Нст тест расшифровка
Нст тест что это
НСТ-тест — раздел Медицина, Методы оценки иммунного статуса Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов Тест С Нитросиним Тетразолием (Нст-Тест) Используется Для Выявления Так Назыв.
Оглавление:
Тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) используется для выявления так называемых активированных гранулоцитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относится реакция с нитросиним тетразолием: поглощенный из раствора, он под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.
Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток в крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного с бактериальной инфекцией, чтобы выявить наличие или отсутствие дефекта окислительного метаболизма.
Эта тема принадлежит разделу:
Методы оценки иммунного статуса Учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактического факультетов
Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию. Кафедра клинической иммунологии и аллергологии.
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: НСТ-тест
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
Все темы данного раздела:
Иммунный статус (ИС)– совокупность лабораторных показателей, характеризующих количественную и функциональную активность клеток иммунной системы. Показатели ИС отличаются большим ра
Объекты изучения Методы изучения Фенотипическая характеристика иммунокомпетентных клеток Проточная цитофлуорометрия Имм
В составе клеток иммунной системы истинными иммуноцитами являются все варианты лимфоцитов. Другие типы лейкоцитов (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты), макрофаги, тромбоциты, тучные клетки
Моноциты периферической крови и тканевые макрофаги происходят из полипотентной стволовой клетки. Попав в кровяное русло, моноциты в течение 2-3 суток расселяются в ткани, где они превращаются в тка
кислородзависимые механизмы бактерицидности глюкоза + НАДФ+ → Пентозофосфат + НАДФН Цитохром b245 НАДФ + О2 ͛
Гранулоциты — это полиморфноядерные лейкоциты, циркулирующие в крови и возникающие, как и моноцитарно-макрофагальные клетки, из миелоидной стволовой клетки в костном мозге. Различают три типа грану
При изучении лимфоцитов оценивают их количество в периферической крови и функциональную активность. Определение количества клеток проводят с учетом дифференцировочных антигенов на и
Метод выделения мононуклеаров основан на разной плавучести различных форменных элементов крови. Применение градиента определенной плотности позволяет отделить мононуклеары (лимфоциты, моноциты, бла
В основе метода проточной цитометрии лежит измерение оптических свойств клеток. Клетки по одиночке вводятся в ламинарный поток в проточной кварцевой кювете, где они пересекают сфокусированный свето
Непрямая иммунофлуоресценции – метод, основанный на использовании моноклональных антител, меченных флюорохромом, с оценкой результатов по учету специфического свечения клеток при люминесцентной мик
Иммуноцитохимические методы основаны на использовании таких ферментов, как пероксидаза и щелочная фосфатаза. В настоящее время наиболее часто используются метод ПА (пероксидаза-антипероксидаза), ст
Функциональную активность лимфоцитов оценивают по следующим эффектам: способность к распознаванию антигенов, активации, пролиферации и дифференцировке клеток. Способность лимфоцитов распоз
Контакт лимфоцита с чужеродным антигеном или неспецифическим митогеном сопровождается активацией и реакцией бласттрансформации (РБТЛ), т.е. пролиферацией клетки с переходом малых лимфоцитов в бласт
Совместное культивирование лимфоцитов, имеющих молекулы МНС-II разного гаплотипа, вызывает их бласттрансформацию и пролиферацию. Реагирующие клетки относятся к Т-лимфоцитам и стимулируются чужеродн
Апоптоз– это программируемая, генетически опосредованная форма клеточной гибели, при которой внешние или внутренние сигналы дают импульс клетке к образованию или активации ферменто
В плазме человека присутствует более двухсот белков, большая часть из которых выделена и описана структурно и функционально. Белки плазмы преимущественно представлены гликопротеинами. При электрофо
α1-антитрипсин — это α1-глобулин, на долю которого приходится более 80% антипротеазной активности сыворотки, является основным компонентом α-полосы. В сыворотке соде
Гаптоглобин — период полужизни 2-4 дня. Содержание в сыворотке гаптоглобина в норме 0,3 — 2,0 г/л. Его основное функциональное значение — связывать свободный гемоглобин в сыворотке
Электрофорезшироко используется для полуколичественного определения белков сыворотки крови и для выявления парапротеинов. Электрофорез проводится с сывороткой, а не с плазмой, так
Иммуноглобулины (Ig) – это специфические белки, которые вырабатываются иммунной системой в результате реакции на чужеродные антигены и накапливаются в сыворотке крови и других биологических жидкост
Свойство IgM IgG IgA IgD IgE Молекулярная форма Пентамер
Для количественного определения содержания Ig различных классов в сыворотке крови и других биологических жидкостях широкое применение нашли различные варианты постановки реакции преципитации в геле
Парапротеины — это иммуноглобулины или их фрагменты, вырабатываемые плазматическими клетками, образующимися из одной специфической клеточной линии В-лимфоцитов (моноклон). Парапротеины часто не спо
Криоглобулины — патологические белки плазмы (10-80 мг/мл), обладающие свойством превращения в желеобразное состояние при температуре ниже 37°С. Большинство криоглобулинов — это комплексы поликлонал
Связывание Ig с антигеном представляет собой физиологический процесс, приводящий к образованию иммунных комплексов (ИК), направленный на элиминацию антигена из организма. Однако при определенных ус
По современным представлениям аутоиммунитетом называют такие состояния, при которых в организме появляются антитела или сенсибилизированные лимфоциты против нормальных антигенов собственных тканей.
