Иммунохимический анализ иха


Понятие иммунохимического анализа, его значение для современной медицины

Иммунохимический анализ (ИХА) – это комплексная методика, которая определяет популяцию клеток, концентрацию сывороточных иммуноглобулинов, циркулирующие иммунные комплексы, параметры лейкоцитов, принимающих участие в фагоцитозе. Его назначают только в крайних случаях, поскольку он дорогостоящий. Но в то же время, результаты этого анализа дают врачу точную картину для понимания возможности организма противостоять различным заболеваниям.

Кровь для иммунохимического анализа

Значение и преимущества анализа

В этот анализ входит проверка количества иммуноглобулинов и репродуктивных гормонов. Гормональная и иммуноферментная диагностика дает возможность понять общее состояние человеческого организма, качество его защитной и репродуктивной функции.

Данный диагностический метод – довольно дорогое удовольствие, но его результаты того стоят. При его помощи специалист может поставить окончательный диагноз даже в самых сложных случаях. Например, благодаря иммуноферментному анализу врач может определить соотношение «антиген-антитело», то есть увидеть количество антител, реагирующих на различные раздражители. Сегодня ИФА считается самым информативным при диагностировании недугов инфекционного характера.

Помимо высокой результативности, ИХА имеет еще одно неоспоримое преимущество – доступность. Практически каждая медицинская лаборатория предоставляет такую услугу. Комплексный анализ назначается в очень редких случаях, поскольку большинству пациентов требуется проверить один или несколько показателей.

С помощью этого анализа определяется:

  • Анемия.
  • Онкологические патологии.
  • Гормональные нарушения.
  • Бесплодие.
  • Инфекционные и вирусные заболевания.
  • Сахарный диабет.
Раковые клетки

Показатели ИХА

Данный анализ считается комплексным иммунологическим исследованием и состоит из таких показателей:

  • IgA. Это вещество регулирует защитную функцию слизистой оболочки бронхов, почек, мочевого пузыря, легких, желудочно-кишечного тракта. При обострении патологий его еще сложно определить, самый ранний срок обнаружения – 14-17 дней после развития инфекции. При диагностике на позднем сроке может показать хронический характер заболевания.
  • IgE. Определяет аллергические и паразитарные процессы. К сожалению, он реагирует не на все возбудители, поэтому пациенту может потребоваться дополнительные обследования.
  • IgM. Показатель обострения Нарушение нормы фиксируется уже на пятый день после попадания раздражителя в человеческое тело. Повышенный показатель IgM понижается к допустимому на протяжении 35 дней.
  • IgG. Остаточный иммуноглобулин, фиксирует образование иммунитета к какому-то заболеванию или патологии. Проявляется в сыворотке уже через 26-29 дней после возникновения недуга. Он может фиксироваться в плазме несколько лет или даже всю жизнь, при этом его показатель не считается симптомом развития болезни.
  • IgD. Его невысокий показатель считается нормой для всех людей. Повышение или снижение этой нормы расценивается как признак физиологического и иммунодефицитного сбоя.
  • Лютеотропин. Гипофизный гормон, необходимый для правильного функционирования половых желез. Это вещество очень важно для нашего организма, поскольку обеспечивает выработку тестостерона, эстрогена и прогестерона. В женском организме лютеотропин обеспечивает менструальный цикл.
  • Пролактин. Характерный гормон лактационного периода, активизируется во время вынашивания плода. Если показатель увеличивается не из-за беременности, он будет препятствовать продуцированию других гормонов.
  • Эстрадиол. В женской половой системе считается самым активным веществом. Благодаря ему в женщины развиваются вторичные половые признаки, менструация, созревает яйцеклетка.

