Определение группы крови с помощью цоликлонов

29

29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы. Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).

Таблица 2

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток

Группа исследуемой крови	Стандартные сыворотки
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	-	-	-
А(II)	+	-	+
В(III)	+	+	-
AB(IV)	+	+	+

Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.

Таблица 3

Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	-	+	+
А(II)	-	-	+
В(III)	-	+	-
AB(IV)	-	-	-

Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови. После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 — 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 — 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.

Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 — 25 X.

Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).
Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.

Таблица 4

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
0(I)	_	_	-
А(II)	+	-	+
В(III)	-	+	+
АВ(IV)	+	+	+

Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) — се отсутствие

При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-суперт рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.

Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Все про определение группы крови цоликлонами

Информация о характеристиках крови (группа и резус-фактор) приобретает основополагающее значение в случаях, когда речь заходит о жизни и смерти человека. Подобный анализ в обязательном порядке проводится перед оперативными вмешательствами, родоразрешением и в других ситуациях, которые способны повлечь за собой необходимость немедленной процедуры переливания крови. Существуют разные способы и методики проведения исследования, и одна из них основывается на использовании веществ, которые называются цоликлонами. Как происходит определение группы крови с помощью цоликлонов, и какие особенности имеет процедура?

Суть тестирования

Цоликлоны представляют собой специальные антитела, которые синтезируют из крови лабораторных мышей посредством генно-инженерных технологий.

Они имеют ряд плюсов перед стандартными и более привычными некоторым медработникам реагентами, поэтому в современных лабораториях используются гораздо чаще.

Суть методики определения группы крови с помощью цоликлонов состоит в их способности вступать в реакцию с агглютиногенами (клетками, входящими в состав человеческой крови), результатом которой становится их склеивание, или агглютинация. У представителей каждой из групп крови имеется определенный набор агглютиногенов: у носителей первой группы (А) они отсутствуют, у обладателей второй — присутствуют клетки типа А и т.д.

Реагенты, необходимые для анализа, также подразделяются на несколько разновидностей со специфическими характеристиками. Для определения группы крови цоликлонами их смешивают с образцами крови человека, после чего оценивают реакцию и делают соответствующие выводы.

Чтобы методика определения группы крови с помощью цоликлонов была максимально информативной, важно придерживаться правил работы с веществами и выполнения процедуры:

анализ проводится только в условиях полноценной лаборатории в стерильных условиях при температуре от +15 до +25 градусов и при достаточно ярком освещении;

в работе следует использовать только вещества с неистекшим сроком годности (он составляет 2 года), которые хранились в плотно закупоренных емкостях; если раствор помутнел, содержит осадок или другие посторонние примеси, рекомендуется его заменить;
для проведения исследования потребуется ровная поверхность (планшетка, специальная тарелочка) белого цвета, несколько пипеток и стеклянных палочек для смешивания образцов.

Кровь для исследования может использоваться любая (из пальца, вены или замороженная) – главное, чтобы она хранилась при соответствующих условиях и была пригодной для проведения процедуры.

Порядок и методика проведения

Процедура определения группы крови цоликлонами имеет определенный алгоритм, который представлен следующими этапами:

Надеть маску и перчатки, прогреть образцы крови до 36 градусов, цоликлоны – до 20 градусов.
Планшетку или тарелочку для проведения анализа разметить и написать на ней данные пациента.
Под соответствующими пометками нанести по одной крупной капле растворов цоликлонов анти-А и анти-В (примерно по 0,1 мл), рядом капнуть по маленькой (около 0,01 мл) капле крови.
Смешать образцы с реагентами посредством палочек, причем для каждого из них лучше использовать отдельный инструмент.
Подождать 3-5 минут, аккуратно покачивая планшет, чтобы жидкости хорошо перемешались. Более 10 минут ждать не рекомендуется, так как образцы начнут подсыхать, вследствие чего результаты могут исказиться.

По прошествии указанного времени следует оценить результат.

Если агглютинация присутствует, в образцах крови образуются мелкие красные хлопья, а при отсутствии реакции склеивания — жидкости просто перемешаются друг с другом. Для уточнения результатов используется третий тип реагентов, анти-АВ, который смешивается с кровью так, как описано выше. Существует 4 варианта реакции цоликлонов и образцов крови, на основе которых можно определить принадлежность крови к определенной группе:

Читайте так же: Узнаем самую редкую группу крови

реакция агглютинации отсутствует во всех случаях (с реагентами анти-А и анти-В) – значит, у человека первая группа крови;
агглютинация с веществами анти-А и анти-АВ свидетельствует о второй группе;
наличие реакции склеивания с анти-В и анти-АВ говорит о принадлежности крови к третьей группе;
если произошла агглютинация со всеми цоликлонами (анти-А, анти-В, анти-АВ), группа определяется как четвертая.

