Главная » Статьи » Серологическая диагностика это

Серологическая диагностика это


72. Серологический метод диагностики инфекционных заболеваний.

Особую ценность имеет в том случае, если выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров АТ , в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10 – 20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным). Антитело обычно появляется в крови на 1-2ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Igчетко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием. Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс – диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.

В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).

РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH - способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.

Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3—5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4 °С до постановки реакции. Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5-7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.

Однако кровь для серологических исследований берется и в первые дни болезни, что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические исследования при бактериальных инфекциях производятся не раньше, чем через 5-7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интервалом 10-12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза и более подтверждается диагноз предполагаемого заболевания.

Серологическая диагностика инфекционных болезней - методы, определения, суть, правила

Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.

В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).

РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH - способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.

Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3—5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4 °С до постановки реакции. Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5-7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.

Однако кровь для серологических исследований берется и в первые дни болезни, что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические исследования при бактериальных инфекциях производятся не раньше, чем через 5-7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интервалом 10-12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза и более подтверждается диагноз предполагаемого заболевания.

Структура ответа. Методы серологической диагностики, суть. Правила забора крови. Трактовка результатов. Парные сыворотки.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ

ActionTeaser.ru - тизерная реклама

Как используют серологические реакции для диагностики? :

Серологией (от лат. serum — сыворотка), называют науку о свойствах сыворотки крови человека. Определение серологических реакций будет представлено ниже.

Одной из основных задач серологии на сегодняшний день считается разработка способов изготовления специфических сывороток для диагностики и лечения, оценка степени их активности и определение механизмов воздействия на человека. Серологическим анализом крови называется способ лабораторных исследований для определения в биологическом материале пациентов антигенов или антител (специфических белков), которые содержит сыворотка крови пациента. Серологические исследования не считаются стопроцентно специфичными и чувствительными при диагностике заболеваний инфекционного характера. Поэтому оценка результатов исследований возможна только при учете клинической картины болезни в целом. Специалисты предпочитают для более достоверной диагностики проведение нескольких тестов.

Серологические реакции – что это?

При лабораторной диагностике большинства инфекционных заболеваний используется способ выявления в крови пациента антител, вырабатываемых на антигены возбудителя. Они используются во врачебной практике с начала двадцатого века. С развитием науки современные врачи научились определять антигены в структуре микробов, а также выявили химическую формулу их токсинов. Это дало возможность разработать сыворотки, предназначенные не только для излечения, но и диагностики инфекционных заболеваний. Сыворотки производят путем введения лабораторным животным ослабленных возбудителей. Постановка серологических реакций сейчас очень популярна.

По истечении нормативного времени выдержки из крови лабораторных животных делают препараты. Их используют при серологических реакциях для идентификации микробов или их токсинов. Метод основан на иммунной реакции человеческого организма. Данное исследование применяют в диагностике заболеваний инфекционного характера, чтобы выявить наличие или отсутствие антител у пациента к каким-либо вирусам или бактериям, а также для того, чтобы определить группу крови. Внешние проявления серологических реакций зависят от условий проведения и того состояния, в котором находятся антигены в крови пациента. Если микробы не растворяются, то они выпадают в осадок, лизируются, связываются или иммобилизуются в сыворотке. Если происходит растворение антигенов, то выявляют феномен нейтрализации или преципитации. Серологические реакции применяются давно.

Материал для исследования

При проведении серологического исследования используют частицы биологического материала, собранного от пациента: кровь, слюна, фекалии. В ряде случаев исследуют материал, собранный в некоторых объектах окружающей среды: вода, земля.

Как именно проводятся серологические реакции в микробиологии?

Методика забора биологического материала

При данном анализе не нужно специально подготавливать пациента. Забор крови осуществляют утром до приема пищи в процедурном кабинете лечебного учреждения с использованием общепринятых гематологических методов. Для данного анализа забор крови производят с помощью двух методик: венозную кровь берут из локтевой вены, а капиллярная кровь забирается из пальца. Материал для анализа находится в стерильных герметичных пробирках.