Показания к проведению анализа

Это исследование не является профилактической мерой. Его принято назначать при таких показаниях:

  1. Генетическая склонность к иммунным патологиям. Анализ позволяет выявить малейшие сбои в функциональности иммунитета. Такие нарушения в скором времени провоцируют развитие иммунодефицита, истинную причину которого определить очень трудно. Нередко иммунные заболевания имеют генетическую предрасположенность и внезапно проявляются в любом возрасте.
  2. Подозрение на онкологические патологии. Анализ охватывает и онкомаркеры. Он показывает не только присутствие злокачественных клеток, но и показывает процентную предрасположенность пациента к образованию опухолей.
  3. Проблемы с зачатием. Семейные пары, которые испытывают трудности в зачатии ребенка на протяжении длительного времени, могут пройти анализ на половые гормоны, чтобы определить причину и степень совместимости с партнером.
  4. Недуги аутоиммунного характера. Они возникают в результате нарушения нормальной работы иммунитета, который выступает по отношению к собственному организму агрессором, а не защитником.
Аутоиммунное заболевание

Подготовка к анализу, его проведение

Забор крови для иммунохимического анализа не отличается от биохимического анализа. Лаборант берет у пациента венозную кровь. Далее сыворотка анализируется специальным лабораторным устройством. Благодаря техническому прогрессу результат анализа можно получить уже через полчаса после забора крови, но в нашей стране большинство лабораторных учреждений выдают его через 2-3 дня после процедуры.

Подготовительные меры не отличаются сложностью и длительностью. Для получения максимально точного результата пациент должен:

  1. Не есть за 12 часов до забора крови.
  2. Проходить процедуру на пустой желудок.
  3. Сдавать кровь до 11 часов дня.

Разрешается выпить перед процедурой 200-250 мл чистой воды.

Хотя этот анализ не включает в себя печеночные пробы и показатель ТТГ, специалисты рекомендуют за 3-4 дня до анализа исключить из ежедневного рациона жирные блюда и пищу, обогащенную белком. Данный запрет связан с тем, что эти вещества делают кровь более вязкой, из-за чего сыворотка мутнеет и усложняет обследование.

Важно! За пять дней до забора крови пациенту запрещается принимать алкоголь в любом виде. Это вещество негативно влияет на гормоны и показатели крови.

Нежелательно курить за 24 часа до анализа. Как показывает статистика, лишь 8 процентов пациентов придерживаются этой рекомендации. Из-за этого врачи просят не принимать никотин хотя бы в то утро, когда будет проходить процедура.

Жирное блюдо

Женщинам-пациенткам нужно обязательно предупредить своего лечащего врача о фазе месячного цикла. День, когда будет происходить забор крови, сильно влияет на концентрацию половых гормонов, поскольку этот показатель связан с менструальным циклом. Если анализ проходит будущая мамочка, врач должен учитывать срок вынашивания ребенка.

Продукты, обогащенные белком

Один из важнейших подготовительных аспектов – прием медикаментозных средств. В идеале пациент обязан прекратить пить лекарства за неделю-полторы до анализа, но если это невозможно, то врач должен учитывать все эти нюансы при расшифровке показателей.

Категорически запрещено сдавать анализ после физических нагрузок или эмоционального стресса, поскольку эти процессы влияют на химический состав крови. Перед тем как зайти к лаборанту, пациент должен посидеть спокойно хотя бы 25 минут.

Иммунохимический анализ каловых масс

Проверка скрытой крови необходима для диагностирования рака прямой кишки или эрозивных повреждений слизистой кишечника. С его помощью у врача появляется возможность диагностировать полипы и рак, которые проявляются только кровотечениями. Благодаря этому анализу пациенты могут пройти полную диагностику кишечника и установить концентрацию гемоглобина в кале. Подготовка к данному исследованию стандартная.

Экспресс-тест для анализа кала на количество гемоглобина состоит из:

  • Индикаторного планшета.
  • Аппликатора.
  • Реагента.
  • Инструктивного письма.