Антиген Оригинальное название Молекулярная структура Функция Диагностическое значение
При осуществлении типичного теста сыворотку пациента инкубируют с антигенными субстратами (ткань печени или почек животных, культура клеток Нер-2) для осуществления специфического связывания имеющи
Характер свечения Антигенная специфичность Клиническое значение Периферическое или краевое dsDNA, l
Тест-система для ИФА ANA (UBI MAGIWELL) — для скринингового анализа на антиядерные антитела обеспечивает полуколичественное определение широкого спектра антител к сорбированному в лунках комплексуТип патологии Результаты иммунологического исследования. Тип антител и частота их встречаемости (%)
Цитокины — это класс растворимых пептидных медиаторов иммунной системы, необходимых для ее развития, функционирования и взаимодействия с другими системами организма. Они определяют
ИЛ-1- иммунорегуляторный медиатор, выделяемый при воспалительных реакциях, тканевых поражениях и инфекциях (провоспалительный цитокин). ИЛ-1 стимулирует пролиферацию и дифференциро
Интерферон (ИФН) был обнаружен как белок, обладающий противовирусной активностью. Противовирусное действие ИФН обусловлено его способностью препятствовать внутриклеточной репликации вируса на этапе
Фактор некроза опухоли (ФНО) — основной медиатор, вырабатываемый организмом в ответ на грамотрицательные бактерии. Активным веществом грамотрицательных бактерий является ЛПС компонент клеточной сте
Ряд цитокинов, образующихся в ходе развития иммунной реакции, обладают стимулирующим действием на дифференцировку костномозговых предшественников. Такие цитокины получили название колониестимулирую
Трансформирующий фактор роста(ТФРβ) — это семейство родственных пептидов с множественными эффектами на общие процессы регуляции роста и морфогенеза. ТФРβ — основной циток
Определение содержания цитокинов в различных биологических жидкостях имеет большое значение в оценке функциональной активности иммунокомпетентных клеток и регуляции иммунного ответа. В отдельных сл
Система комплемента представляет собой комплекс белков сыворотки крови, способных к самоорганизации и опосредованию реакций гуморального иммунитета и фагоцитоза. В настоящее время известно, что сис
Общая активность (титр) комплемента определяется в реакции гемолиза с использованием эритроцитов барана. Комплемент, содержащийся в исследуемой сыворотке, вызывает гемолиз сенсибилизированных баран
Гемолиз,% К Гемолиз,% К Гемолиз,% К Гемолиз,% К
Для определения компонентов комплемента используются ИФА и турбидиметрический метод, проведение которых описано в инструкциях, прилагаемых к диагностическим тест-системам. В клинической практике на
Компонент комплемента Клинические проявления Дефицит С1 Обычно не вызывает клинически выраженных расстройств, так как ест
Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности. Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонирующих факторов сыворотки (антител, комплемен
Необходимые реактивы и материалы: КН 42 ОРО 44 0, Na 42 ОРО 44 0, NaCI, глюкоза, нитросиний тетразолий, гепарин, метиловый спирт, 1% водный раствор метиленового зеленого (в случае
Миелопероксидаза окисляет ряд субстратов (бензидин, ортофенилепдиамин) в присутствии перекиси водорода, что сопровождается цветной реакцией. Миелопероксидаза — фермент, содержащийся в гранулах фаг
Спонтанное свечение, возникающее при химических реакциях за счет энергии реагирующих веществ, называется хемилюминесценцией (ХЛ). Она присуща всем тканям и клеткам живого организма, пока в них прои
Среди иммунологических методов оценки неспецифических параметров иммунного статуса при большинстве атопических заболеваний наибольшее значение имеет определение количества общего IgE. Однако соглас
У больных аллергией значительная часть IgE связывается различными лейкоцитами через их Fc-рецепторы. Наличие клеток, несущих антитела, указывает на сенсибилизацию их к соответствующему аллергену. Б
В случае IgE-опосредованных аллергических реакций пусковой механизм начинается со связывания аллергена со специфическими молекулами IgE на поверхности базофилов или тучных клеток. Э
Реакция ставится с целью выявления лимфоцитов, сенсибилизированных к предполагаемому аллергену. Сенсибилизированные лимфоциты при взаимодействии со специфическим аллергеном выделяют медиаторы (ФПМЛ
Больной, 23 лет, предъявляет жалобы на рецидивирующие фурункулы, локализующиеся на лице, ногах. Отмечает частые простудные заболевания (до 7-8 раз в год), герпетические высыпания на губах.
Больная Н., 22 лет, обратилась к иммунологу с жалобами на рецидивирующие ОРВИ (до 7 раз в год), часто сопровождающиеся обострением хронического обструктивного бронхита. Проводимая антибактериальная
Больной Т., 27 лет, неоднократно обращался к врачу по поводу рецидивирующих ОРВИ, трахеобронхита, слабости, недомогания. Из анамнеза установлено, что в течение года шесть раз переболел ОРВИ, дважды
Больной К, 45 лет. Дагноз: системная красная волчанка. При иммунологическом исследовании выявлено: Лейкоциты — 5,5 х 109/л Лимфоциты –37%, абс. 2,03 х 109
Ребенок, 5 лет, относится к группе часто и длительно болеющих детей, рецидивы ОРВИ 1 раз в месяц, очаги хронической инфекции (хронический гайморит, аденоидит), увеличение шейных лимфатических узлов
Тесты первого уровня Общее количество лейкоцитов. Лейкоформула Т-лимфоциты В-лимфоциты
Норма Единицы СИ Гемоглобин М Ж 130,0-160,0 120,0-140,0 г/л
СD-маркер Популяция клеток % клеток CD2 Т- и NK-клетки
лимфоциты 4-5 дн.- 3 месяца 4-8 месяцев 1-2 года 2-5 лет старше 5 лет вс
IgМ IgG IgА IgЕ 1,3 – 1,7 г/л 12 – 14 г/л 2,1 – 2,9 г/л
Пищевая панель Ig E Российская расширенная панель Ig E Пищевая панель Ig G Российская универсальная панель Ig E
Авидность — прочность связывания антигена с антителом, которая определяется аффинностью и валентностью антител. Агглютинация — агрегация к
АГ – антиген АОК – антителообразующая клетка АПК – антигенпрезентирующая клетка АТ – антитело ВЛС – выносящий лимфатический сосуд ЗВК – зараженная вирус
HCT тест, (НСТ фагоцитарная активность, тест с нитросиним тетразолием), кровь
HCT-тест оценивает активность фагоцитов — клеток крови, которые способны поглощать чужеродные, в том числе и болезнетворные микроорганизмы. К фагоцитам крови относятся нейтрофилы и моноциты.
В процессе исследования каплю крови помещают на предметное стекло микроскопа, покрытое активирующим агентом. Фагоциты, которые прилипли к стеклу, активируются, вследствие чего из бесцветного или бледно-желтого нитросинего тетразолия образуется голубой формазан. Число НСТ-положительных клеток оценивается под микроскопом.
НСТ тест практически не требует затрат: для исследования необходимо небольшое количество крови. Кроме того, для проведения анализа не требуется специальное оборудование. Однако НСТ тест субъективен, т.к. для оценки его результатов нужен опытный специалист. В связи с этим возможны ложноотрицательные результаты.
Значительное снижение функциональной активности фагоцитов происходит при хронической гранулематозной болезни. Это наследственное хроническое заболевание характеризуется неспособностью фагоцитов уничтожать бактерии. Хроническая гранулематозная болезнь проявляется длительными рецидивирующими (повторяющимися) бактериальными или грибковыми инфекциями, в том числе и опасными для жизни.
Данный анализ позволяет оценить функциональную активность фагоцитов. Анализ помогает диагностировать хроническую гранулематозную болезнь.
Метод
Референсные значения — норма
(HCT тест, (НСТ фагоцитарная активность, тест с нитросиним тетразолием), кровь)
Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!
НСТ-ТЕСТ — СПОНТАННЫЙ И СТИМУЛИРОВАННЫЙ.
