Главная » Статьи » Стафилококк тест на капсулу

Стафилококк тест на капсулу


1. Стафилококки. Микробиологическая диагностика стафилококковой инфекции.

Род Staphylococcusвключа­ет 19видов, патогенны для человека только некоторые: S.aureus, S.epidermidisиS.saprophyticus. Заболева­ния вызывают золотистые, ре­же – эпидермальные и еще реже – сапрофитные стафилококки.

Морфология, физиология. Отдельные## имеют форму правильного шара, при размножении образуют скопления в виде гроздьев винограда (slaphyle–виноградная гроздь). В препаратах из пат материала (из гноя) располагаются поодиночке, парами или небольшими скоплениями. Золотистые стафилококки имеют способность образовывать нежную капсулу.

Стафилококки –факультативные анаэробы, но лучше разви­ваются в аэробных условиях,гр+. На поверхности плотных пит сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) КОЛОНИИ с ров­ными краями; в жидких –равномерное помутнение. В лабора­ториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6 -10 %) NaCl (ЖСА). Та­кую концентрацию соли др б!! не переносятсолевые среды являются элективными для стафило­кокков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины, дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза.

Имеют ФЕРМЕНТЫ – расщепляющие мн у/ды, белки. Диф-диагностич значение имеет тест на сбраживание глюк в анаэр усл-ях. Из ферментов, участвующих в патогенезе стафилококковых ин­фекций, только плазмокоагулаза и частично ДНКаза харак­терны для S.aureus.Другие ферменты (гиалуронидаза, протеиназа, фосфатаза, муромидаза) непостоянны (но чаще продуцируютсяS.aureus). Стафилококки ситезируют бактериоцины. Устойчивы к пенициллину (пенициллиназа).

Антигены. В-ва # стенки: пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А, типоспецифические агглютиногены, а также капсула, имеющая ПС прир. Пептидогликан имеет общ АГ с пептидогликанами микрококков и стрептококков. Антигенность тейхоевых кислот связана с аминосахарами. Белок А золотистого стафилококка способен к неспецифи­ческому соединению с Fc-фрагментом IgG,в связи с чем он агглютинируется нормальной человеческой сывороткой. У стафилококков есть30белко­вых типоспецифических антигенов. Но внутривидовая диф­ференциация по Аг структуре в практике не исполь­зуется.

Патогенность. Повреждающее действие наи тканичка оказывают ТОКСИНЫ И ФЕРМЕНТЫ. Также к факторам патогенности можно отнести КАПСУЛУ, препятствую­щую фагоцитозу и связывающую комплемент, а также белок А, инактивирующий комплемент и тормозящий опсонизацию при взаимодействии с Fc-фрагментом IgG.

S.aureusспособен выделять ряд токсинов, в частности ЛЕЙКОЦИДИН, который оказывает губительное дей­ствие на фагоцитирующие ##, главным образом ПМЯ и МКфаги. Гемолизины (α,β,дельта,γ) оказывают лизирующее действие на эр чка и ж!! (кролика, лошади, барана). Основным из них является α-токсин, продуцируемыйS.aureus. Помимо гемолитического, этот яд обладает кардиотоксическим д-ем, вызывает спазм коронарных сосудов и остановкув систоле, он поражает нервные ## и нейроны, лизирует мембраны и лизосомы ##, что приводит к освобождению лизосомальных ферментов.

Возникновение пищевых отравлений стафилококковой приро­ды связано с действием ЭНТЕРОТОКСИНОВ, продуцируемых золо­тистыми стафилококками. Известно 6антигенно различных энтеротоксинов (АВСDЕF).

ЭКСФОЛИАТИВНЫЕ токсины вызывают у новорожденных пузыр­чатку, локальное буллезное импетиго, генерализованную скарлатиноподобную сыпь. Заболевания сопровождаются внутриэпидермальной отслойкой эпителия кожи, образованием сливающих­ся пузырей, жидкость в которых стерильна. Фокус стафилокок­ковой инфекции находится чаще всего при этом в пупочной ранке.

ЭКЗОФЕРМЕНТЫ: плазмокоагулаза осуществляет свертывание плазмы (Б!! как бы одеваются в фиб­розный чехол, защищающий их от фагоцитоза). Большие кон­центрации коагулазы, в организме больного, приводят к ↓ свертываемости периферической крови, нарушению гемодинамики, прогрессирующему кислородному голоданию тканей.

Гиалуронидаза способствует распространению стафилококков в тканях.Лецитиназа разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, вызывает лейкопению.Фибринолизин раство­ряет фибрин, отграничивающий местный воспалительный очаг, чем способствует генерализации патологического процесса. Патогенетические свойства других экзоферментов стафилококков (ДНКаза, мурамидаза, протеиназа, фосфатаза), часто сопро­вождающих коагулазную активность, еще не определены.

Экология и распространение. В первые дни жизни че­ловека стафилококки поселяются на слизистых оболочках рта, носа, в кишечнике, а также на коже, входят в состав формирующейся НОРМАЛЬНОЙ МКФ ТЕЛА ЧКА.

Стафилококки постоянно поступают в окр среду от человека. Они присутствуют на предметах обихода, в воздухе, в воде, в почве, на растениях. Но их болезнетворная активность различна, особое внимание уделяется золотистым стафилокок­кам как потенциально патогенным для человека. При контакте с источником инфекции носителями S.aureusстановятся не все люди. Формированию БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА способствуют низкое содержание SIgAв носовом секрете и дру­гие проявления функциональной недостаточности иммунной си­стемы. У таких лиц формируется резидентное носительство, т. е. постоянным местом обитания стафилококков становится сли­зистая оболочка носа, на которой мкинтенсивно размножаются и выделяются в окружающую среду массивными дозами. В ЛЕЧЕБНЫХ УЧРЕЖДЕНИЯХ их источником явл больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами (инфекция передается контактным путем). Этому способствует длительность выживания стафилококков на окру­жающих предметах.