При определении 4-й группы следует убедиться в отсутствии у пациента заболеваний, при которых агглютинация происходит при контакте крови с любыми химическими веществами.

Для этого образец перемешивают с каплей обычного физраствора, после чего наблюдают за реакцией.

Видео на эту тему

Расшифровка

Для определения группы крови цоликлонами на основе результатов химических реакций можно использовать специально разработанную таблицу.

Группа крови	Реакция с анти-А	Реакция с анти-В	Реакция с анти-АВ
I (0)	—	—	—
II (A)	+	—	+
III (B)	—	+	+
IV (AB)	+	+	+

Достоверность

При соблюдении техники и алгоритма определения группы крови цоликлонами процедура обладает практически 100%-й достоверностью – ошибки возможны только при использовании непригодных химических веществ и биоматериала.

В случаях, когда результат является сомнительным, исследование нужно переделать, а образцы рассмотреть более тщательно с использованием увеличения.

Техника определения группы крови с помощью цоликлонов была разработана для того, чтобы выявить в образцах крови человека присущий определенной группе набор биохарактеристик и антигенов. Переливание больному несовместимой крови (той, которая имеет другие характеристики) влечет за собой серьезную опасность для жизни – иммунитет человека начинает бороться с чужеродными агентами и уничтожать их, что вызывает необратимые изменения в организме.

По этой причине, в случаях, которые могут сопровождаться обширной кровопотерей, врачи должны точно знать параметры крови больных.

Плюсы и минусы методики

Основные преимущества способа определения группы крови цоликлонами – высокая достоверность, минимальное количество времени, необходимое для получения результатов, доступность и приемлемая стоимость реагентов. Они не содержат фрагментов человеческих тканей, поэтому абсолютно безопасны для медицинского персонала и не требуют сложного оборудования для выполнения процедуры.

Недостаток заключается в высокой чувствительности веществ к воздействию окружающей среды: даже при малейшем нарушении условий хранения и работы с ними результаты могут получиться неточными.

Как выглядят цоликлоны?

Цоликлоны производятся в виде жидкого вещества, разлитого в пузырьки по 5 или 10 мл. Каждый из них имеет собственные химические и физические параметры: анти-А представляет собой жидкость розовато-желтого или красноватого оттенка, анти-В – синеватый раствор, анти-АВ представляет собой бесцветную субстанцию.

Помимо вышеперечисленных реагентов, в комплект для анализа может также входить цоликлон анти-D, использующийся для определения резус-фактора.

Где сделать анализ?

Анализ на определение группы крови цоликлонами можно выполнить практически в каждой лаборатории, которая располагает необходимыми для проведения процедуры веществами и средствами.

Читайте так же: Как происходит наследование групп крови у человека?

Техника и алгоритм определения группы крови цоликлонами достаточно просты и позволяют быстро получить достоверный результат, поэтому данный способ проведения анализа широко используется в современной медицинской практике.

Нет комментариев

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм действий, резус фактора, как определить

Веками ученые пытались узнать о человеческом организме как можно больше и научиться исцелять больных от любой болезни. Одним из важных параметров является определение группы крови цоликлонами. Медицина выделяет у людей всего четыре группы крови не зависимо от половой или расовой принадлежности. Иммунологические признаки, которые и составляют основное различие по группе эритроцитарных антигенов, передаются по наследству.

Что такое цоликлон

Определение группы крови с помощью различных лабораторных реагентов стандартный метод исследований. Информация группе крови крайне важна, особенно в тех случаях, когда человеку нужна экстренная помощь. Перед хирургическим вмешательством обязательно определяется тип индивидуальных антигенных характеристик человека. Та же процедура является обязательно для военнослужащих (информация указывается на форме), для женщин перед родами и т.д.

Определение групп крови цоликлонами сравнительно новый метод исследования. Этот анализ может проводиться на любом этапе стационарного лечения пациентов.

