Главная » Статьи » Непрямая проба кумбса

Непрямая проба кумбса


Непрямая проба Кумбса

Непрямая проба Кумбса — непрямой антиглобулиновый тест. Он позволяет выявить атипичные антитела в плазме больных, в том числе аллоантитела, к чужим антигенам эритроцитов. Исследование выполняется когда прямая проба Кумбса оказалась отрицательной и антитела не были обнаружены. Непрямой антиглобулиновый тест определяет анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с и анти-е антитела к антигенам эритроцитов в плазме. Исследование протекает в 2 этапа, поэтому и имеет название «непрямая проба». На пером этапе антитела в сыворотке больного,которые не связаны с эритроцитами, фиксируют на эритроцитах здорового человека. Вторым этапом отмытые эритроциты донора группы 0(I) инкубируют с исследуемой сывороткой. Если в сыворотке присутствуют антитела, то они связываются с эритроцитами. Далее эти эритроциты обрабатывают антиглобулиновой сывороткой, которая содержит антитела против антител, т.е. фактически проводят прямую реакцию Кумбса. При появлении агглютинации проба расценивается как положительная непрямая проба Кумбса.  Положительный результат непрямой пробы Кумбса свидетельствует о возможных трудностях при подборе крови для переливания и проведении перекрёстной пробы на совместимость с консервированной кровью.

Показания:

  • установление иммунной природы гемолитической анемии;
  • обследования перед предполагающимися гемотрансфузиями.
Подготовка Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 8–10 часов после последнего приема пищи. Накануне сдачи исследования нужно избегать физических нагрузок и стрессовых состояний.

Препараты, которые могут повлиять на результат пробы: хинидин, метилдофа, цефалоспорины, сульфаниламиды, хлорпромазин, дифенилгидантоин, этосуксимид, гидралазин, леводопа, мефенаминовая кислота, мелфалан, пенициллин, прокаинамид, рифампин, стрептомицин, тетрациклины, изониазид.

Интерпретация результатов

В норме непрямая проба Кумбса отрицательная, что свидетельствует об отсутствии на поверхности эритроцитов антител и комплемента.

Проба Кумбса: прямая и непрямая :

Проба Кумбса является методом лабораторного исследования, сделанного путем воздействия на гемагглютинацию. В ее основании лежит восприимчивость антител к иммуноглобулинам и элементам фермента, а также их способность агглютинировать эритроциты, покрытые C3 либо Lg.

Прямая диагностика Кумбса

Используется для обнаружения антител или составляющих комплемента, установленных с наружной части клеток. Прямая проба Кумбса выполняется следующими действиями.

  1. Для приобретения антитоксинов животное вакцинируют человеческим амбоцептором. Полученную от живности сыворотку освобождают от антител и добавляют к остальным белкам.
  2. Эритроциты пациента обрабатывают физиологическим средством для полного устранения амбоцептора, который уничтожает антитела к ферменту и иммуноглобулинам. Он также может быть фактором ложноотрицательного последствия.
  3. Если на поверхности клеток находятся составляющие комплемента или антитела, тогда добавление антикомплементарной либо антиглобулиновой сыворотки может привести к их агглютинации.

Применение такой пробы

Прямую диагностику Кумбса используют в определенных случаях, таких, как:

  • трансфузионные воздействия;
  • гемолитическое недомогание новорожденных;
  • аутоиммунный гемолиз;
  • медикаментозная гемолитическая анемия.

Непрямая проба Кумбса

Данная диагностика дает возможность выявить антитела к клеткам в сыворотке, которую инкубируют, как правило, с донорскими эритроцитами типа 0, а потом осуществляют прямую пробу. Применяют непрямую диагностику Кумбса в следующих случаях:

  • обнаружения наружных клеточных антигенов в судебной медицине и лечебной генетике;
  • определения отдельной совместимости крови реципиента и донора;
  • доказательства однояйцовости близнецов при пересадке костного мозга;
  • выявления алло- и антител, побуждающих гемолитические трансфузионные реакции.

Как готовиться к анализу

Существуют некоторые правила подготовки к обследованию.

  1. Если пациент является новорожденным, родителям нужно знать, что исследование будет способствовать диагностированию ГЗН (гемолитическому заболеванию новорожденных).
  2. В случае если у больного есть подозрения гемолитического малокровия, ему должны объяснить, что анализ позволит узнать, вызвано ли оно защитными расстройствами, приемами лекарств либо другими факторами.
  3. Проба Кумбса прямая и непрямая не делает никаких ограничений в режиме питания или диете.
  4. Необходимо уведомить пациента, что для обследования потребуется взять кровь из вены, а также сказать ему, когда именно будет производиться венепункция.
  5. Еще следует предупредить о вероятности неприятных ощущений в период наложения повязки на руку и самой процедуры.
  6. Препараты, которые способны подействовать на результат образца, нужно отменить.

К таким лекарствам относятся:

  • «Стрептомицин»;
  • «Метилдофа»;
  • «Прокаинамид»;
  • сульфаниламиды;
  • «Мелфалан»;
  • «Хинидин»;
  • «Рифампин»;
  • «Изониазид»;
  • цефалоспорины;
  • «Гидралазин»;
  • «Хлорпромазин»;
  • «Леводопа»;
  • «Тетрациклин»;
  • «Дифенилгидантоин»;
  • «Этосуксимид»;
  • «Пенициллин»;
  • мефенаминовая кислота.

Забор крови совершают с утра натощак.