Хорошо ПЕРЕНОСЯТ высушивание, пигмент за­щищает их от губительного действия солнечного света (пря­мые солнечные лучи убивают их только через несколько часов). При комнt° они остаются жизнеспособными на предметах ухода за больным в течение 35–50дней, на предме­тах твердого инвентаря –десятки дней. При кипячении гибнут мгновенно, чувствительны к дезинфектантам, к БРИЛЛИАНТОВОЙ ЗЕЛЕНИ, что позволяет широко применять её для лечения поверхностных воспалительных заболеваний кожи.

Патогенез заболеваний человека. Способны поражать любую тк чского. Это местные гнойно-воспалительные процессы (фурункулы, карбункулы, нагноения ран, бронхиты, пневмонии, отит, ангина, конъюнктивит, менингит, эндокардит, энтероколит, пищ отравления, остеомиелит). ГЕНЕРАЛИЗАЦИЯ любой формы местного процесса завершается сепсисом или септикопиемией. У лиц с иммунодефицитными состояниями стафилококковые инфекции развиваются чаще.

Иммунитет. Взрослые устойчивы, т.к. имеют естественные защитные механизмы и специфические Ат, которые приобретаются в течение жизни при контакте с больными и носителями. В процессе стафило­кокковой инфекции возникает сенсибилизация организма.

В формировании им-та имеют значение как антимикробные, так антитоксические и антиферментные АТ. Степень защиты определяется их титром и местом действия. Большую роль играют секреторные IgA,обеспечивающие местный имму­нитет слизистых оболочек. Ат к тейхоевым кислотам определяются в сыворотках кр взрослых и детей с тяжелыми стафилококковыми инфекциями: эндокардитом, остеомиелитом, сепсисом.

Лаб диагностика. Материал (гной) подвергают БАКТЕРИОСКОПИИ и высевают на пит среды. Кровь, мокроту, фекалии исследуют БАКТЕ­РИОЛОГИЧЕСКИМ методом. После выделения чистой культуры по ряду признаков определяют видовую принадлежность. В случае выделенияS.aureusопределяют плазмокоагулазу, гемолизин, А-протеин.

СЕРОДИАГНОСТИКА: РП(альфа-токсин), РНГА, ИФА.

Для установления источника и путей распространения ин­фекции, выделенные культуры ФАГОТИПИРУЮТ. Лабораторный ана­лиз непременно включает определение чувствительности выде­ленной культуры или культур к антибиотикам.

Профилактика и лечение. Профилактика направлена на выявление носителейS.aureus, гл образом среди персонала мед учреждений, с целью их санации. Особое вни­мание уделяется профилактике стафилококковых инфекций у новорожденных.

Для лечения острых стафилококковых заболеваний назна­чаются антибиотики, выбор которых определяется чувствитель­ностью выделенной культуры к набору препаратов. При септи­ческих процессах вводят противостафилококковый иммуноглобулин или антистафилококковую плазму. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хрониосепсис, фурункулез и др.) применяют стафилококковый анатоксин, аутовакцину, которые стимулируют синтез антитоксических и антимикробных антител.

«Петритест» (подложка) - экспресс-тесты на определение Cтафилококка

Если у вас пищевое производство, кафе или ресторан, салон красоты или солярий, образовательное или медицинское учреждение, то вам потребуются «Петритетсты» - для обязательного микробиологического контроля.

Экспресс-тесты на стафилококк производства НПО «Альтернатива» очень просты в эксплуатации. Вам не нужно будет проходить специальных курсов или нанимать лаборантов – все необходимые исследования могут сделать сами сотрудники, руководствуясь инструкцией. Теперь вам не придется ждать результата анализов несколько дней, привлекая стороннюю лабораторию. Все, что вам нужно – это «Петритесты» и уже через 12 часов вы узнаете, есть ли недружелюбные микробы у вас на территории и какие именно. Биоконтроль пройден.

*Цена указана за упаковку (10 ПЕТРИТЕСТОВ В УПАКОВКЕ)

Разнообразие микроорганизмов в природе поражает. Но не все они дружественны человеку. Одни из самых распространенных «вредителей» - стафилококки. Эти бактерии вырабатывают энтеротоксины, которые могут вызвать острые инфекции и заболевания, серьезные гнойные воспалительные процессы практически во всех органах и тканях.

На пищевом предприятии источниками обсеменения пищевых продуктов являются люди, причем не только с поражениями кожи (ожоги, порезы, гнойники и пр.) или страдающие ОРВИ. Было доказано, что и здоровые носители болезнетворных бактерий могут инфицировать продукты.

Скорость образования опасных энтеротоксинов зависит от температуры и состава пищевых продуктов. Стафилококки могут быть как в белковых продуктах, так и в углеводистых. Так что стафилококковые токсикозы легко могут возникнуть и в молочных продуктах, и в кондитерских, и в мясных (особенно опасен фарш), и в салатах.

Очевидно, что возможность заражения стафилококками сохраняется не только на пищевых производствах, но и на предприятиях общественного питания. Если в кафе не соблюдаются санитарные условия, необходимые для организации общественного питания, риск образования энтеротоксинов возрастает многократно. Чтобы избежать такого негативного сценария, необходимо регулярно проводить исследования с помощью «Петритест» (подложка) на определение стафилококка.

Отметим, что в зоне риска находятся не только предприятия пищевой отрасли. Салоны красоты, солярии, маникюрные салоны – там также могут развиваться разные виды стафилококка, например золотистый, наиболее патогенный для человека. Стерилизация и дезинфекция инструментов, тщательное следование всем санитарным нормам и правилам и постоянный биоконтроль с использованием «Петритеста» сделают ваш салон местом, свободным от стафилококков.

Добавим также, что именно стафилококк возглавляет список бактерий, которыми наиболее часто заражаются в медицинских учреждениях. Соответственно, проверить микробиологию с помощью «Петритестов» можно также и в поликлиниках и в больницах. При этом в медицине сфера применения данных экспресс-тестов очень широка. Например, врачи лор-направления могут использовать «Петритесты» для проведения лабораторных анализов для выявления типа возбудителя инфекции – того же стафилококка, например. Наш тест на стафилококк очень удобен и с точки зрения скорости – не придется ждать ответа из лаборатории и с точки зрения наглядности – врач сам видит результаты исследования и может ознакомить с ними пациента.

