутствие крови в кале не позволяет полностью исключить возможность наличия колоректального рака, поэтому лицам с высоким риском (при семейном анамнезе) рекомендована эндоскопия даже при отрицательном результате анализа.

Для чего используется исследование?

  • Для скрининга рака толстой и прямой кишки.
  • Для диагностики кровотечения из нижних отделов желудочно-кишечного тракта при некоторых доброкачественных и воспалительных заболеваниях (полипы толстого кишечника, болезнь Крона, язвенный колит, геморрой).

Когда назначается исследование?

  • При профилактическом ежегодном обследовании лиц в возрасте 50-75 лет.
  • При подозрении на скрытое кишечное кровотечение.

Что означают результаты?

Референсные значения: 0 — 50 нг/мл.

Положительный результат указывает на незначительное кровотечение из нижних отделов желудочно-кишечного тракта. Для уточнения причины кровотечения необходимы эндоскопические методы диагностики (сигмоскопия, колоноскопия).

Возможные причины положительного результата:

  • рак толстой или прямой кишки,
  • полипы и аденомы толстого кишечника,
  • воспалительные заболевания толстого кишечника (болезнь Крона, язвенный колит),
  • дивертикулез кишечника,
  • геморрой.

Отрицательный результат не может полностью исключить возможность наличия колоректального рака.

Что может влиять на результат?

  • Повреждение слизистой кишечника при медицинских манипуляциях (колоноскопии, сигмоскопии, клизмах), проведенных за несколько дней до исследования, способно привести к ложноположительным результатам.

Важные замечания

  • Пробу необходимо отбирать из трех разных участков.
  • Исследование не рекомендовано проводить в течение двух недель после колоноскопии, сигмоскопии, очистительных клизм.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Гастроэнтеролог, проктолог, хирург, терапевт, онколог.

Литература

  • European guidelines for quality assurance in colorectal cancer screening and diagnosis: overview and introduction to the full supplement publication. Endoscopy. 2013 Jan;45(1):51-9.
  • Haug U, Hundt S, Brenner H. Quantitative immunochemical fecal occult blood testing for colorectal adenoma detection: evaluation in the target population of screening and comparison with qualitative tests. Am J Gastroenterol. 2010 Mar; 105(3):682-90.
  • Levi Z, Rozen P, et al. A quantitative immunochemical fecal occult blood test for colorectal neoplasia. Ann In tern Med. 2007 Feb 20;146(4):244-55.

Смотрите также