Данное исследование базируется на результате взаимодействий специфических антител с гемоглобином, что приводит к образованию соединений антиген-антитело. Розовая и фиолетовая линии на бланке теста показывают уровень гемоглобина и фиксируют нарушение его допустимых показаний.

Читайте также: Иммуноглобулин Е – норма у детей и отклонения

ИХА на наличие хламидий

Данное исследование помогает подтвердить или опровергнуть присутствие внутриклеточных паразитов в теле пациента. Параллельно с этим оно дает информацию о примерном времени заражения и возможных осложнениях для здоровья исследуемого. Этот анализ требует подбора специфических антигенов, материалом выступает сыворотка или плазма. Для расшифровки и определения диагноза применяют иммуноглобулины.

Благодаря этому методу врач может выявить заражение на самых ранних его этапах и точно узнать особенности антител. ИХА требует специальной подготовки, поэтому пациент обязан придерживаться всех рекомендаций, которые получил у врача.

Поскольку иммунохимическое исследование показывает стадию инфекционного поражения, врачу проще подобрать необходимую терапию.

Хламидии под микроскопом

ИХА мочи

Данная диагностика количественного показателя уропротеина дает возможность проверить качество и концентрацию белкового показателя мочи, что особенно важно при подозрениях на пиелонефрит и гломерулонефрит.

Моча для анализа

Расшифровка иммунохемилюминесцентного анализа

Расшифровывать данные исследования должен только врач. Эта процедура достаточно сложная и требует от специалиста большого объема знаний и опыта.

Важно! Для постановки диагноза врач сравнивает показатели иммунохимического анализа, собранного анамнеза и других проведенных исследований.

Ученые разработали специальную таблицу, где собраны допустимые значения основных показателей ИХА и возможные причины отклонений от нормы.

Показатель Норма Причина отклонения
Иммуноглобулин А 17 процентов от общего кровяного иммуноглобулина. Превышение нормы может быть признаком красной волчанки, печеночных и почечных недугов. Понижение нормы диагностируют при циррозе и отравлении.
Иммуноглобулин Е 0,2 процента от общего кровяного иммуноглобулина. Фиксируется только повышенный уровень, если пациент заражен гельминтами. К провокаторам относят аллергические реакции (экзему, жжение и покраснение эпителия, отечность).
Иммуноглобулин М 5-5,2 процента от общего количества вещества. Превышают допустимый показатель кандидозы, печеночные патологии, волчанка, острые инфекции.
Пролактин У мужского пола – 103 – 535 мМЕ/л, у женского – 59 – 699 мМе/л. Превышение нормы провоцирует туберкулез, новообразования в гипофизе, прием фармацевтических средств. У женщин повышается при кормлении грудью, но это не является нарушением.
Лютеотропин Мужской показатель – 1,15 – 8,9 мЕд/л. У женщин норма тесно связана с менструальным циклом. Понижение нормы провоцируют опухолевые поражения гипофиза, ожирение, аменорея. Повышает показатель поликистоз яичников, почечная недостаточность, эндометриоз, длительный дефицит пищи.

Расшифровка анализа взрослого пациента должна выполняться с учетом его индивидуальных особенностей, генетической склонности к заболеваниям, общего состояния на момент сдачи анализа и правильности подготовительного этапа к процедуре.

Как показывает практика, в современной медицине иммунохимический анализ по праву считается одним из самых эффективных диагностических приемов.

Иммунохроматографический анализ: сущность метода

Что представляет собой иммунохроматографический анализ (ИХА)? Разберемся подробнее в этом вопросе.

ИХА – иммунохимический способ анализа, который основан на методе тонкослойной хроматографии. Он включает реакцию между соответствующим антителом и антигеном в биологических материалах. Осуществляется посредством особых тест-полосок, тест-кассет или панелей. ИХА – это экспресс-тест.