«Петритест» - быстро, качественно и удобно.

Стафилококк и стафилококковые инфекции

Открыты Л. Пастером в 1880 г. Род Staphylococcus включает 19 видов, из них только 3 вида экологически связаны с организмом человека: S. aureus - стафилококк золотистый, S. epidermidis - стафилококк эпидермальный и S. saprophyticus - стафилококк сапрофитный. Заболевания, отличающиеся разнообразием клинических проявлений, вызывают золотистые, реже - эпидермальные и еще реже - сапрофитные стафилококки. Отдельные клетки стафилококков, имеющие форму правильного шара, при размножении образуют скопления в виде гроздьев винограда (staphyle - виноградная гроздь). В препаратах из патологического материала, в частности из гноя стафилококки располагаются парами или небольшими скоплениями. Золотистые стафилококки образуют микрокапсулу. Стафилококки являются хемоорганотрофами с окислительным и бродильным типами метаболизма. Они расщепляют многие углеводы в аэробных и анаэробных условиях. Диагностическое значение имеет способность сбраживать глюкозу и маннит в анаэробных условиях.

[Рис.1][Рис.2][Рис.3]

[Рис. 1] Золотистый стафилококк

Стафилококки - факультативные анаэробы, но лучше развиваются в аэробных условиях. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии с ровными краями; в жидких средах дают равномерное помутнение. В лабораториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6-10%) хлорида натрия. Такую концентрацию соли другие бактерии не переносят, вследствие чего солевые среды являются элективными для стафилококков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза (рис. 20.2 на ив. вкладку). Стафилококки образуют ферменты, сбраживающие многие углеводы. Дифференциально-диагностические значение имеет тест на сбраживание глюкозы в анаэробных условиях. Стафилококки обладают разнообразными антигенами, локализованными в основном в клеточной стенке, S. aureus имеет также капсульный антиген. Из компонентов клеточной стенки антигенами являются пептидогликан, белок А, расположенный снаружи пептидогликана. Наличие белка А характерно для S. aureus. Этот белок способен к неспецифическому соединению с Fc-фрагментами IgG, в связи с чем стафилококки, обладающие белком А, способны агглютинироваться нормальной человеческой сывороткой и давать неспецифическое свечение при обработке гетерологичными флюоресцирующими сыворотками. Капсульный антиген S. aureus имеет сложное химическое строение. Он состоит из уроновых кислот, моносахаридов и аминокислот. У стафилококков описаны и типоспецифические антигены. Факторы вирулентности стафилококков, особенно S. aureus, связаны с их адгезией на рецепторах чувствительных клеток, колонизацией и агрессивными свойствами, проявляющимися в подавлении фагоцитоза. Адгезивная способность стафилококков выражена в отношении клеток и межклеточных веществ разных тканей (эпителий, фибронектин, коллаген, фибриноген и др.). При этом адгезия стафилококков на разных клетках и субстратах происходит за счет определенных адгезинов. Так, тейхоевые кислоты ответственны за адгезию на эпителиальных клетках. Стафилококки не прилипают к тромбам, если последние покрыты гноем, вследствие блокирования фибронектиновых рецепторов. Капсульные полисахариды также способствуют адгезии, в частности к эндопротезам. Важнейшим их свойством является индукция большого количества иммуноцитокинов, что приводит к возникновению очагов воспаления и образованию абсцессов. Капсульные полисахариды подавляют активность фагоцитирующих клеток. Белок А, содержащийся в клеточной стенке Staphylococcus aureus, обладает антифагоцитарными свойствами. Он связывается с фибронектином - адгезивным гликопротеином, покрывающим поверхность клеток и находящимся в базальных мембранах, основном веществе соединительной ткани, а также циркулирующим в крови. Выраженным токсическим действием не обладает. Таким образом, белок А участвует в адгезии и обладает агрессивным действием. Из экзоферментов, продуцируемых главным образом S. aureus, существенную роль в патогенезе заболеваний играют плазмокоагула-за, гиалуронидаза, лецитиназа, фибринолизин, ДНК-аза. Плазмокоагулаза вызывает свертывание плазмы крови. Стафилококки, продуцирующие этот фермент, покрываются фибриновым чехлом, защищающим их от фагоцитоза. Большие концентрации коагу-лазы, циркулирующие в организме больного, приводят к понижению свертываемости крови, нарушению гемодинамики, прогрессирующему кислородному голоданию тканей.Гиалуронидаза, субстратом действия которой является гиалуроно-вая кислота, способствует распространению стафилококков в тканях вследствие нарушения их проницаемости.

Лецитиназа разрушает лецитин в составе клеточных мембран лейкоцитов и других клеток, что способствует лейкопении. Фибринолизин растворяет фибрин, ограничивающий местный воспалительный очаг, чем приводит к генерализации инфекции. Патогенетические свойства других ферментов стафилококков (нуклеазы, липазы, протеиназы, фосфатазы), часто сопровождающих коагулазную активность, четко не определены. Из ферментов, участвующих в патогенезе стафилококковых инфекций, только коагулаза и частично ДНК-аза характерны для S. aureus. Другие ферменты непостоянны.

Стафилококки секретируют ряд токсинов, отличающихся друг от друга по механизму действия. К ним относятся мембраноповреждающие токсины или мембранотоксины. Они образуют каналы в цитоплазматической мембране эритроцитов, лейкоцитов и других клеток, что приводит к нарушению осмотического давления и лизису соответствующих клеток. Ранее их называли гемолизинами, полагая, что они лизируют только эритроциты. Мембранотоксины отличаются друг от друга по антигенным свойствам, «мишени» и другим признакам, ?-токсин обладает еще дермонекротическим и кардиотоксическим действием. Он представляет собой белок с выраженными иммуногенными свойствами. Из него получен анатоксин, использующийся для лечения и профилактики стафилококковых заболеваний, ?-токсин наряду с мембраноповреждающим действием на эритроциты и соединительнотканные клетки, угнетает хемотаксис полиморфно-ядерных лейкоцитов, х-токсин разрушает эритроциты, лейкоциты и клетки соединительной ткани.