Для осуществления лабораторного исследования не требуется много времени, достаточно наличие всех необходимых химических веществ (цоликлонов) и простого оборудования.

Цоликлоны по сути являются одним из видов иммуноглобулинов (тип М). Это моноклональные антитела, которые были образованы с помощью генной инженерии. Цоликлоны получены в результате воздействия сыворотки на стерильных лабораторных мышей. Образовывается скопление жидкости в брюшной полости грызуна, которая содержит эти антитела.

Подготовка к процедуре

Определение групп крови с помощью цоликлонов требует предварительной подготовки и действий согласно установленному алгоритму. Обстановка в помещении, в котором проводится анализ оговорена отдельно. Температура воздуха должна быть не ниже 15 и не выше 25 градусов, иначе результат исследования не может считаться достоверным. В помещении не должно быть пыли, животных, насекомых и других факторов, которые могут физически повлиять на процесс проведения исследования. Также проведение лабораторного анализа требует хорошей освещенности помещения.

При использовании цоликлонов важно держать флаконы плотно зарытыми и не допускать пересыхания реагентов, иначе способность антител к активным действиям заметно снижается. Перед процедурой подготавливается весь необходимый инвентарь. Для проведения анализа потребуется пробирка для биологического образца, планшет для нанесения реагентов, стерильные пипетки и палочки для взаимодействия с биологическими образцами.

Если лаборант проводит не только лабораторное исследование, но и забор крови, то необходимо подготовить одноразовые шприцы или вакуумные пробирки, жгут, медицинский спирт, ватные шарики и стерильные салфетки. Также под рукой должны быть инструменты для маркировки биообразов пациентов.

Проведения анализа

В современной лабораторной диагностике используется три вида стандартных цоликлонов для определения группы крови и резус фактора. Реагент типа «Анти-А» окрашен в красный цвет, также окрашен и флакон, колпачок или этикетка флакона». Тип «Анти-В» окрашивается синим, а «Анти АВ» не помечается цветным маркером. Производители реагентов выпускают упаковки с цоликлонами 5 или 10 мл. Не допускается использование испорченных или некачественных реагентов.

При наличии видимых дефектов упаковки или появлении хлопьев в жидкости, цоликлон не используют.

Для определения группы крови на специально подготовленную пластину, которая оформлена как таблица, наносят цоликлоны различных типов (А, В и АВ). Каждый из них должен быть подписан. Реагент наносится на специально отмеченную область. Каждый тип цоликлона должен наноситься отдельной стерильной пипеткой.
Рядом с реагентами помещается по 1 капле крови пациента.
Стерильной палочкой реагенты смешивают с биологическим образцом.
Уже спустя несколько секунд можно заметить изменения и происходящую реакцию агглютинации. По правилам наблюдение следует вести в течение 3 минут. После этого можно сделать вывод о результатах исследования.

Как понять результат

Отсутствие какой-либо реакции склеивания во всех образцах означает, что в клетках эритроцитов пациента нет агглютиногена исследуемого типа. Образец крови причисляется к I группе (тип 0).
Если эритроцитарные клетки пациента вступили в реакцию с реагентами типа «Анти-а» и «Анти-АВ», то у пациента II группа крови (тип А).
Заметная агглютинация образца исследуемой крови с цоликлонами тип «Анти-АВ» и «Анти-В» означает, что пациент обладает III группой крови (тип В).
Если кровь пациента вступила в реакцию со всеми химичсекими реагентами, то исследуемый образец принадлежит к IV группе (тип АВ). При определении группы крови с помощью цоликлонов дополнительной проверки не требуется, так как реагенты не содержат добавок, которые могут спровоцировать спонтанную реакцию.

Определение группы крови и резус фактора проводится в лабораторных учреждениях в медицинских учреждениях. Это достаточно простое исследование, которое дает очень полезную и жизненно важную информацию о человеке.

В будущем информация группы крови и резус фактора позволит быстро оказать помощь и организовать переливание крови после травмы или аварии и может спасти жизнь. Узнать свой номер ГК можно самостоятельно заказав исследование в любой медицинской лаборатории. Полученные данные необходимо внести в карту пациента.

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ.

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

– цоликлон анти-А;

– цоликлон анти-В;

– цоликлон анти-D;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

Расшифровка результатов определения группы крови

если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

AB (IV)

Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

AB (IV)Rh-

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
NaCl 0,9%
Стеклянные палочки

Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать. Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин. При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными. Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.