Принцип метода основан на способности нейтрофилов поглощать нитросиний тетразолий и восстанавливать его в гранулы нерастворимого диформазана в виде гранул синего цвета. Восстановление НСТ обеспечивается энергией и продуктами окислительно-восстановительных реакций “метаболического взрыва”, сопровождающего процесс фагоцитоза, при котором происходит образование перекиси водорода, супероксидного аниона, синглетного кислорода.
К гепаринизированной крови добавляют НСТ, инкубируют и затем в мазках определяют процент нейтрофилов, содержащих гранулы диформазана. Это спонтанный НСТ, в норме он от 3 до 15%. Для выявления резервов бактерицидной функции нейтрофилов применяют стимулированный НСТ-тест. При этом в лунку еще добавляют стимулятор фагоцитоза (латекс, пирогенал, зимозан и т.д.). В норме стимулированный НСТ-тест на 40-80% выше спонтанного.
Это тест может быть использован для дифференциальной диагностики бактериальных (высокие результаты) и вирусных (нормальные показатели) заболеваний, протекающих с лихорадкой, лейкоцитозом, высокой СОЭ. Однако, следует помнить, что высокие показатели НСТ-теста отмечаются при паразитарных инвазиях, вирусном гепатите, грибковых поражениях легких, туберкулезе. Кроме того, высокие показатели теста наблюдаются при многих небактериальных процесах: инфаркте миокарда, переломах, оперативных вмешательствах, лейкозах, у онкологических больных.
Раствор НСТ Кровь больного (+гепарин)
фиксация, окраска мазка, микроскопия
Гранулы диформазана в ядрах нейтрофилов
ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ КОМПЛЕМЕНТА ПО 50% ГЕМОЛИЗУ
Комплемент (С) — сложный комплекс белков плазмы крови, участвующих в
воспалительной реакции и иммунных процессах:
-усиливают фагоцитоз в качестве опсонинов,-вызывают дегрануляцию гранулоцитов,
-выполняют регуляторную функцию, стимулируют активность различных популяций лимфоцитов и др.
Принцип определения основан на лизисе эритроцитов барана в присутствии гемолитических антител и комплемента. Для этого готовят гемсистему: эритроциты барана + гемолитическая сыворотка (гемолитическую сыворотку получают при иммунизации кролика эритроцитами барана, т.е. это АТ к эритроцитам барана — гемолизины). В отсутствии комплемента лизис эритроцитов не идет. К гемсистеме добавляют сыворотку больного в серийных разведениях. Чем больше концентрация комплемента в крови, тем интенсивнее идет гемолиз
Исследованиями последних лет выявлено, что гораздо большее диагностическое значение имеет определение отдельных компонентов комплемента (С3, С4, С5 и др.). Они определяются методами ИФА, турбидиметрическим (один из видов абсорбционного фотометрического анализа, основанный на измерении интенсивности света, проходящего через суспензию, образованную частицами определяемого вещества в жидкой фазе) и другими.
Комплемент принимает активное участие в защите организма от инфекции и является объективным показателем иммунологической реактивности организма. Любой воспалительный процесс при адекватном ответе сопровождается повышением уровня комплемента разной степени выраженности. Низкое содержание комплемента наблюдается при первичных и вторичных ИД. Дефицит комплемента отмечается при заболеваниях, протекающих с образованием иммунных комплексов (Аг-Ат), что приводит к избыточному потреблению компонентов комплемента (СКВ, острый гломерулонефрит, аутоиммунная гемолитическая анемия, болезни печени, сепсис, ожоги, повреждение тканей и т.д.), а также при наследственных дефицитах компонентов комплемента. Резкое снижение комплемента наблюдается при анафилактических реакциях.
Медицинские справочники
Информация
Содержание
справочника
Лабораторные тесты
Клиническое использование
Функциональная активность фагоцитирующих клеток крови
Определение активности и интенсивности фагоцитоза и НСТ-теста позволяет оценить состояние фагоцитарной системы, возможность участия фагоцитирующих клеток в патогенезе заболевания и определить тактику лечения.
Активность фагоцитоза (ПФ – процент фагоцитоза) – отображает процент фагоцитов, способных к активному захвату частиц.
Интенсивность фагоцитоза (ФЧ – фагоцитарное число) – показывает количество частиц, поглощенное одним фагоцитом.
Оба эти показателя характеризуют поглотительную способность фагоцитирующих клеток крови (нейтрофилов и моноцитов).
НСТ-тест спонтанный – отображает метаболический потенциал покоящихся фагоцитирующих клеток крови.
НСТ-тест стимулированный – таковой же при стимуляции (аналог антигенного раздражения в организме). Разница между этими показателями (которая в норме составляет 1,5 и более раза) указывает на метаболический потенциал фагоцитов и фактически характеризует их переваривающую способность. Соответственно, снижение активности и интенсивности фагоцитоза расценивается как показатель ослабления поглотительной функции фагоцитов, метаболического резерва – как недостаточности их переваривающей функции.
Снижение функциональной активности фагоцитирующих клеток крови наблюдаются при хронических, часто рецидивирующих заболеваниях бактериальной и грибковой этиологии различной локализации, фурункулезе, туберкулезе, хронических заболеваниях лимфоглоточного кольца и дыхательных путей, пиелонефритах, пиогенных инфекциях, атопическом дерматите, бронхиальной астме, ревматизме, ряде онкопролиферативных заболеваний.
В острой фазе заболевания:
– нормальная активность фагоцитоза + нормальная или повышенная интенсивность фагоцитоза + повышенный спонтанный НСТ-тест + нормальный или сниженный стимулированный НСТ-тест не являются признаком существенных нарушений фагоцитарной функции;
– сниженная активность фагоцитоза + повышенная интенсивность фагоцитоза + нормальный или повышенный спонтанный НСТ-тест + сниженный стимулированный НСТ-тест свидетельствуют о нарушениях функции фагоцитов (в этой ситуации они не только неэффективно борются с патогеном, но и способствуют его распространению по организму).
В стадии ремиссии:
– снижение активности фагоцитоза, повышение его интенсивности, снижение метаболического резерва (за счет снижения показателя стимулированного НСТ-теста) свидетельствуют о нарушении фагоцитарной функции как одной из возможных причин развития заболевания.
В отсутствие соответствующей клинической картины (вышеперечисленных заболеваний):
– повышение показателя спонтанного НСТ-теста как с, так и без изменений в стимулированном НСТ-тесте свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса (в случае неустановленного очага воспаления следует заподозрить его бактериальную природу).
Лабораторные критерии дефицита фагоцитоза четко не определены. Снижение активности фагоцитоза до 20% и ниже и/или отсутствие разницы между показателями спонтанного и стимулированного НСТ-теста могут быть признаками врожденного дефицита фагоцитоза. Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста, не превышающие 3%, являются основанием для подозрения на хроническую гранулематозную болезнь. Вторичный иммунодефицит фагоцитоза развивается чаще всего не столько в силу снижения функциональной активности фагоцитирующих клеток, сколько в силу снижения их количества (нейтропения, лейкопения, панцитопения).