Золотистые стафилококки могут образовывать гистотоксины, к которым относятся энтеротоксины, вызывающие пищевую интоксикацию. Известно 6 энтеротоксинов (А, В, С, D, E, F), различающиеся по антигенным свойствам. Некоторые стафилококки продуцируют экзотоксин, вызывающий синдром «токсического шока». Чаще всего данные стафилококки являются обитателями мочевых путей женщин.

[Рис.1][Рис.2][Рис.3]

[Рис. 2] Золотистый стафилококк

Механизм действия этого токсина состоит в гиперактивации моноцитов и макрофагов с последующей гиперпродукцией ИЛ-1, ТНФ (туморнекротизирующий фактор). Таким образом, данный токсин обладает всеми свойствами, присущими суперантигенам. Он представляет собой белок, образование которого кодируется хромосомными и плазмидными генами (профагом), находящимся в бактериальной хромосоме. Наряду с опосредованным действием данный экзотоксин оказывает прямое действие на кровеносные капилляры, увеличивая их проницаемость. Заболевание часто заканчивается летальным исходом. Преимущественное значение в патологии человека имеет золотистый стафилококк. В организм человека он может проникать различными путями. Стафилококки обладают полиорганным тропизмом, связанным с их способностью адгезировать на рецепторах клеток разных тканей и органов человека. Их пантропность выражается в способности вызывать гнойно-воспалительные процессы в коже, подкожной клетчатке, лимфоузлах (фурункулы, карбункулы, маститы, абсцессы и др.), респираторном тракте (бронхиты, пневмонии, плевриты), ЛОР-органах (отиты, ангины, гаймориты, тонзиллиты и др.), органах зрения (конъюнктивиты, язвы роговицы), желчевыводящих путях (холециститы, холангиты и др.), мочеполовых органах (гломерулонефриты, уретриты, простатиты и др.), опорнодвигательном аппарате (остеомиелиты, артриты, миозиты), а также пищевые отравления. Генерализация любой формы местного процесса может привести к сепсису или септикопиемии. Острые кишечные заболевания (ОКЗ) стафилококки вызывают у новорожденных. Стафилококки могут вызывать тяжелые формы ОКЗ, а также менингиты у детей младшего возраста. Организм здорового человека обладает значительной устойчивостью к стафилококкам. После перенесенной стафилококковой инфекции в крови появляются антитоксины. Обнаружение антитоксина свидетельствует о напряженности иммунитета к стафилококкам. Наличие в крови человека а-антитоксина в титре больше 2 ME указывает на недавно перенесенное заболевание стафилококковой этиологии.

При контакте с широко распространенными в окружающей среде стафилококками, а также в результате перенесенных заболеваний индуцируется гуморальный иммунный ответ, в результате которого образуются антитела на антигены микробных клеток, токсины и ферменты. Клеточный иммунный ответ проявляется в подавлении фагоцитоза. Устойчивость к фагоцитозу у вирулентных штаммов S. aureus, возможно, связана с их способностью образовывать капсулу in vivo, а также с продукцией коагулазы, образующей вокруг бактерий фибрин. Белок А препятствует фагоцитозу, связываясь с Fc-участками IgG. В ряде случаев наблюдается специфическая сенсибилизация организмов. Определенное значение при стафилококковых инфекциях имеют секреторные IgA, обеспечивающие местный иммунитет слизистых оболочек. Экология и эпидемиология. Стафилококки широко распространены в природе. Они обнаруживаются на коже и слизистых оболочках человека, встречаются у животных. Каждый вид стафилококка подразделяется на экологические варианты (эковары). Вид S. aureus включает 6 эковаров: А, В, С, D, Е и F. Основными хозяевами этих эковаров являются соответственно человек, свинья, домашняя птица, крупный рогатый скот, овцы, зайцы, собаки и голуби. Резервуаром золотистого стафилококка служат здоровые носители и больные с различными стафилококковыми поражениями. Наибольшую опасность в смысле распространения стафилококков представляют бактерионосители, у которых патогенные стафилококки обнаруживают на слизистой верхних дыхательных путей, особенно передних отделов носовых ходов, а также больные люди с кожными поражениями. Стафилококки достаточно резистентны к факторам окружающей среды. Они хорошо переносят высушивание, длительное время остаются жизнеспособными в пыли.

Род Staphylococcus включает шаровидные неподвижные аспорогенные грамположительные факультативно-анаэробные бактерии, принадлежащие к семейству Mисrососсасеае. В определителе бактерий Д.Берги приведены дифференциальные признаки 29 видов стафилококков. Они делятся на две группы - коагулазоположительные и коагулазоотрицательные. К первой группе относятся S. aureus, S. intermedius и S. hyicus. их роль в инфекционной патологии равнозначна. Чаще различные заболевания у людей и животных вызывает S.aureus, реже - S. hyicus. S. intermedius патогенный только для животных. На протяжении многих лет коагулазоотрицательные стафилококки считали непатогенными. Но теперь эта точка зрения изменилась. В связи с ухудшением экологической ситуации в большинстве стран и связанным с ней снижением естественного иммунитета участились случаи гнойно-септических поражений тканей и органов, вызванных коагулазоотрицательные видами, которые встречаются на коже и слизистых оболочках человека (S. epidermidis, S.auricularis , S.capitis, S.cohnii, S.haemolyticus, S.hominis, S.lentus, S.saprophyticus, S.schleiferi, S.simulans, S.wameri, S.xylosus ma in.).Среди эпидемиологов, микробиологов и клиницистов довольно распространенное убеждение, что сегодня непатогенных стафилококков не существует. Все учащаются случаи выделения из крови, тканей и органов культур стафилококков без каких-либо маркеров патогенности. Однако, при элиминации их из организма исчезают все симптомы заболевания. Все это необходимо учитывать при проведении лабораторной диагностики стафилококковых инфекций. К сожалению, в рутинных бактериологических лабораториях нашей страны пока возможна идентификация лишь S. aureus, S. epidermidis и S.saprophyticus.