Сущность данного метода исследования

Действие его основывается на том, что при погружении в биологическую жидкость (либо другой жидкий образец) теста она начинает двигаться вдоль полоски по методу тонкослойной хроматографии. Движутся вместе с ней нанесенные на нее специфические меченые антитела, которые связываются аффинно с анализируемым компонентом.

Различаются два формата анализа: прямой и конкурентный метод.

Прямой метод

В формате сэндвичного (прямого) иммунохроматографического анализа крови используется конъюгат антитела-метки, который наносится для конъюгата на мембрану. Иммобилизованные антитела на полоске, обладающие конкретным аналитом, на контрольной линии – антитела антивидовые, специфические к антителам первичным.

При внесении образца, в котором содержится конъюгат (искомое вещество), на мембрану, связывается искомый компонент с конъюгатом Ат-метки. После этого сформированный иммунный комплекс проникает в тестовую зону, где происходит связь со специфическими антителами, и образуется «сэндвич» Ат- Аг-Ат-метка. Затем чрезмерное количество не связавшегося конъюгата соединяется на контрольной линии с антивидовыми антителами. Если на тест-полоске появляются две линии, то результат теста положительный. Если аналит отсутствует в образце, то связывается конъюгат с антивидовыми антителами лишь на контрольной линии, и образуется одна линия.

Прямой ИХА применяется для определения возбудителей инфекционных патологий, вирусов – высокомолекулярных соединений, включая разные гормоны, ВИЧ.

Конкурентный метод исследования

Способ конкурентного иммунохроматографического анализа применяется для установления низкомолекулярных соединений. Основан он на конкуренции иммобилизованного конъюгата аналит и аналита: носитель-белок за ограниченное число центров связывания периферических антител, которые содержатся в конъюгате Ат-метка. Когда наносится образец, содержащий аналит, то последний связывается на мембране с конъюгатом с конъюгатом Ат-метка. Иммунокомплекс в дальнейшем проходит через тестовую зону, в которой иммобилизуется конъюгат аналит, то есть белок-носитель.

С этим конъюгатом не может связаться иммунокомплекс из-за стерических сложностей: низкомолекулярные соединения чаще всего обладают одной антигенной детерминантой, таким образом, у иммуноглобулинов есть один центр связи с антигеном, который уже занят до этого аналитом. Иммунный комплекс впоследствии связывается антивидовыми иммуноглобулинами, которые находятся на контрольной линии. Если в тестовой области отсутствует окрашенная полоса и есть окраска в контрольной зоне, это говорит о том, что содержание определяемого компонента в исследуемом образце выше порогового значения для такого теста. Если в аналите отсутствует анализируемое вещество в образце, то происходит связь конъюгата Ат-метка с конъюгатом Аг: носитель-белок, иммобилизованный в области тестовой линии. Ат-метка свободный конъюгат попадает в сферу контрольной линии, где связывается с антивидовыми антителами. Если есть две окрашенные линии (контрольная и тестовая), то можно говорить об отрицательном результате теста.

Метод конкурентного ИХА применяется для определения низкомолекулярных соединений, включая тканевые экстракты.

Преимущество такого способа – легкость и быстрота использования, возможность применения неприборных методов ИХА с оценкой результата визуально. Не требуется дополнительное оборудование, и анализ может провести человек без медицинского образования в любое время.

Какие применяются метки в ИХА?

В иммунохроматографическом анализе в качестве меток применяются разные частицы и вещества.

  • Красители (частицы крашеного латекса, или наночастицы углерода, или коллоидного золота). Такой вариант позволяет визуально отслеживать результат или определить колориметрическим прибором. Применение красящих меток, которые присоединяются к носителю, позволяет делать мультианализ, где разноцветные линии соответствуют разным аналитам. Используемой меткой чаще всего выступают наночастицы золота коллоидного.
  • Связанные ковалентно с латексными частицами биолюминесцентные, фосфоресцентные и флуоресцентные метки. Применяются лишь в приборных способах ИХА, в которых регистрируется результат особым ридером. Наиболее распространенными являются флуоресцентные метки.
  • Парамагнитные метки, закрепленные на латексных частицах. Метод применяется в ИХА с использованием приборов, которые регистрируют силу магнитного поля.
  • Липосомы, используемые в качестве носителей разных меток (электроактивных, ферментативных, флуоресцентных, красящих и т. д.) Это новое направление среди разновидностей анализа.
  • Ферментные метки, применяемые по принципу ИФА. Регистрация реакции проводится посредством окрашивания субстратов. В итоге получается визуальный результат, либо считывается ридером.