Подскажите плз, ребенку месяц-назначили НСТ. что это? какой врач это делает??
Нефрит тубулоинтерстициальный — иммунозависимое воспалительное заболевание почек, характеризующееся интерстициальным воспалением (отложением иммунных комплексов, C1q, С3) и инфильтрацией лимфоцитами, NK, макрофагами, плазматическими клетками и отеком интерстиция. Наиболее часто выявляется у больных СКВ. Практически у 50% больных с люпус-нефритом имеет место данная форма поражения почек. Для лечения рекомендуются стероиды, алкилирующие препараты, циклоспорин.
НСТ-тест — метод оценки состояния окислительно-метаболических антимикробных механизмов фагоцитов. Основан на восстановлении нитросинего тетразолия (HCT) и превращении его в водонерастворимую форму (в частицы формазана) . Интенсивность данного процесса оценивают по спонтанному и стимулированному восстановлению с помощью соответствующих индексов.С этой целью в 2 пробирки вносят взвесь фагоцитирующих клеток и 0.2% раствор HCT В одну из них (№1) добавляют 0.1 мл взвеси опсонированных частиц зимозана (стимулированное восстановление) , а в другую (№2) — 0.1 мл забуференного физраствора (спонтанное восстановление) . Смеси инкубируют при 37°С, а затем при комнатной температуре (по 20 мин) . После этого готовят на предметных стеклах мазки, высушивают их в течение 10 мин, фиксируют метанолом и окрашивают методом Романовского — Гимзы. Далее под микроскопом подсчитывают формазан-положительные клетки (содержащие синие гранулы формазана).
НСТ-тест ставится в двух вариантах: спонтанный и индуцированный. При постановке спонтанного НСТ-теста фагоциты культивируют в присутствии НСТ без предварительной активации клеток, при проведении индуцированного НСТ-теста в среду культивирования добавляют активатор фагоцитарной реакции. Постановка НСТ-теста в двух вариантах позволяет рассчитать функциональный резерв клеток, который представляет собой разницу между числом (интенсивностью) индуцированных диформазанпозитивных клеток и количеством (интенсивностью) спонтанных диформазанпозитивных клеток.
По мнению комитета экспертов ВОЗ, проба с нитросиним тетразолием (НСТ) является признанным показателем бактерицидной функции фагоцитов (1973 г.) . Значения индуцированного НСТ-теста характеризуют активность фагоцитирующих клеток в присутствии антигенного раздражителя и рассматриваются как критерий их готовности к завершенному фагоцитозу.
Спонтанный НСТ-тест позволяет оценить степень активации кислородзависимых механизмов киллинга неактивированных фагоцитов. Он характеризует степень активации внутриклеточных микробоцидных систем. Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, при гнойно-воспалительных процессах, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются.
Намного хуже снижение этого показателя, так как это говорит о недостаточности фагоцитоза.
Нст-тест
Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности.Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонизирующих факторов сыворотки,так и дефектов самих клеток.(нарушения двигательной и метаболической активности врожденного или приобретенного характера).Для определения фагоцитарной активности используют стандартные штаммы непатогенных микроорганизмов (например стафилококки штамма 209,убитые бактериями, или аутофлора больного).Тест с нитросиним тетразолием используется для выявления так называемых активированных гранулацитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относятся НСТ-тест. Поглощенные из раствора НСТ под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.
Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток по крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного, чтобы выявить наличие или отсутствие окислительного метаболизма.
Необходимые реактивы и материалы. КН42ОРО44О, На42ОРО44О,NaCl,глюкоза, НСТ, гепарин, спирт, однопроцентный водный раствор метиленового зеленого, микропипетки, микроскоп.
Приготовление раствораа. Один процент 15м фосфатного буфера с рН 7,2 и 0,6 % раствора натрия хлора.
б. 0,1 % НСТ в изотоническом растворе натрия-хлора. Для получения красителя необходимо длительное перемешивание и подогревание в горячей воде. Растворы а. и б. фильтруют через бумажные фильтры и хранят в холодильнике при температуре 10 с в течение 2-4 недель. Непосредственно перед установкой теста смешивают равное количество растворов а и б, смесь нагревают дос. Кровь из пальца больного берут пипеткой, промытой гепарином. В центрифужной пробирке смешивают 0,1 мл крови и подогретой смеси. Инкубация 25 мин в термостате при 37 с , затем 10 мин при комнатной температуре. Из верхнего слоя клеточного осадка готовят мазки, высушивают на воздухе 3-5 мин, фиксируют СН3-ОН затем окрашивают метиленовым зеленым в течение 10 мин. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией.
Постановка стимулированного нст-теста.
Гипарнизированную кровь инкубируют со стимулятором (двух миллиардная взвесь стафилококка — штамм 209 и др.) в равных количествах. Затем проводят вышеописанный тест.
В клинико-лабораторной практике при постановке теста распространение получил цитохимический учет результатов, основанный на микроскопическом определении процентного содержания нейтрофилов с гранулами формазана в цитоплазме. Обычно анализу подвергаютсегментоядерных нейтрофилов. Показатель индуцированного варианта реакции вычисляют как разницу процентного содержания поглотивших и восстановивших тетразолей клеток после действия фактора стимуляции по сравнению с данными, полученными до стимуляции.
Для количественной оценки активности теста все клетки делят на 4 группы. К нулевой группе относят нейтрофилы без гранул, в первую группу включают клетки с единичными гранулами или в которых площадь окраски занимает от 25 до 30%. Во вторую группу относят нейтрофилы цитоплазма которых на 30-70% занята гранулами формазана (2степ активность), в третью — нейтрофилы до 100% заполненные гранулами. Определяют число клеток, принадлежащих в зависимости от активности ферментов к каждому из типов. Это число умножают на номер типа. Сумма полученных произведений — показатель реакции.
Показатель НСТ-теста = 1а+2б+3с, где а, б, с -количество клеток соответственного типа.
НСТ-тест (Фагоцитарная активность нейтрофилов)
* — скидка 3% при оформлении заказа на сайте
** — забор крови не входит в стоимость анализа
Срок исполнения: 2-3 дня
Исследуемый биоматериал: кровь с гепарином
Метод определения: Хемилюминесцентный
НСТ-тест (нитросиний тетразолий-тест) оценивает активность фагоцитов-клеток крови, способных поглощать чужеродные микроорганизмы. К фагоцитам крови относятся нейтрофилы и моноциты/макрофаги.
Показания: инфекционные заболевания, оценка эффективности терапии, состояние иммунитета.