Стафилококки чаще поражают кожу, ее придатки и подкожную клетчатку. Они вызывают фурункулы, карбункулы, панариции, паронихии, абсцессы, флегмоны, маститы, лимфадениты, нагноения ран, в том числе операционных. У детей стафилококки являются возбудителями стафилодермий, эпидемических пухирчаток, импетиго. их выделяют при плевритах, бронхитах, пневмониях, перитонитах. Они могут вызвать ангины, тонзиллиты, гаймориты, отиты, конъюнктивиты, несколько реже - менингиты, абсцессы мозга, миокардиты, эндокардиты, артриты, инфекции сосудистых протезов. Очень опасные пищевые токсикоинфекции, энтероколиты, холециститы, циститы, пиелит, пиелонефрит. При проникновении в кровь или костный мозг вызывают сепсис, остеомиелит, синдром токсического шока. Однако все заболевания стафилококковой этиологии не рассматриваются как острозаразное.

При стафилококковых инфекциях исследуют гной, кровь (при сепсисе), выделения слизистых оболочек, мокроты, воспалительный экссудат, ликвор, раневое содержание, плевральный выпот, желчь, мочу. В случае подозрения на токсикоинфекцию - рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, остатки пищи (особенно творог, молоко, пирожные, торты, кремы, мороженое и др.).. При санитарно-бактериологическом контроле исследуют смывы с рук, столов и других предметов. В бактерионосителей материал забирают тампоном отдельно из глотки и носовых ходов.

Из открытых гнойных поражений материал берут стерильным ватным тампоном после удаления раневого налета, в котором может быть сапрофитная микрофлора из воздуха, кожи и т.д.. При закрытых нарыва делают пункцию шприцем. Слизь из рото-и носоглотки берут стерильным тампоном. Мокроту и мочу забирают в стерильные пробирки, банки. Кровь (10 мл), взятую из локтевой вены, и ликвор - при пункции спинномозгового канала, с соблюдением асептики сеют у постели больного в 100 мл сахарного бульона. Кровь рекомендуют быстро (к ее свертыванию) вносить прямо из шприца во флакон с бульоном, тщательно перемешать, предотвращая образование сгустка. Пробы крови нельзя замораживать. В 25% случаев при стафилококковом сепсисе количество бактерий в крови (КОЕ) может быть меньше 1 / мл. При подозрении на такое положение необходимо сеять 25-30 мл крови.

Почти со всех исследуемых материалов (навоз, раневой содержание, экссудат, мокроты, осадок мочи и т.д.) с помощью бактериологической петли изготавливают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Только из крови и смывов мазки не делают так в них малое количество микроорганизмов. В типичных случаях стафилококки имеют шарообразную форму, фиолетовый цвет, располагаются несимметричными гроздьями, но встречаются и одинокие клетки, пары или тетради.

В последнее время в связи с широким использованием антибиотиков морфология стафилококков изменилась и типового их расположения в мазках из гноя часто не наблюдают. В связи с этим отличить стафилококки от стрептококков по их морфологии и взаимным расположением часто практически невозможно. Поэтому нужно делать посев, выделять чистую культуру и идентифицировать ее.

[Рис.1][Рис.2][Рис.3]

[Рис. 3] Золотистый стафилококк в чаше Петри

Но и первичная микроскопия может дать предварительный ответ в случае выявления типичных грамположительных кокков правильной круглой формы, расположенных гроздьями и при большом количестве бактерий в поле зрения. Она также позволяет выбрать необходимые для посева элективные среды, провести прямое определение чувствительности к антибиотикам микрофлоры навоза еще до выделения чистой культуры.Материал от больных и бактерионосителей засевают немедленно или не позднее 3-4 ч после взятия при условии хранения его на холоде.В первый день петлей, шпателем или непосредственно тампоном делают посевы на кровяной агар и элективные для стафилококков среды (желтково-солевой (ЖСА) или молочно-желтково-солевой агар (МЖСА). Чашки с посевами инкубируют при 37 ° С в течение 48 часов , или сутки в термостате и дополнительно 24 ч при комнатной температуре при хорошем освещении. Если в исследуемом материале бактерий мало (данные микроскопии) - занял для обогащения делают еще в тиогликолевой среду.На второй день производят высев из сахарного бульона на указанные элективные среды, исследуют массивность роста и характер колоний после посевов других материалов. На кровяном агаре стафилококки образуют непрозрачные, слегка выпуклые колонии средних размеров с гладкой, блестящей, словно полированной поверхностью, четко очерченным краем, маслянистой консистенции. Патогенные штаммы образуют вокруг колоний прозрачные зоны гемолиза. На элективные-дифференциальных средах, как правило, вырастают только колонии стафилококков. В частности, на желтково-солевом агаре они образуют колонии с зоной помутнения вокруг них и характерным радужным венчиком по периферии (лецитовителазна реакция). На молочно-желтково-солевом агаре выявляют наличие пигмента, который может быть золотистым, палевым, белым, желтым, оранжевым и др..Из всех типов колоний изготовляют мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, проявляя типичные грамположительные стафилококки. Не менее двух типичных или подозрительных в отношении стафилококков колоний пересевают на скошенный агар. В первую очередь отсеивают колонии с гемолизом и те, которые дали положительную лецитовителазную реакцию. При отсутствии таких колоний исследуют не менее двух пигментированных колоний, при микроскопии которых выявили типичные стафилококки. Пробирки с посевами помещают в термостат при 37 ° С на 18-20 час.