Что нужно для постановки серологических реакций?

Особенности транспортировки и хранения биологического материла

Сразу же после взятия крови её перевозят в специальную лабораторию, где в этот же день осуществляют подготовку сыворотки. Хранить ее можно не более четырех или шести дней в холодильнике при температуре от 2 до 4 градусов. Если требуется сохранить сыворотку более длительный срок, то она замораживается. Для того чтобы не нарушать качество биологического материала, замораживание и размораживание можно производить только однократно. Длительное хранение делает антитела неактивными, и они теряют часть своих свойств. Самыми чувствительными к снижению температуры хранения считаются иммуноглобулины класса М.

После того как сыворотка разморожена, ее хорошо перемешивают, чтобы получить однородный состав. Это помогает восстановить концентрацию антител, которые содержатся в этом материале.

Серологические исследования – для чего используют?

Методику серологических реакций используют для диагностики эхинококкоза, трихинеллёза, токсокароза, описторхоза, цистицеркоза, токсоплазмоза, амебиаза, лямблиоза. Требуется это для того, чтобы определить эффективность назначенного курса лечения, а также обнаружить рецидив заболевания, последовавший после выздоровления больного. Где чаще всего проходит использование серологических реакций?

Основные методы диагностики

Микробиологами и иммунологами в большинстве случаев применяются реакции агглютинации, преци­питации, нейтрализации, реакции с участи­ем комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологичес­кий, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный методы).

Реакция агглютинации (РА)

Серологическое исследование методом агглютинации достаточно просто выполняется и в тоже время весьма наглядно. Это позволяет быстро определить, содержит ли антигены сыворотка крови больного. Реакция используется для диагностики брюшного тифа, паратифа и сыпного тифа. В основе ее лежит специфическое взаимодействие между человеческими антителами (агглютининами) и микробами (агглютеногенами). В процессе их взаимодействия происходит образование частиц, выпадающих в осадок. Это и является положительным признаком. Для проведения реакции можно пользоваться живыми или убитыми микробными агентами, грибами, простейшими, клетками крови и соматическими клетками. Химическое исследование проводится с разделением на две стадии: на первом этапе происходит соединение антител с антигенами, в последующем - выпадение осадка (образуется агглютинат) при реакции.

Серологический метод диагностики может быть и иным.

Реакция непрямой агглютинации (РПГА)

Эта реакция считается более чувствительной, чем предыдущая. Она используется для диагностики заболеваний, которые вызывают различные бактерии, внутриклеточные паразиты, простейшие. Этот анализ позволяет обнаружить концентрацию антител даже в очень низком количестве. Для его проведения необходимо использование очищенных эритроцитов баранов и красных кровяных телец человека, предварительно обработанных антителами или антигенами (в зависимости от того, что именно хотят найти в лаборатории). В некоторых случаях используют человеческие эритроциты, обработанные иммуноглобулином. Серологическая реакция эритроцитов считается состоявшейся, если эритроциты выпали в осадок на дно пробирки. Когда же клетки расположены в виде перевернутого купола и занимают все дно пробирки, это говорит о положительной реакции. Отрицательной реакция считается, если эритроциты оседают в виде столбика или пуговкой в середине дна.

Проводятся серологические реакции на сифилис.

Реакция преципитации (РП)

Для того чтобы выявить крайне малые частицы антигенов, используется реакция преципитации. Это может быть белок (или его часть), соединения белков, липидов или углеводов, частично представленные бактерии и их токсины. Сыворотку для проведения анализа при помощи этой реакции получают, заражая лабораторных животных, обычно это кролики. Таким методом пользуются для получения почти любой преципитирующей сыворотки.

Механизм проведения серологической реакции преципитации похож по действию на реакцию агглютинации. Антитела, которые содержатся в сыворотке, смешиваются с антигенами в коллоидном растворе, соединяясь в крупные белковые молекулы. Эти молекулы оседают на дно пробирки или на гелевый субстрат. Этот вариант исследования считается высокоточным, и с его помощью можно обнаружить даже ничтожно малые дозы вещества. Реакция преципитации, также получившая широкое распространение в судебной медицине, позволяет диагностировать чуму, туляремию, сибирскую язву, менингит.