Подготовка: материал для исследования – венозная кровь, взятая строго натощак, не менее 6-8-и часов после последнего приема пищи.
Результаты:Повышение уровня НСТ-теста характерно для наличия бактериальной или вирусной инфекции. Понижение значений характеризует наличие хронической гранулематозной болезни или недостаточности фагоцитоза, в том числе врожденной. Более полное исследование включает спонтанный и индуцированный НСТ-тест, а также индекс фагоцитоза, позволяющие дифференцировать различные состояния иммунной системы.
* — скидка 3% при оформлении заказа на сайте
** — забор крови не входит в стоимость анализа
Оценка бактерицидной активности нейтрофилов по тесту восстановления нитросинего тетразолия
Забор крови проводится строго натощак (спустя 6-8 часов после последнего приема пищи).
Оценка функции фагоцитарных клеток имеет большое диагностическое значение при инфекционных заболеваниях. Главными фагоцитами, имеющими наибольшее значение в противоинфекционном иммунитете, считаются нейтрофилы, моноциты/макрофаги и незрелые дендритные клетки. Проводятся 2 разновидности теста: спонтанный НСТ-тест и стимулированный НСТ-тест.
- Обследование при инфекционных заболеваниях
- Оценка эффективности терапии
Спонтанный тест с НСТ
Спонтанный тест с НСТ (нитросиний тетразолий) позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro.
В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%.
Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Принцип метода основан на восстановлении поглощённого фагоцитом растворимого красителя НСТ в нерастворимый диформазан под влиянием супероксиданиона (предназначен для внутриклеточного уничтожения инфекционного агента после его поглощения), образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции. Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются. Санация организма от возбудителя сопровождается нормализацией показателя. Резкое снижение свидетельствует о декомпенсации противо-инфекционной защиты и считается прогностически неблагоприятным признаком.
Тест с НСТ играет важную роль в диагностике хронических гранулематозных заболеваний, которые характеризуются наличием дефектов в НАДФ-Н-оксидазном комплексе. Для пациентов с хроническими гранулематозными заболеваниями характерно наличие рецидивирующих инфекций (пневмония, лимфаденит, абсцессы лёгких, печени, кожи), вызываемых Staphylococcus aureus, Klebsiella spp., Candida albicans, Salmonella spp., Escherichia coli, Aspergillus spp., Pseudomonas cepacia, Mycobacterium spp. и Pneumocystis carinii.
Нейтрофилы у пациентов с хроническими гранулематозными заболеваниями имеют нормальную фагоцитарную функцию, но вследствие дефекта в НАДФ-Н-оксидазном комплексе не способны уничтожать микроорганизмы. Наследственные дефекты НАДФ-Н-оксидазного комплекса в большинстве случаев сцеплены с хромосомой X, реже аутосомно-рецессивные.
Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врождённых дефектов фагоцитарной системы, вторичных и первичных иммунодефицитов, ВИЧ-инфекции, злокачественных новообразований, тяжёлых ожогов, травм, стрессов, недостаточности питания, лечения цитостатиками и иммунодепрессантами, воздействия ионизирующего излучения.
Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие бактериального воспаления (продромальный период, период острого проявления инфекции при нормальной активности фагоцитоза), хроническом гранулематозе, лейкоцитозе, усилении антителозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.
Анализ крови — НСТ: норма гематокрита и причины отклонения
Лабораторное исследование крови позволяет оценить не только течение воспалительного процесса, но и состояние организма на момент обследования. Гематокрит в результатах анализа крови очень важный показатель.
НСТ в крови: описание
НСТ – это показатель общего анализа крови, который имеет важное значение для оценки состояния здоровья человека
В общем анализе крови НСТ – это гематокрит. Это условный показатель, который указывает на процентное соотношение эритроцитов в общем объеме крови.
Это показатель правильно называть гематокритное число, но в среде медработников чаще можно услышать «гематокрит».
Чтобы узнать, какую часть от общего объема составляют эритроциты, в лаборатории используют специальное приспособление – гематокрит. По внешнему виду оно напоминает стеклянную пробирку с делениями. Ее устанавливают в центрифугу. После этого форменные элементы оседают и определяют густота крови.
Уровень гематокрита в зависимости от возраста человека имеет различные показатели.
Исследование на гематокритное число может проводиться для общей оценки крови, при подозрении на полиглобулию, полицитемию, а также внутреннее кровотечение.
Особенности подготовки и проведения процедуры
Правильная подготовка к анализу крови на гематокрит – залог достоверного результата
Гематокритное число определяют исходя из результатов общего анализа крови. Подготовка к забору крови из пальца заключается в следующем:
- Нежелательно курить перед исследованием, так как уменьшается спазм периферических сосудов, в результате доступ крови к кончикам пальцев затрудняется, и получить образец затруднительно.
- За сутки до забора крови не следует употреблять жирную пищу и спиртные напитки.
- При использовании каких-либо препаратов, которые влияют на свертываемость крови, необходимо оповестить врача и по возможности не употреблять в день исследования. Это касается нестероидных анальгетиков.
- Анализы не сдают на фоне вирусной инфекции и в течение некоторого времени после выздоровления. Общий анализ крови сдают натощак, однако допускается проведение исследования через 1-2 часа после легкого приема пищи.
- Следует помнить, что на результаты могут влиять внешние факторы: физическая нагрузка, стрессовые ситуации, курение, инвазивные методы диагностики и др. Долгое пребывание на большой высоте увеличивает количество гематокрита.
Для определения гематокритного числа исследуется капиллярная кровь, поэтому забор крови осуществляется из пальца. Иногда для исследования гематокрита и других показателей используют венозную кровь.
Расшифровка: нормальные показатели НСТ
Нормальные показатели НСТ в анализе крови варьируются в зависимости от возраста и пола человека
Гематокритное число может изменяться в течение жизни, так как объем крови увеличивается, соответственно меняется количество форменных элементов.
Рассчитывается гематокрит по следующей формуле: НТС= RBCxMCV, где RBC – общее количество эритроцитов, а MCV – средний объем.
- Самый высокий показатель диагностируется у новорожденных – до 60%.
- К году гематокрит снижается и может составлять всего 38%.
- От года и до 6 лет показатель составляет 32-42%.
- У детей до 9 лет – 33-41%.
- У подростков до 18 лет – 34-48%.
- У женщин в норме гематокритное число находится в пределах 33-47%.
- У мужчин%.
- В период беременности показатель в норме составляет 31-35%, а к третьему триместру увеличивается до 40%.
Гематокритное число – важный показатель для диагностики возможных патологий, однако интерпретацию результатов следует проводить, учитывая все остальные данные.
Отклонения от нормы: повышение показателя
Если уровень гематокрита отклоняется от нормы в большую или меньшую сторону, то это может указывать на различные патологические состояния.