В последующие дни проводят идентификацию выделенных чистых культур, для чего проверяют их морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму), плазмокоагулюючу активность и другие свойственные стафилококков тесты.

Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. Ее можно приготовить в любой лаборатории. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в аглютинацийни стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5. Плазма человека малопригодна для постановки реакции плазмокоагуляции, поскольку в ней могут быть консерванты, лекарственные вещества, антитела, которые могут подавлять образование плазмокоагулаза.

Если выделена культура вызывает гемолиз, коагулирует плазму и дает положительную лецитовителазну реакцию, уже на третий день можно выдать результат на наличие S. aureus. Если культура обладает только плазмокоагулаза или только вителазну активность, для окончательного установления вида стафилококка необходимо определить дополнительные критерии патогенности: ферментацию маннита в анаэробных условиях, ДНК-азную активность, продукцию лизоцима, фосфатазы, а также определить чувствительность к новобиоцин.

Ферментацию маннита в анаэробных условиях можно определять, используя стандартное сухой среде с маннитом и индикатором BP. После его изготовления и регенерации в пробирки добавляют по 1 мл стерильного вазелинового масла и засевают культуру уколом в столбик. Посевы в термостате в течение 5 суток. При разложении маннита среду синеет Эта проба положительна у 94-96% штаммов S.aureus.До сухого питательного агара добавляют навеску ДНК из расчета 2 мг на 1 мл среды, затем стерилизуют текучим паром ЗО мин. Его можно хранить в холодильнике в течение 2-х месяцев. Перед использованием агар расплавляют, добавляют хлористый кальций (0,8 мг на 1 мл). На подсушенные среду в одной чашке можно засеять полосками до 16-20 культур. После инкубации посевов в течение 18-20 ч их заливают 5 мл IN НС1. Через 7-10 мин кислоту сливают и проводят учет. Соляная кислота, реагируя с ДНК, образует непрозрачный белый преципитат. Если культура продуцирует ДНК-азу, последняя деполимеризует ДНК и при добавлении соляной кислоты вокруг полосок культур возникает прозрачная зона, что свидетельствует о наличии фермента ДНК-азы.Гиалуронидазную активность определяют, прибавляя к 0,5 мл бульонной культуры стафилококка 0,5 мл препарата гиалуроновой кислоты с пупочного канатика. Смесь инкубируют 30 мин при 37 ° С и 10 мин при 4 ° С. В пробирку добавляют 4 капли 15% уксусной кислоты, встряхивают и через 5 мин делают учет результатов. Отсутствие сгустка свидетельствует о наличии гиалуронидазы, наличие сгустка - о ее отсутствии. Для изготовления гиалуроновой кислоты свежую пуповину новорожденных измельчают, заливают двойным количеством дистиллированной воды. Смесь выдерживают 24 ч в холодильнике, затем нагревают и кипятят до свертывания кусочков пуповины. Полученный гиалуронат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и проверяют на образование сгустка.Лизоцимную активность стафилококков определяют с помощью посева выделенных культур в виде бляшек на плотный питательный агар, к которому добавляют густую взвесь культуры Micrococcus luteus. При выделении лизоцима вокруг бляшек возникают зоны лизиса (просветления агара).Определение фосфатазы проводят посевом культур на питательный агар, к которому заранее добавляют паранитрофенилфосфат (0,5 мг на 1 мл среды).Инкубация в течение 18-20 ч при 37 ° С. Появление вокруг посевов интенсивного желтого цвета свидетельствует о выделении фосфатазы.Устойчивость к новобиоцину определяют посевом культуры на мясо-пептонный агар с новобиоцин (1,6 мкг / мл). Золотистые и эпидермальные стафилококки чувствительны к этому антибиотику, a S.saprophyticus - устойчив. Выделенная чистую культуру сеют в глюкозо-фосфатный бульон Кларка. Через три дня инкубации при 37 ° С до 1 мл культуры добавляют 0,6 мл альфа-нафтола и 0,2 мл КОН и встряхивают. При положительной реакции через 3-5 мин появляется розовая окраска. Патогенные стафилококки, вызывающие пищевые токсикоинфекции, выделяют и идентифицируют так же, как и стафилококки вообще. Они отличаются способностью продуцировать энтеротоксины А, В, CI, С2, СЗ, D, Е, F, характеризующиеся термостабильностью и антигенной специфичностью. Наиболее часто встречающиеся типы А и D. Указанные токсины получают путем посева культуры в специальное полужидкую среду, инкубируют 3-4 суток при 37 ° С в эксикаторе с 20% С02. Среда с токсином пропускают через мембранные фильтры № 3 и 4. Полученный фильтрат прогревают при 100 ° С 30 мин и вводят котятам поросят внутрибрюшинно или через зонд в желудок. Через 30-60 мин у животных возникает рвота, позже понос и общее прострация. Чтобы выявить энтеротоксины в пищевых продуктах, которые повлекли токсикоинфекцию, ими кормят котят. В последнее время идентификации и типирования энтеротоксинов проводят с помощью реакции имунопреципитации в агаровом геле. Это самый простой и чувствительный метод выявления энтеротоксинов.Серологическое исследование при стафилококковых инфекциях проводится лишь тогда, когда возбудителя выделить не удается, например, при хронических процессах (остеомиелит, септикопиемия) особенно если они долго лечатся антибиотиками. Среди современных серологических реакций часто используют РНГА и ИФА, в частности для определения антител к рибиттейхоевои кислоты или других видоспецифический антигенов. Но идентификация антител к тейхоевые кислоты решающего значения не имеет, а результаты часто противоречивы. К тому же, реактивы для их определения пока малодоступны.Исследование на бактерионосительство среди медицинского персонала проводится дважды в год. При плановых бактериологических обследованиях обязательно исследуют слизь из носа. Исследования слизи из ротоглогки проводят выборочно, при наличии воспалительных процессов в зеве. Материал берут из передних отделов носа стерильным ватным тампоном и им же сеют на ЖСА не позднее, чем через 2 ч после взятия. Выделение и идентификацию S.aureus проводят так же, как и при исследовании других материалов.При определении массивности обсеменения стафилококками слизистой носа тампон с исследуемым слизью вносят в пробирку с 0,5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия, прополаскивают его в жидкости встряхиванием в течение 10 мин, отжимают о стенки и удаляют. Жидкость многократно перемешивают пипеткой. Отдельно пипеткой наносят 0,1 мл смыва на чашку с ЖСА и тщательно растирают шпателем. Чашки с посевами инкубируют при 37 ° С в течение 48 ч, после чего подсчитывают количество колоний. Если с 50 колонийS.aureus, выросшие, две отнесены к одному и тому же фаготип, правомерно считать, что и все остальные колонии, идентичные по морфологии и пигментом, относятся к S. aureus аналогичного фаготип.