Реакции подобного типа проводят не только в жидкой среде, но используют для этой цели агаровый гель. Называется эта процедура методом диффузной преципитации. Она дает возможность изучить сложносоставные антигенные смеси. В геле антитела и антигены движутся друг к другу с неодинаковой скоростью и при встрече создают линии преципитации, по которым и дается заключение.

Какой еще известен метод серологической реакции?

Реакция нейтрализации (РН)

Сыворотки, обладающие антитоксическими свойствами, нейтрализуют действие экзотоксинов, которые вырабатываются микроорганизмами. На этом взаимодействии основывается серологическая реакция данного типа. В микробиологии используется этот метод для титрования сывороток, токсинов и анатоксинов, а также обозначения их лечебной активности. Кроме того, с помощью данной реакции можно определить принадлежность экзотоксина к определенному виду или типу. Этим способом диагностируют столбняк, дифтерию и ботулизм. Исследование проводят и на планшете, и в гелевом субстрате.

Также серологические реакции используют и для других анализов.

Реакция лизиса (РЛ)

Сыворотка, попадающая в организм пациента, наделена, помимо основной функциональной задачи - обеспечения пассивного иммунитета, еще и растворяющими свойствами. Она способствует растворению микробов, клеточных чужеродных элементов и вирусов, поступающих в организм пациента. В зависимости от состава антител сыворотки подразделяются на бактериолизины, цитолизины, спирохетолизины, гемолизины и другие. Эти антитела носят название комплимента. Антитела содержат практически все жидкости человеческого организма, они имеют непростую белковую структуру и очень чувствительны к повышению температурного режима, встряхиваниям, воздействию кислоты и прямого солнечного света. Но в сухом состоянии способны сохранять свои лизирующие свойства до 6 месяцев.

Проводят следующие серологические реакции крови этого типа: бактериолиз, гемолиз.

Реакция бактериолиза проводится с использованием сыворотки крови больного и специфической иммунной сыворотки с активными микробами. Если в крови находится достаточно комплимента, то лаборант станет свидетелем лизиса бактерий, а реакция будет сочтена положительной. Вторая разновидность серологической реакции данного типа заключается в том, что эритроциты пациента обрабатываются с помощью сыворотки, которая содержит гемолизины, активизирующиеся только при наличии какого-либо вида комплимента. Если он присутствует, то исследователь будет наблюдать растворение эритроцитов. Именно этот способ используется при проведении реакции Вассермана (сифилис).

Реакция связывания комплимента (РСК)

Это исследование используют с целью обнаружения в крови пациента антител к инфекции и определения возбудителей по их антигенной структуре. Все предыдущие описанные реакции считаются простыми. РСК – это сложная реакция, поскольку в ней вступает во взаимодействие не два, а три компонента: антитело, антиген и комплимент. Сущность ее состоит во взаимодействии между антителом и антигеном, которое происходит лишь при наличии белков комплимента, адсорбирующихся сверху образовавшегося комплекса АГ-АТ. Антигены после добавления комплимента существенно изменяются, именно эти преобразования и показывают качество реакции. Это может быть лизис, гемолиз, иммобилизация, бактерицидное или бактериостатическое действие.

Вышеперечисленные реакции отличаются друг от друга техникой постановки, но, все они в основе своей имеют реакцию взаимодействия антигена и антитела и применяются с целью их выявления. Существует еще несколько видов серологических реакций со схожим принципом действия.

Серологические маркеры инфекций: расшифровка лабораторного ребуса

Со времени открытия серологических маркеров инфекций данный анализ является основным в лабораторных исследованиях. Цель его проведения – помощь в распознавании заболеваний инфекционного происхождения, а также выявление недугов, обусловленных нарушением защитных функций иммунной системы.