Повышение гематокрита наблюдается в следующих случаях:
- Обезвоживание организма.
- Сильный ожог.
- Перитонит.
- Эритроцитоз.
- Анемия.
- Кишечная инфекция.
- Патологии печени и дыхательной системы.
- Болезни сердца.
- Повышение гематокрита может наблюдаться при использовании кортикостероидов.
При сахарном диабете увеличение глюкозы в крови негативно влияет на сосуды. В результате возникает кислородное голодание и в организме запускаются компенсаторные реакции. На фоне этого меняются показатели крови, в том числе изменяется уровень гематокрита в большую сторону.
При высоком показателе НСТ увеличивается вязкость крови. В результате кровь становится тягучей и медленно течет по сосудам, что повышает риск образования тромбоза.
Пациент может жаловаться на частые головокружения, онемение конечностей, затруднение дыхания, одышку.
Уменьшить уровень НСТ в крови можно несколькими способами: проведением эритроцитафереза, использованием антиагрегантов и антикоагулянтов. Лечение проводится только при повышенном показателе. Чтобы снизить гематокрит, достаточно изменить рацион, пить больше жидкости, отказаться от алкогольных напитков, курения и употреблять в большом количестве продукты, содержащие антиоксиданты.
Снижение гематокрита: причины и признаки
Чаще всего низкий уровень гематокрита свидетельствует о развитии анемии
Снижение уровня гематокрита может свидетельствовать о серьезных нарушениях кроветворной функции
Основные причины понижения гематокрита:
- Анемия.
- Разжижение крови.
- Неполноценное питание.
- Хронические очаги воспаления.
- Разрушение эритроцитов крови.
- Длительное пребывание в лежачем положении.
Снижение НСТ может наблюдаться при гипергидратации, т.е. увеличении объема крови, вследствие почечной недостаточности, отравлении, инфекционного или вирусного заболевания. Гиперпротеинемия также является причиной понижения гематокрита. При некоторых заболеваниях печени, почек и сосудов в результатах анализа наблюдается снижение гематокритного числа.
Признаками понижения гематокрита являются:
Если понижение гематокритной величины связано с анемией, то больному необходимо изменить рацион, чтобы повысить гемоглобин и количество эритроцитов. Важно изменить свой образ жизни, тогда показатели придут в норму.
Больше информации об общем анализе крови можно узнать из видео:
Нст тест инвитро
HCT-тест оценивает активность фагоцитов — клеток крови, которые способны поглощать чужеродные, в том числе и болезнетворные микроорганизмы.
Оглавление:
К фагоцитам крови относятся нейтрофилы и моноциты.
В процессе исследования каплю крови помещают на предметное стекло микроскопа, покрытое активирующим агентом. Фагоциты, которые прилипли к стеклу, активируются, вследствие чего из бесцветного или бледно-желтого нитросинего тетразолия образуется голубой формазан. Число НСТ-положительных клеток оценивается под микроскопом.
НСТ тест практически не требует затрат: для исследования необходимо небольшое количество крови. Кроме того, для проведения анализа не требуется специальное оборудование. Однако НСТ тест субъективен, т.к. для оценки его результатов нужен опытный специалист. В связи с этим возможны ложноотрицательные результаты.Значительное снижение функциональной активности фагоцитов происходит при хронической гранулематозной болезни. Это наследственное хроническое заболевание характеризуется неспособностью фагоцитов уничтожать бактерии. Хроническая гранулематозная болезнь проявляется длительными рецидивирующими (повторяющимися) бактериальными или грибковыми инфекциями, в том числе и опасными для жизни.
Данный анализ позволяет оценить функциональную активность фагоцитов. Анализ помогает диагностировать хроническую гранулематозную болезнь.
Метод
Референсные значения — норма
(HCT тест, (НСТ фагоцитарная активность, тест с нитросиним тетразолием), кровь)
Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!
Источник: http://www.analizmarket.ru/tests/id/48706
Медицинские справочники
Информация
Содержание
справочника
Лабораторные тесты
Клиническое использование
Функциональная активность фагоцитирующих клеток крови
Определение активности и интенсивности фагоцитоза и НСТ-теста позволяет оценить состояние фагоцитарной системы, возможность участия фагоцитирующих клеток в патогенезе заболевания и определить тактику лечения.
Активность фагоцитоза (ПФ – процент фагоцитоза) – отображает процент фагоцитов, способных к активному захвату частиц.
Интенсивность фагоцитоза (ФЧ – фагоцитарное число) – показывает количество частиц, поглощенное одним фагоцитом.
Оба эти показателя характеризуют поглотительную способность фагоцитирующих клеток крови (нейтрофилов и моноцитов).
НСТ-тест спонтанный – отображает метаболический потенциал покоящихся фагоцитирующих клеток крови.
НСТ-тест стимулированный – таковой же при стимуляции (аналог антигенного раздражения в организме). Разница между этими показателями (которая в норме составляет 1,5 и более раза) указывает на метаболический потенциал фагоцитов и фактически характеризует их переваривающую способность. Соответственно, снижение активности и интенсивности фагоцитоза расценивается как показатель ослабления поглотительной функции фагоцитов, метаболического резерва – как недостаточности их переваривающей функции.
Снижение функциональной активности фагоцитирующих клеток крови наблюдаются при хронических, часто рецидивирующих заболеваниях бактериальной и грибковой этиологии различной локализации, фурункулезе, туберкулезе, хронических заболеваниях лимфоглоточного кольца и дыхательных путей, пиелонефритах, пиогенных инфекциях, атопическом дерматите, бронхиальной астме, ревматизме, ряде онкопролиферативных заболеваний.
В острой фазе заболевания:
– нормальная активность фагоцитоза + нормальная или повышенная интенсивность фагоцитоза + повышенный спонтанный НСТ-тест + нормальный или сниженный стимулированный НСТ-тест не являются признаком существенных нарушений фагоцитарной функции;
– сниженная активность фагоцитоза + повышенная интенсивность фагоцитоза + нормальный или повышенный спонтанный НСТ-тест + сниженный стимулированный НСТ-тест свидетельствуют о нарушениях функции фагоцитов (в этой ситуации они не только неэффективно борются с патогеном, но и способствуют его распространению по организму).
В стадии ремиссии:
– снижение активности фагоцитоза, повышение его интенсивности, снижение метаболического резерва (за счет снижения показателя стимулированного НСТ-теста) свидетельствуют о нарушении фагоцитарной функции как одной из возможных причин развития заболевания.
В отсутствие соответствующей клинической картины (вышеперечисленных заболеваний):
– повышение показателя спонтанного НСТ-теста как с, так и без изменений в стимулированном НСТ-тесте свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса (в случае неустановленного очага воспаления следует заподозрить его бактериальную природу).