Пример для расчета: после посева 0,1 мл смыва выросло 50 колоний S.aureus. Так, в 0,5 мл будет 50 * 5 = 250 колоний или 2,5 * 10В2.Массивность стафилококкового обсеменения, которое выражается числом 102 микробных клеток, является умеренной, при ней возбудитель в окружающую среду не выделяется. При выделении> 10в3 бактериальных клеток уровень обсемененности определяют как высокий, при котором возбудитель выделяется во внешнюю среду не только при кашле и чихании, а при спокойном дыхании. При таких обстоятельствах нужно обязательно проводить санацию бактерионосителей.

Профилактика заболеваний, вызываемых стафилококками, включает несколько направлений. К ним относятся меры борьбы с источником инфекции, которыми являются люди, страдающие гнойно-воспалительными процессами и бактерионосители, при лечении которых возникают определенные трудности. Особенно важно в комплексе профилактических мероприятий предупреждение стафилококковых заболеваний в лечебных учреждениях. Это прежде всего организация режима работы отделений больниц. Отделения, в которых находятся больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами, должны обслуживаться отдельным персоналом. Для предупреждения возникновения стафилококковых заболеваний у лиц, подвергающихся риску травматизма или инфицирования, рекомендуется использовать метод иммунизации сорбированным анатоксином или введение иммуноглобулина.

Особая проблема - профилактика стафилококковых заболеваний у новорожденных. У них еще до настоящего времени стафилококк является одним из главных возбудителей инфекции. В данном случае в профилактику включают иммунизацию рожениц стафилококковым анатоксином, а также проведение количественного и качественного анализа обсемененности молока родильниц с целью более строго подхода к переводу новорожденного на вскармливание кипяченым грудным молоком. В норме в женском молоке содержится три класса иммуноглобулинов - IgG, IgM и IgA, которые разрушаются при кипячении.

Для лечения стафилококковых инфекций применяют антибиотики, выбор которых определяется чувствительностью выделенной культуры к определенным препаратам. Из них наибольшее значение имеют р-лактамные препараты (оксициллин, метициллин и др.). В последние годы появились метициллиноустойчивые штаммы. Их устойчивость в отличие от других штаммов не контролируется R-плазмидами, а объясняется хромосомными мутациями. Для лечения таких больных применяют ванкомицин и фторхинолоны.Кроме того, для лечения стафилококковых инфекций используют цефалоспорины 1 и 2 поколении, реже тетрациклины. При сепсисе наряду с антибиотиками вводят противостафилококковый Ig. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хронический сепсис, фурункулез и др.) используют анатоксин, аутовакцину, стимулирующие синтез антитоксических и антимикробных антител.

Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций

Методы микробиологической диагностики стафилококковых забо­леваний отражены в схеме 1. Выполняется следующий комплекс методов исследования.

Бактериоскопический метод – микроскопия мазков из материала от больного, окрашенных по Граму. Выявление в мазках кокков, располагающихся небольшими группами по 2-3 бактерии; типичное расположение в виде гроздьев винограда характерно для чистых культур стафилококка (рис. 1 – цветная вкладка).

Бактериологический метод.Исследуемыйматериал засевают на чашки с желточно-солевым (ЖСА) и кровяным МПА, инкубируют при 370С сутки. На 2 день учитывают характер

роста колоний на обеих средах. На желточно-солевом агаре колонии стафило­кокка имеют ровные края, гладкую поверхность, вокруг колонии образуется радужный венчик в результате расщепления лецитина яичного желтка ферментом лецитовителлазой; цвет пигмента колоний варьирует от золотистого до белого. На кровяном МПА вокруг колоний образуются зоны

гемолиза. Из типичных для стафилококка колоний делают мазок, окрашивают его по Граму, микроскопируют. Оставшуюся часть колонии пересевают на скошенный МПА для получения чистой культуры. На 3 день проводят идентификацию выделенной культуры стафилококка с дифференциацией основных видов в соответствии с таблицей 2, определяют чувствительность к антибиотикам методом бумажных дисков и фаговар (набор для фаготипирования состоит из фагов 21 типа, разделенных на 4 группы; при внутрибольничных инфекциях наиболее часто встречаются фаговары 77 и 80).