Преимущества данного метода исследования

Главными преимуществами применения метода иммунохроматографического анализа становятся:

  • Удобство и простота – позволяет получить результат (первичное представление и анализ причины болезни) без специальных навыков и оборудования.
  • Надежность – достоверность тестов достигает 99,8 %, каждый тест при этом имеет внутренний встроенный контроль.
  • Анонимность – это особенно важно при определении болезней, передаваемых половым путем, прочих инфекционных болезней, а также установлении употребления наркотических веществ.
  • Экономичность – приобрести тест может каждый, экономится время на проведение анализа.
  • Независимость – не нуждается в предварительной консультации и рецепте врача.

Тест на наркотики как проводится: особенности и недостатки ИХА-метода

Самой популярной услугой становится анализ мочи на наркотики посредством метода иммунохроматографического анализа. Это позволяет исследовать мочу на 14 видов нарковеществ.

Иммунохроматографический анализ на наркотики также считается экспресс-методом диагностики. Результат теста можно узнать спустя 15 минут. Для проведения данного исследования используют особые тест-полоски, которые пропитаны веществами-индикаторами. Если в моче имеются следы наркотического вещества, цвет полоски меняется. Основной недостаток такого анализа – невозможность определить, какова концентрация вещества и степень наркотического опьянения, таким образом, результаты иммунохроматографического анализа в качестве доказательства в суде использовать не получится.

Каков результат такого анализа?

Если на индикаторах появились две розовые полосы, то делается заключение, что в моче не содержится наркотик, или же его концентрация недостаточна для определения иммунохроматографическим методом. При возникновении одной розовой полосы можно говорить о наличии наркотического вещества: марихуаны, производных эфедрона, опиатов, производных барбитуровой кислоты, амфетаминов, кокаина, фенциклидина, бензодиазепинов, экстази.

Какие можно сделать выводы?

Иммунохроматографический анализ (экспресс-тест) является эффективным средством диагностики, он позволяет визуально на протяжении нескольких минут выявить и оценить концентрацию антигенов, гормонов, антител и других диагностически важных компонентов в человеческом организме. Экспресс-тесты имеют высокую степень точности и чувствительности, обнаруживается более ста видов болезней, а также весь спектр наркотических веществ, и достоверность анализа очень высокая.

Иммунохимические методы в скрининге лекарственных веществ. Иммунохимический анализ (иха)

Современные иммунохимические методы анализа лекарственных средств и наркотических веществ отличаются такими особенностями, как высокая чуствительность, специфичность, экспрессность, простота исполнения. Реакция проводится прямо в биожидкости, поэтому не требуется применять изолирование и дополнительную очистку. Методы ИХА позволяют одновременно анализировать большое число проб, поэтому они очень удобны для скрининг-диагностики.

В то же время, широкое применение этих методов сдерживается тем, что для них требуются особые реагенты (особо чистые сыворотки, ферменты), которых отечественная промышленность не производит.

В основе всех методов ИХА лежит специфическая реакция «антиген – антитело», где антигеном является определяемое вещество, чужеродное для организма. При введении в живой организм чужеродного соединения (антигена АГ) образуются антитела АТ, которые сразу связываются с антигеном. Образующийся комплекс (АГ+АТ) выпадает в осадок. Реакция взаимодействия (АГ+ АТ) является специфичной и протекает количественно, что и используется в анализе.