Лабораторные критерии дефицита фагоцитоза четко не определены. Снижение активности фагоцитоза до 20% и ниже и/или отсутствие разницы между показателями спонтанного и стимулированного НСТ-теста могут быть признаками врожденного дефицита фагоцитоза. Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста, не превышающие 3%, являются основанием для подозрения на хроническую гранулематозную болезнь. Вторичный иммунодефицит фагоцитоза развивается чаще всего не столько в силу снижения функциональной активности фагоцитирующих клеток, сколько в силу снижения их количества (нейтропения, лейкопения, панцитопения).
Источник: http://www.dovidnyk.org/dir/11/52/700.html
НСТ-тест (Фагоцитарная активность нейтрофилов)
* — скидка 3% при оформлении заказа на сайте
** — забор крови не входит в стоимость анализа
Срок исполнения: 2-3 дня
Исследуемый биоматериал: кровь с гепарином
Метод определения: Хемилюминесцентный
НСТ-тест (нитросиний тетразолий-тест) оценивает активность фагоцитов-клеток крови, способных поглощать чужеродные микроорганизмы. К фагоцитам крови относятся нейтрофилы и моноциты/макрофаги.
Показания: инфекционные заболевания, оценка эффективности терапии, состояние иммунитета.
Подготовка: материал для исследования – венозная кровь, взятая строго натощак, не менее 6-8-и часов после последнего приема пищи.
Результаты:Повышение уровня НСТ-теста характерно для наличия бактериальной или вирусной инфекции. Понижение значений характеризует наличие хронической гранулематозной болезни или недостаточности фагоцитоза, в том числе врожденной. Более полное исследование включает спонтанный и индуцированный НСТ-тест, а также индекс фагоцитоза, позволяющие дифференцировать различные состояния иммунной системы.
* — скидка 3% при оформлении заказа на сайте
** — забор крови не входит в стоимость анализа
Источник: http://immunotest.ru/analysis/obschaya-immunologiya-immunologicheskie-pokazateli/nst-test
Спонтанный тест с НСТ
Спонтанный тест с НСТ (нитросиний тетразолий) позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro.
В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%.
Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Принцип метода основан на восстановлении поглощённого фагоцитом растворимого красителя НСТ в нерастворимый диформазан под влиянием супероксиданиона (предназначен для внутриклеточного уничтожения инфекционного агента после его поглощения), образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции. Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются. Санация организма от возбудителя сопровождается нормализацией показателя. Резкое снижение свидетельствует о декомпенсации противо-инфекционной защиты и считается прогностически неблагоприятным признаком.
Тест с НСТ играет важную роль в диагностике хронических гранулематозных заболеваний, которые характеризуются наличием дефектов в НАДФ-Н-оксидазном комплексе. Для пациентов с хроническими гранулематозными заболеваниями характерно наличие рецидивирующих инфекций (пневмония, лимфаденит, абсцессы лёгких, печени, кожи), вызываемых Staphylococcus aureus, Klebsiella spp., Candida albicans, Salmonella spp., Escherichia coli, Aspergillus spp., Pseudomonas cepacia, Mycobacterium spp. и Pneumocystis carinii.
Нейтрофилы у пациентов с хроническими гранулематозными заболеваниями имеют нормальную фагоцитарную функцию, но вследствие дефекта в НАДФ-Н-оксидазном комплексе не способны уничтожать микроорганизмы. Наследственные дефекты НАДФ-Н-оксидазного комплекса в большинстве случаев сцеплены с хромосомой X, реже аутосомно-рецессивные.
Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врождённых дефектов фагоцитарной системы, вторичных и первичных иммунодефицитов, ВИЧ-инфекции, злокачественных новообразований, тяжёлых ожогов, травм, стрессов, недостаточности питания, лечения цитостатиками и иммунодепрессантами, воздействия ионизирующего излучения.
Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие бактериального воспаления (продромальный период, период острого проявления инфекции при нормальной активности фагоцитоза), хроническом гранулематозе, лейкоцитозе, усилении антителозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.
Система менеджмента качества ООО «ИНВИТРО» соответствует требованиям
Все права защищены и охраняются законом. © 2004 г. ООО «ИНВИТРО».
Копирование, тиражирование, а равно иное использование материалов, размещенных на сайте www.invitro.ru возможно только с письменного разрешения Правообладателя.
Лицензия №ЛО537 от 24 января 2018 г.
Все права защищены и охраняются законом. © 2004 г. ООО «ИНВИТРО». Копирование, тиражирование, а равно иное использование материалов, размещенных на сайте www.invitro.ru возможно только с письменного разрешения Правообладателя.
Лицензия №ЛО537 от 24 января 2018 г.Источник: http://www.invitro.ru/for-clients/blank.php
Нст-тест
Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности.Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонизирующих факторов сыворотки,так и дефектов самих клеток.(нарушения двигательной и метаболической активности врожденного или приобретенного характера).Для определения фагоцитарной активности используют стандартные штаммы непатогенных микроорганизмов (например стафилококки штамма 209,убитые бактериями, или аутофлора больного).
Тест с нитросиним тетразолием используется для выявления так называемых активированных гранулацитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относятся НСТ-тест. Поглощенные из раствора НСТ под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.
Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток по крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного, чтобы выявить наличие или отсутствие окислительного метаболизма.
Необходимые реактивы и материалы. КН42ОРО44О, На42ОРО44О,NaCl,глюкоза, НСТ, гепарин, спирт, однопроцентный водный раствор метиленового зеленого, микропипетки, микроскоп.
Приготовление раствораа. Один процент 15м фосфатного буфера с рН 7,2 и 0,6 % раствора натрия хлора.
б. 0,1 % НСТ в изотоническом растворе натрия-хлора. Для получения красителя необходимо длительное перемешивание и подогревание в горячей воде. Растворы а. и б. фильтруют через бумажные фильтры и хранят в холодильнике при температуре 10 с в течение 2-4 недель. Непосредственно перед установкой теста смешивают равное количество растворов а и б, смесь нагревают дос. Кровь из пальца больного берут пипеткой, промытой гепарином. В центрифужной пробирке смешивают 0,1 мл крови и подогретой смеси. Инкубация 25 мин в термостате при 37 с , затем 10 мин при комнатной температуре. Из верхнего слоя клеточного осадка готовят мазки, высушивают на воздухе 3-5 мин, фиксируют СН3-ОН затем окрашивают метиленовым зеленым в течение 10 мин. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией.
Постановка стимулированного нст-теста.
Гипарнизированную кровь инкубируют со стимулятором (двух миллиардная взвесь стафилококка — штамм 209 и др.) в равных количествах. Затем проводят вышеописанный тест.