Таблица 1.Этиология бактериальных раневых и гнойно-воспалительных инфекций

Аэробы Анаэробы
Грамположительные бактерии Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Erysipelotrix rhusiopathiae Грамотрицательные бактерии Burkholderia cepacia, Citrobacter koseri, Edwardsiella tarda, Eikenella corrodens, Enterobacter spp, Escherichia coli, Haemophylus influence, Klebsiella spp, Listeria monocytogenes, Moraxella catarrhalis, Proteus spp, Pseudomonas spp, Salmonella enterica, Serratia spp, Spirillum minus, Streptobacillus moniliformis, Vibrio vulnificus Неспорообразующие грамположительные бактерии Bacteroides spp, Prevotella spp, Porphiromonas spp, Fusobacterium spp, Veilonella spp Неспорообразующие грамотрицательные бактерии Peptostreptococcus spp, Propionibacterium spp Cпорообразующие грамположительные бактерии Clostridium perfringens, Clostridium novy, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, Clostridium sordelli, Clostridium histolyticum, Clostridium sporogenes, Clostridium ramosum
Схема 1. Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций
Материал: гной, раневое отделяемое, пунктаты из полостей и абсцессов, кровь, мокрота, моча, ликвор, рвотные массы, испражнения, остатки пищи.
Микроскопический метод Выявление грамположительных кокков (группами по 2-3 клетки) в мазках из материала от больного, окрашенных по Граму Серологический метод РНГА или РН для определения α-антитоксина в сыворотке крови больных хроническими стафилококковыми инфекциями. ИФА для определения антител к стафилококку. Имеет вспомогательное значение Бактериологический метод 1 день. Посев материала на чашки с желточно-солевым (ЖСА), кровяным МПА, сахарным МПБ. 2 день -учет характера роста колоний. На ЖСА колонии стафило­кокка с ровными краями, гладкой поверхностью, радужным венчиком вокруг, цвет - от золотистого до белого. На кровяном МПА - зоны гемолиза, в МПБ –равномерное помутнение. В мазке из колоний в окраске по Граму – кокки в виде гроздьев винограда. Пересев оставшейся части колонии на скошенный МПА для получения чистой культуры, а с сахарного МПБ на кровяной МПА и ЖСА для получения изолированных колоний. 3 день - идентификация выделенной культуры стафилококка, дифференциация видов по биохимическим свойствам, определение чувствительности к антибиотикам и фаговара. Выделение чистой культуры с ЖСА и кровяного МПА. 4 день.Заключение о виде стафилококка. Идентификация культуры, выделенной из сахарного МПБ 5 день.Заключение о виде стафилококка, выделенного из сахарного МПБ.

Таблица 2. Дифференциация основных видов стафилококка

Признаки Виды стафилококков
S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
Плазмокоагулаза + - -
Лецитиназа + - -
Альфа-токсин + - -
Анаэробная ферментация глюкозы + + -
Анаэробная ферментация маннита + - -
Чувствительность к новобиоцину S S R

Обозначения: (+) – наличие признака; (-) – отсутствие признака; S - чувствительный; R – резистентный.

Для выявления плазмокоагулазы цитратную плазму крови кролика разводят в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, куда вносят петлей культуру стафилококков. Резуль­таты регистрируют через 2, 4, 24 часа. При наличии плазмокоагулазы об­разуется сгусток.

В некоторых случаях у выделенных чистых культур стафилококка определяют наличие ДНК-азы, каталазы, лизоцимной активности, фибринолизина, гиалуронидазы.

Лизоцимную активность выявляют по зонам просветления вокруг колоний стафилококка при его посеве на МПА в чашках Петри с культурой Micrococcus luteus.

Определение ДНК-азы. Суточную агаровую культуру стафилококка засевают на МПА в чашке Петри, содержащий ДНК. После инкубации посевов при температуре 370 С в течение 18-24 часов поверхность МПА заливают 1 N раствором соляной кислоты. Наличие ДНК-азы характеризуется появлением зоны просветления вокруг колоний.

Каталазный тест. Чистую культуру стафилококка вносят в каплю 3%-10%-го раствора перекиси водорода на стекле и растирают круговыми дви­жениями. При наличии каталазы перекись водорода разлагается с образо­ванием пузырьков кислорода.

Cерологический методв диагностике стафилококковых инфекций имеет вспомогательное значение, используясь, в основном, для диагностики хронических процессов (остеомиелит, септикопиемия и др.). Для определения антител к токсину стафилококка применяют РНГА с эритроцитарным диагностикумом, нагруженным α-токсином стафилококка или РН (реакция нейтрализации гемолитической активности стафилококкового токсина антитоксинами сыворотки крови больного в присутствии эритроцитов кролика). У здоровых лиц титр стафилококкового антитоксина составляет 0,5-4 АЕ. Разработан также ИФА.

Клинически значимые виды стафилококка Коагулазоположительные: S. aureus, S. hyicus Коагулазоотрицательные: S. epidermidis, S. saprophyticus, S. haemolyticus, S.hominis

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопия мазков из чистой культуры золотистого стафилококка – Staphylococcus aureus. Стафилококки окрашиваются по Граму положительно, выглядят в виде гроздьев винограда

2. Учет характера роста золотистого стафилококка(демонстрация) на ЖСА (расщепление лецитина в виде радужного венчика вокруг колоний) и кровяном МПА (гемолиз).

3. Дифференциация основных видов стафилококка(таблица 2) – (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus по образованию плазмокоагулазы, лецитиназы, альфа-токсина, ферментации маннита и глюкозы в анаэробных условиях - демонстрация).

4. Учет теста на антибиотикорезистентность методом бумажных дисков (демонстрация).

5. Определение фаговара стафилококка (демонстрация).

6. Знакомство с препаратами, используемыми для диагностики, профилактики и лечения стафилококковых и стрептококковых инфекций.

- стафилококковая вакцина - взвесь клеток коагулазоположительных штаммов S.aureus, убитая нагреванием. Используется для лечения вяло текущих стафилококковых инфекций;

- антифагин стафилококковый - экстракт из культур патогенных стафи­лококков, инактивированных при 1000 С, профильтрованный через бакте­риальный фильтр. Применяется для лечения хронических пиодермий;

- иммуноглобулин человеческий противостафилококковый - гамма-глобу­линовая фракция сыворотки крови, содержащая стафилококковые антитокси­ческие антитела. Применяется с лечебной целью;

- стафилококковый бактериофаг (жидкий) - фильтрат фаголизата стафилококка. Применяют наружно, внутрикожно и внутримышечно для лечения;

- диагностические стафилококковые фаги - набор типоспецифических фагов для фаготипирования стафилококков;

- стафилококковый анатоксин (очищенный адсорбированный) – получают из нативного анатоксина (токсин, обезвреженный формалином) путем осаждения трихлоруксусной кислотой и этанолом, с последующей адсорбцией на гидроксиде алюминия. Применяется для актив­ной иммунизации с целью профилактики и лечения стафилококковых инфекций;



Смотрите также