Для детектирования результатов реакции один из компонентов (антиген или антитело) метят специальной меткой. В зависимости от природы метки и способа ее детектирования выделяются различные виды ИХА:

Метод

Способ детектирования

Радиоиммунный анализ (РИА)

Радиоактивность

Иммуноферментный (энзимный) анализ (ИФА)

Ферментная активность

Поляризационный флюороиммуно-анализ (ПФИА)

Интенсивность флюоресцентной поляризации

Люминесцентный иммуноанализ (ЛИА)

Интенсивность люминесценции

Существует и ряд других методов.

Наибольшее распространение в химико-токсикологическом анализе лекарственных и наркотических веществ получили РИА и ИФА:

  1. радиоиммунный метод (РИА)

  2. иммуноэнзимный метод (ИФА)

В ИФА в качестве метки для антигенов ( т.е.определяемых веществ) используются ферменты. Как правило, это различные оксидазы, способные окислять специальное химическое вещество – хромогенный субстрат- с образованием окрашенных продуктов. По интенсивности окраски и судят о количестве искомого вещества.

В РИА используется аналогичный принцип, только в качестве метки используется радиоактивный изотоп. Измеряя радиоактивность выделившегося изотопа, определяют количественное содержание искомого вещества.

Производные барбитуровой кислоты в химико-токсикологическом отношении

Из лекарственных веществ, экстрагируемых органическим растворителем из кислого раствора, наибольшее токсикологическое значение имеют производные барбитуровой кислоты. Эта группа веществ подлежит обязательному судебно-химическому исследованию при проведении общего судебно-химического анализа (Приказ МЗ СССР . №1021 от 25.12.73 г.).

Первый из барбитуратов – барбитал- синтезирован в 1881 г. В медицинскую практику производные барбитуровой кислоты были введены в 1903 г. Фишером и Мерингом. В настоящее время синтезировано около 2500 производных, из которых в нашей стране применяется 11.

Токсикологическое значение производных барбитуровой кислоты очень велико. С одной стороны, барбитураты обладают высокой фармакологической активностью, поэтому их передозировка может привести к различным осложнениям и даже вызвать смертельный исход. С другой - они достаточно доступны для населения, т.к. широко используются в медицинской практике в качестве снотворных, седативных, противосудорожных средств. В технике и в фотографии применяются как ингибиторы и антиоксиданты, в химических лабораториях как реактивы. При длительном применении они вызывают пристрастие и привыкание, т.е. барбитуровую токсикоманию и наркоманию (барбамил и этаминал-натрий официально отнесены к наркотическим средствам). Все эти факторы приводят к тому, что производные барбитуровой кислоты занимают одно из первых мест по количеству вызываемых ими отравлений.

В основе химического строения барбитуратов лежит кольцо малонилмочевины, или барбитуровой кислоты, которая может быть получена при взаимодействии мочевины и диэтилового эфира малоновой кислоты.

малонилмочевина

(2,4,6-триоксипиримидин)

Барбитуровая кислота является циклическим уреидом и может рассматриваться как производное пиримидина (2,4,6 - триоксипиримидин). Атомы водорода метиленовой группы в 5-ом положении пиримидинового кольца, а также водород, стоящий у атомов азота в 1-ом и 3-ем положениях, подвижны и способны замещаться различными органическими радикалами, атом кислорода в положении 2 также способен замещаться на атом S. На этих свойствах и основан синтез производных барбитуровой кислоты.

Общую формулу барбитуратов можно изобразить следующим образом:

где R1,R2,R3 - радикалы, содержащие от 1 до 7 атомов углерода.