В клинико-лабораторной практике при постановке теста распространение получил цитохимический учет результатов, основанный на микроскопическом определении процентного содержания нейтрофилов с гранулами формазана в цитоплазме. Обычно анализу подвергаютсегментоядерных нейтрофилов. Показатель индуцированного варианта реакции вычисляют как разницу процентного содержания поглотивших и восстановивших тетразолей клеток после действия фактора стимуляции по сравнению с данными, полученными до стимуляции.
Для количественной оценки активности теста все клетки делят на 4 группы. К нулевой группе относят нейтрофилы без гранул, в первую группу включают клетки с единичными гранулами или в которых площадь окраски занимает от 25 до 30%. Во вторую группу относят нейтрофилы цитоплазма которых на 30-70% занята гранулами формазана (2степ активность), в третью — нейтрофилы до 100% заполненные гранулами. Определяют число клеток, принадлежащих в зависимости от активности ферментов к каждому из типов. Это число умножают на номер типа. Сумма полученных произведений — показатель реакции.
Показатель НСТ-теста = 1а+2б+3с, где а, б, с -количество клеток соответственного типа.
Источник: http://studfiles.net/preview//page:3/
Здравствуйте! мне 28 лет, пол женский пошла к иммунологу, беспокоит хронический дерматит ( как раньше ставили) на ладонях, начали появляться как колики по всему телу с зудом. Так же болят суставы рук (запястье), хронический ларингит (потеря голоса) , часто болит горло
Т-хелперы (CD3+4+),% 65,89
Т-хелперы (CD+3+4) 2021
T-NK-лимф. (CD3+16+56+),% 0,32
T-NK-лимф. (CD3+16+56+) 10.00
B-лимфоциты (CD3-19+),% 14,2
B-лимфоциты (CD3-19+) 436
Общий Ig A 1,2 г/л
Концентрация ЦИК 70
Акт.фагоцитоза нейтрофилов 52,15
Фагоцит.число нейтроф. 4,3
HCT спонтанная, активность (нейтр.) 18,10
HCT индуциров.,активность (нейтр) 81,10
Индекс стимуляц.НСТ -теста (нейтр) 4,5
Акт.фагоцитоза моноцитов 32,10
Фагоцит.число моноцитов 3,5
НСТ спонтанная, активность(мон.) 4,3
НСТ индуциров, активность (мон.) 68,7
Индекс стимуляц.НСТ-теста (мон.) 15,8
Иммунограмма 3 ур.баз
Нейтрофилы (общ.число) 43,5
Т-лимф. (CD3+19-),% 79,51
anti-EBV IgG-EA (ранн.бел) 6,18
anti — HSV (1 и 2 типов) IgM CОМНИТ
anti- EBV IgG-EBNA (яд.бел) 236
anti — EBV IgM-VCA (капс.бел)
Оценка бактерицидной активности нейтрофилов по тесту восстановления нитросинего тетразолия/НСТ (НСТ-тест, способность к фагоцитозу и степень спонтанного кислородного метаболизма)
Оценка бактерицидной активности нейтрофилов по тесту восстановления нитросинего тетразолия/НСТ (НСТ-тест, способность к фагоцитозу и степень спонтанного кислородного метаболизма)
Оценка состояния иммунитета при инфекционных заболеваниях
НСТ-тест — метод, использующийся для оценки состояния клеток, обладающих фагоцитарной активностью.
Фагоцитарная активность лейкоцитов
Фагоцитоз — процесс, при котором клетки лейкоцитарного ряда (нейтрофилы и моноциты) захватывают и переваривают различные чужеродные частицы. При помощи фагоцитоза данные клетки осуществляют защиту организма от различных чужеродных агентов — бактерий, вирусов, патогенных грибов, простейших. Методы изучения активности фагоцитоза позволяют оценить возможности лейкоцитов в захвате и переваривании чужеродных веществ. Для визуализации процесса активизации фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов используется соединение — нитросиний тетразолий (НСТ), который поглощается клетками участвующих в фагоцитозе.
При активации фагоцитирующих клеток крови после добавления к клеткам непатогенных штаммов некоторых бактерий в них происходит активация окислительных реакций и образование активных форм кислорода (супероксид анион-радикал — О-2 , перекись водорода — Н202, гидроксид радикал — ОН-) из молекулярного кислорода при участии фермента NADPH-оксидазы фагоцитов. Именно образовавшиеся активные формы кислорода и формируют биохимическую основу бактерицидного действия при фагоцитозе. Образовавшиеся активные формы кислорода активируют свободнорадикальные реакции, что приводит к разрушению мембран поглощенных чужеродных бактериальных клеток. Состояние, при котором увеличивается поглощение фагоцитирующими клетками кислорода в период активации и увеличение активных форм кислорода называется «респираторным взрывом».
HCT-тест (нитросиний тетразолий)
Добавленный нитросиний тетразолий после активации окислительных реакций интенсивнее превращается в активированных клетках в нерастворимое соединение темно-синего цвета формазан, который можно увидеть под микроскопом и оценить, таким образом, количество активированных нейтрофилов и моноцитов. Индуцированную активность рассчитывают как разницу между количеством нейтрофилов поглотивших НСТ и трансформировавших его в формазан до стимуляции (перед добавлением непатогенных бактерий) и количеством нейтрофилов после стимуляции фагоцитоза (после добавления). Повышение фагоцитарной активности происходит при инфицировании бактериями, аллергии, аутоиммунных заболеваниях. Снижение уровня активности обычно регистрируется при наличии хронических инфекций и врожденных нарушения системы фагоцитоза (мутация субъединиц NADPН-оксидазы и развитие хронической гранулематозной болезни).
Основные показания для назначения
Оценка иммунитета при инфекционных заболеваниях.
НСТ-тест
Скачать пример результатов (PDF) Внимание! В связи с новогодними праздниками, в период с 28.12.2018 по 08.01.2019 биоматериал не принимаем в работу. Прием биоматериала: вс, пн, вт, ср. НСТ-тест характеризует бактерицидную активность фагоцитов, т.е. способность уничтожать микробные клетки. Одна из функции гранулоцитов это фагоцитарной активности. Снижение фагоцитарной активности может быть результатом как недостаточности опсонизирующих факторов сыворотки,так и дефектов самих клеток.(нарушения двигательной и метаболической активности врожденного или приобретенного характера). Тест с нитросиним тетразолием используется для выявления так называемых активированных гранулацитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относятся НСТ-тест. Поглощенные из раствора НСТ под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.Спонтанный и индуцированный НСТ-тест
Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток по крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного, чтобы выявить наличие или отсутствие окислительного метаболизма.Показания
- Диагностика хронической гранулематозной болезни
- Оценка функциональной активности фагоцитов крови
Накануне проведения исследования необходимо исключить эмоциональные и физические нагрузки, спортивные тренировки, курение.