Диагностирование гепатитов, краснухи, сифилиса, ВИЧ и многих других болезней в наше время стало доступно благодаря анализам на серологические маркеры инфекций. Расшифровка результатов исследований помогает достаточно быстро определить наличие заболеваний, которые иногда бывает трудно выявить обычными способами.

Анализ свойств и эффектов сывороток

Происхождение наименования «серология» — от лат. названия сыворотки (serum). Сочетание с известным logos означает «учение о сыворотке». Под серологией подразумевается раздел иммунологии, изучающий специфику взаимодействия антител сыворотки с антигенами.

Основа серологической диагностики – выявление специфических антител, образующихся в ответ на инфицирование определенным антигеном. По наличию в крови определенных антител делается заключение о характере и степени активности инфекции.

Серологический метод используется в диагностике:

  • герпеса
  • кишечных инфекций
  • цитомегаловируса
  • эпидемического паротита
  • атипичной пневмонии
  • краснухи
  • хламидиоза
  • токсоплазмоза
  • сифилиса
  • ВИЧ
  • кори
  • вирусных гепатитов В и C

Исследование применяют и в случаях, когда требуется выявление причин миокардитов.

Серологические реакции могут быть применены:

  1. В случае если нужно подтвердить диагноз. Практикуется добавление в сыворотку крови соответствующего антигена. Наличие антител доказывается либо опровергается характером ответной реакции.
  2. В случае, когда о характере заболевания ничего не известно, видовая принадлежность антигенов, находящихся в крови, выявляется добавлением антител.

Для проведения анализа из крови предварительно удаляют компонент, ответственный за свертываемость (фиброген).

Таким образом, цель проведения серологического анализа крови:

  • Постановка диагноза. Исследование показано в случае, когда требуется лабораторное подтверждение присутствия в сыворотке крови возбудителя.
  • Назначение лечения. Анализ поможет выявить реакцию возбудителя на различные лекарства.

Использование серологического анализа практикуется и при диагностике аутоиммунных заболеваний. Проведение процедуры помогает выявить антитела к тканям организма.

Серологические маркеры гепатитов: расшифровки результатов

Гепатит С

Вирусные гепатиты относятся к тому виду серьёзных инфекционных заболеваний, которые могут достаточно долго протекать, ничем себя особенно не проявляя. В трудности своевременного обнаружения и заключается его главная опасность.

Проведение анализа на маркеры, появляющиеся в крови как следствие введения вакцины или перенесенного заболевания, позволяет выявить гепатит в ранней фазе, в которой он лучше поддается излечению.

Виды вирусных гепатитов

Гепатит А

Этот вид (так называемая желтуха) встречается достаточно часто. Передается при употреблении инфицированных продуктов и воды. При его диагностике анализ делается на наличие антител:

  • Аnti-НАV IgМ. Существование в крови ранних антител свидетельствует о наличии вируса в организме не менее 25-30 дней.
  • Аnti-НАV IgG. Его наличие – свидетельство того, что пациент переболел данной формой гепатита в прошлом.
Гепатит В

Передается половым путем. Вирус может попасть в кровь и при использовании нестерильных инструментов. Распространен широко, при своевременном выявлении хорошо поддается лечению. По выздоровлении организм приобретает к вирусу пожизненный иммунитет. Нелеченый гепатит В, вероятнее всего, перейдет в хроническую форму, которая грозит осложнениями в виде цирроза и рака печени.

При выявлении гепатита В ищут следующие маркеры:

  • HВsAg. Специфический антиген, показывающий наличие заболевания.
  • Аnti-НВs. Его появление свидетельствует о завершении процесса.
  • Аnti-НВс IgG. Его длительное нахождение в организме указывает на течение процесса.
  • Аnti-НВс IgM. Его обнаружение является признаком начальной фазы заболевания.
  • Аnti-НВе. Его присутствие – признак вялотекущей формы гепатита.
Гепатит С

Наиболее тяжёлая форма заболевания. Поддается лечению лишь на ранних стадиях. Исход несвоевременно выявленной болезни – летальный.