В зависимости от заместителей в 1(3) и 5 положениях пиримидинового кольца, а также наличия во 2-ом положении атома О и S все барбитураты можно разделить на 3 группы:

1) 5,5 -замещенные производные (двузамещенные), из которых наиболее часто применяются:

  1. Фенобарбитал R1 - C2H5, R2 - C6H5

СН3

  1. Барбамил R1 -C2H5, R2 - Ch3 - СН2 - СН

СН3

4. Этаминал –натрий R1 - C2H5, R2 – CH - Ch3 - СН2 – СН3

Ch4

  1. Бутобарбитал R - C2H5 , R2 – C4 H9

  1. N-замещенные барбитураты (трехзамещенные)

1. Гексенал R1 – Ch4, R3 – Ch4

2. Бензонал R1 - C2H5, R2 - C6H5,

Ch4

  1. Бензобамил R1 - C2H5, R2 – Ch3 - Ch3 - CH

Ch4

  1. Тиобарбитураты (атом кислорода во 2 положении замещен на атом серы)

1.Тиопентал- натрий R1- C2H5, R2- CH-Ch3-Ch3-CH-СН3

По физическим свойствам все интересующие в настоящее время судебно-химическую экспертизу барбитураты представляют собой белые кристаллические вещества без запаха, горького вкуса, лишь тиопентал имеет желтоватый оттенок и обладает слабым запахом серы.

Кислотные /молекулярные/ формы барбитуратов растворимы в эфире, хлороформе, спирте и некоторых других органических растворителях, натриевые производные - в воде.

Барбитураты имеют высокие температуры плавления. />100С/ и способны возгоняться без разложения, что используется для их очистки от посторонних примесей при выделении из биологического материала.

Иммунохимические методы в скрининге лекарственных веществ. Иммунохимический анализ (иха)

Современные иммунохимические методы анализа лекарственных средств и наркотических веществ отличаются такими особенностями, как высокая чуствительность, специфичность, экспрессность, простота исполнения. Реакция проводится прямо в биожидкости, поэтому не требуется применять изолирование и дополнительную очистку. Методы ИХА позволяют одновременно анализировать большое число проб, поэтому они очень удобны для скрининг-диагностики.

В то же время, широкое применение этих методов сдерживается тем, что для них требуются особые реагенты (особо чистые сыворотки, ферменты), которых отечественная промышленность не производит.

В основе всех методов ИХА лежит специфическая реакция «антиген – антитело», где антигеном является определяемое вещество, чужеродное для организма. При введении в живой организм чужеродного соединения (антигена АГ) образуются антитела АТ, которые сразу связываются с антигеном. Образующийся комплекс (АГ+АТ) выпадает в осадок. Реакция взаимодействия (АГ+ АТ) является специфичной и протекает количественно, что и используется в анализе.

Для детектирования результатов реакции один из компонентов (антиген или антитело) метят специальной меткой. В зависимости от природы метки и способа ее детектирования выделяются различные виды ИХА:

Метод

Способ детектирования

Радиоиммунный анализ (РИА)

Радиоактивность

Иммуноферментный (энзимный) анализ (ИФА)

Ферментная активность

Поляризационный флюороиммуно-анализ (ПФИА)

Интенсивность флюоресцентной поляризации

Люминесцентный иммуноанализ (ЛИА)

Интенсивность люминесценции

Существует и ряд других методов.

Наибольшее распространение в химико-токсикологическом анализе лекарственных и наркотических веществ получили РИА и ИФА:

  1. радиоиммунный метод (РИА)

  2. иммуноэнзимный метод (ИФА)

В ИФА в качестве метки для антигенов ( т.е.определяемых веществ) используются ферменты. Как правило, это различные оксидазы, способные окислять специальное химическое вещество – хромогенный субстрат- с образованием окрашенных продуктов. По интенсивности окраски и судят о количестве искомого вещества.

В РИА используется аналогичный принцип, только в качестве метки используется радиоактивный изотоп. Измеряя радиоактивность выделившегося изотопа, определяют количественное содержание искомого вещества.

Из лекарственных веществ, экстрагируемых органическим растворителем из кислого раствора, наибольшее токсикологическое значение имеют производные барбитуровой кислоты. Эта группа веществ подлежит обязательному судебно-химическому исследованию при проведении общего судебно-химического анализа (Приказ МЗ СССР . №1021 от 25.12.73 г.).

Первый из барбитуратов – барбитал- синтезирован в 1881 г. В медицинскую практику производные барбитуровой кислоты были введены в 1903 г. Фишером и Мерингом. В настоящее время синтезировано около 2500 производных, из которых в нашей стране применяется 11.

Токсикологическое значение производных барбитуровой кислоты очень велико. С одной стороны, барбитураты обладают высокой фармакологической активностью, поэтому их передозировка может привести к различным осложнениям и даже вызвать смертельный исход. С другой - они достаточно доступны для населения, т.к. широко используются в медицинской практике в качестве снотворных, седативных, противосудорожных средств. В технике и в фотографии применяются как ингибиторы и антиоксиданты, в химических лабораториях как реактивы. При длительном применении они вызывают пристрастие и привыкание, т.е. барбитуровую токсикоманию и наркоманию (барбамил и этаминал-натрий официально отнесены к наркотическим средствам). Все эти факторы приводят к тому, что производные барбитуровой кислоты занимают одно из первых мест по количеству вызываемых ими отравлений.

В основе химического строения барбитуратов лежит кольцо малонилмочевины, или барбитуровой кислоты, которая может быть получена при взаимодействии мочевины и диэтилового эфира малоновой кислоты.

малонилмочевина

(2,4,6-триоксипиримидин)

Барбитуровая кислота является циклическим уреидом и может рассматриваться как производное пиримидина (2,4,6 - триоксипиримидин). Атомы водорода метиленовой группы в 5-ом положении пиримидинового кольца, а также водород, стоящий у атомов азота в 1-ом и 3-ем положениях, подвижны и способны замещаться различными органическими радикалами, атом кислорода в положении 2 также способен замещаться на атом S. На этих свойствах и основан синтез производных барбитуровой кислоты.

Общую формулу барбитуратов можно изобразить следующим образом:

где R1,R2,R3 - радикалы, содержащие от 1 до 7 атомов углерода.

В зависимости от заместителей в 1(3) и 5 положениях пиримидинового кольца, а также наличия во 2-ом положении атома О и S все барбитураты можно разделить на 3 группы:

1) 5,5 -замещенные производные (двузамещенные), из которых наиболее часто применяются:

  1. Фенобарбитал R1 - C2H5, R2 - C6H5

СН3

  1. Барбамил R1 -C2H5, R2 - Ch3 - СН2 - СН

4. Этаминал –натрий R1 - C2H5, R2 – CH - Ch3 - СН2 – СН3

Ch4

  1. Бутобарбитал R - C2H5 , R2 – C4 H9

  1. N-замещенные барбитураты (трехзамещенные)

1. Гексенал R1 – Ch4, R3 – Ch4

2. БензоналR1 - C2H5, R2 - C6H5,

Ch4

  1. Бензобамил R1 - C2H5, R2 – Ch3 - Ch3 - CH

Ch4

  1. Тиобарбитураты (атом кислорода во 2 положении замещен на атом серы)

1.Тиопентал- натрийR1- C2H5, R2- CH-Ch3-Ch3-CH-СН3

По физическим свойствам все интересующие в настоящее время судебно-химическую экспертизу барбитураты представляют собой белые кристаллические вещества без запаха, горького вкуса, лишь тиопентал имеет желтоватый оттенок и обладает слабым запахом серы.

Кислотные /молекулярные/ формы барбитуратов растворимы в эфире, хлороформе, спирте и некоторых других органических растворителях, натриевые производные - в воде.

Барбитураты имеют высокие температуры плавления. />100С/ и способны возгоняться без разложения, что используется для их очистки от посторонних примесей при выделении из биологического материала.


Смотрите также