По результатам исследований выявляются следующие маркеры:

  • Аnti-НСV. Свидетельствует о наличии заболевания.
  • Аnti-НСV IgM. Позволяет судить о достаточно недавнем заражении, что дает основания для благоприятного прогноза.
Гепатит D

Симптоматика та же, что и у гепатита В. Диагностируется присутствием аnti-НDV Ig G, характерного для гепатита В, дополненного аnti-НDV Ig M.

Гепатит Е

В целом подобен гепатиту А, но более опасен для беременных. Выявляется присутствием anti-HEV lg.

Гепатит G

По свойствам близок к гепатиту С, но менее опасен.

Маркеры внутриутробных инфекций: интерпретация результатов

Необходимые анализы во время беременности

Беременность – период, когда подверженность инфекциям становится достаточно острой проблемой для организма. Существует группа инфекций, которые опасны для беременных, в то время как для остальных групп пациентов не представляет угрозы. Названа эта группа ТОRСН-инфекциями. Название образовано из первых букв входящий в группу названий инфекций:

  • токсоплазмоз
  • другие инфекции (сифилис, листериоз, хламидиоз и др.)
  • краснуха
  • цитомегаловирусная инфекция
  • герпес

Выявленные антитела IgG означают наличие иммунитета к заболеванию. Препятствием для планирования беременности не являются.

Обнаружение IgM возможно лишь в острой стадии. Беременность можно планировать лишь после выздоровления.

Краснуха. Относится к инфекциям, передающимся внутриутробно. Перенесенное заболевание формирует пожизненный иммунитет. Тяжесть, с которой протекает заболевание, прямо пропорциональна возрасту больного. У плода инфицированной женщины велика вероятность развития тяжелых пороков. Сегодня есть возможность привиться от краснухи, тем самым избежав вероятности заболеть во время беременности. После прививки в течение некоторого времени в крови сохраняются титры IgM, поэтому от планирования беременности лучше воздержаться в течение 3 мес.

Перед прививкой нужно сделать серологический анализ, после которого можно принимать решение о проведении прививки.

Возможные результаты:

  • IgМ-, IgG-: обозначает отсутствие антител и необходимость вакцинации.
  • IgМ-, IgG+: показывает наличие иммунитета. Вакцинация не требуется.
  • IgМ+, IgG-: заболевание в ранней стадии, период обострения.
  • IgМ+, IgG+: период обострения.

Читайте также:

Опасен ли налет на губах по утрам и как с ним бороться?

Динамика отслеживается по степени понижения IgM и увеличения IgG. Заболевание опасно в острой фазе при положительном значении IgM.

Появление в крови IgM либо IgG, если ранее их у данной пациентки не наблюдалось, означает развитие заболевания. Такой же вердикт можно вынести при 4-кратном повышении за две-три недели количества IgG. Срок давности предыдущего обследования также имеет значение: антитела могут присутствовать в крови в течение 2 лет от начала заболевания. Поэтому наличие IgM не может интерпретироваться как признак острой инфекции. Наличие IgG в снижающемся количестве – не считается заболеванием и не представляет опасности.

Если заражение произошло во II или III триместре, заболевание излечимо.

Безопасный анализ: серологическое исследование при аллергии

Диагностические анализы

Диагностические анализы при аллергии проводят с помощью количественного определения иммуноглобулина Е. При этом способе аллергены связываются с антителами, образуя единый комплекс. В исследовании используется более 200 аллергенов.

Более тщательные исследования проводятся, когда нужно выявить тип и степень остроты реакции. Преимущество этого метода заключается в отсутствии прямого контакта пациента с аллергеном. При этом определяются общие и аллергенспецифические IgE.

В определении диагноза важны не только лабораторные исследования, но и другие данные. Сопоставить их и правильно диагностировать наличие заболевания может только врач, специализирующийся в данной области. Самолечением на основании расшифровки серологических анализов заниматься нельзя.

Июн 5, 2016Виолетта Лекарь

Смотрите также