Как проводится мероприятие

Проба Кумбса осуществляется в таком порядке:

  1. При выполнении диагностики у взрослого больного после венепункции берут кровь в трубочки с ЭДТА (этилендиаминтетраацетатом).
  2. У новорожденного производят забор крови из пуповины в мензурку с ЭДТА.
  3. Зону прокола прижимают ватным тампоном до прекращения кровотечения.
  4. При появлении синяка в месте венепункции прописывают согревающие компрессы.
  5. После набора крови пациенту разрешается вернуться к приему отменных препаратов.
  6. Необходимо сообщить родителям новорожденного, что для наблюдения за динамикой анемии может потребоваться вторичный анализ.

Преимущества пробы Кумбса

Такое исследование имеет некоторые превосходства, а именно:

  • высокую чувствительность;
  • заметно доминирующую допускающую способность альтернативных способов обследования, которые применяются для обнаружения неагглютинирующих антител.

Минусы анализа

Проба Кумбса положительная является достаточно трудоемким методом осмотра, предполагающим характерную точность выполнения. При ее использовании можно столкнуться с определенными трудностями, связанными в особенности с интерпретацией слабоположительных воздействий.

Установлено, что ошибочные отрицательные либо слабоположительные реакции при производстве проб Кумбса могут стать последствиями неудовлетворительно активной отмывки клеток, ослабления антиглобулинового реагента остатками сыворотки, а также соединения с необезжиренной наружностью, на которой может закрепляться антиглобулин, утрачивая при этом свою действенность.

Проба Кумбса отличается еще одним недостатком – малостойкостью антиглобулинового реагента, приобретение и сохранение которого имеют индивидуальные особенности, что аналогично делает сложной численную оценку воздействия антиглобулиновой сыворотки на гемагглютинацию.

Болезни, которые можно обнаружить при исследовании

Диагностика Кумбса дает возможность обнаружить некоторые виды заболеваний, такие, как:

  • гемолитическое недомогание новорожденных;
  • различные трансфузионные реакции;
  • аутоиммунный гемолиз;
  • лекарственное гемолитическое малокровие.

На сегодняшний день проба Кумбса считается довольно популярной системой исследования крови как у взрослого человека, так и у новорожденного. Она дает возможность выявить множество различных болезней.

Непрямая проба Кумбса

Ключевые слова: аутоиммунная гемолитическая анемия   гемолиз   анемия   гематрансфузия   непрямой антиглобулиновый тест   донор   реципиент   кровь  

|

Общие сведения

Непрямая проба Кумбса - положительная реакция определяет антитела, которые находятся в свободном виде в плазме крови больных аутоиммунными гемолитическими анемиями, и не были выявлены при проведении прямой пробы Кумбса (которая определяет фиксированные антитела на эритроцитах). Для обнаружения этих антител проводится их фиксация на поверхности эритроцитов донора при переливании крови. Основные показания к назначению: диагностика анемий, подбор крови для переливания. Непрямая проба Кумбса, называемая также непрямым антиглобулиновым (против антител) тестом, представляет собой реакцию агглютинации для выявления антиэритроцитарных антител (антитела - анти-D, С, Е, с и е) в сыворотке не связанных с эритроцитами (в отличие от прямой пробы Кумбса). Для этого антитела, находящиеся в несвязанном виде с эритроцитами в сыворотке больного сначала фиксируют на эритроцитах здорового человека. После этого этапа отмытые эритроциты донора группы 0(I) раствором хлорида натрия инкубируют с исследуемой сывороткой. Если в сыворотке присутствуют антитела, то они связываются с эритроцитами. Далее эти эритроциты обрабатывают антиглобулиновой сывороткой (сыворотка, содержащая антитела против антител, т.е. фактически проводят прямую реакцию Кумбса. При появлении агглютинации проба расценивается как положительная непрямая проба Кумбса. Непрямая проба Кумбса позволяет выявить 95-99% циркулирующих в крови антител. После выявления антител постановкой более специфических реакций уточняют их природу.

|

Подготовка к диагностике

1. Следует объяснить пациенту, что проба необходима для выяснения возможности гемотрансфузионной реакции при переливании крови, а будущей матери - для выявления у нее антител к антигенам плода, что важно для своевременной профилактической терапии. 2. Если пробу выполняют у пациента с анемией, следует объяснить ему, что она позволит установить тип анемии. 3. Каких-либо ограничений в диете и режиме питания не требуется. 4. Следует предупредить пациента, что для проведения пробы потребуется взятие крови из вены, и сообщить, кто и когда будет делать венепункцию. 5. Следует предупредить о возможности неприятных ощущений во время наложения жгута на руку и венепункции. 6. Следует выяснить, не проводились ли пациенту, недавно гемотрансфузии и не вводился ли ему внутривенно раствор декстрана или контрастного вещества.

|

Процедуры

1. После венепункции набирают кровь в пробирку с ЭДТА. Если непрямая проба оказывается положительной, исследование крови продолжают с целью идентификации антител. 2. Место венепункции придавливают ватным шариком до остановки кровотечения. 3. При образовании гематомы вместе пункции назначают согревающие компрессы.

|

Референтные значения

В норме добавление сыворотки Кумбса к эритроцитам агглютинации не вызывает, так как в сыворотке исследуемого, других антител, кроме анти-А и анти-В, не содержится.

|

Факторы, влияющие на результат исследования

1. Внутривенное введение незадолго до исследования контрастного вещества или раствора декстрана вызывает агрегацию эритроцитов, напоминающую агглютинацию. 2. Гемолиз, обусловленный неосторожным обращением с пробами крови. Гемотрансфузии или беременность давностью не более 3мес (возможность сохранения в крови антител). 3. Интерференция Ацетаминофен, p-салициловая кислота, аминопирин, антигистаминные препараты, карбромал, цефалоспорины, хлорированные углеводные инсектициды, хлорпромазин, хлорпропрамид, цисплатин, клонидин, дипирон, этосуксимид, фенфлюрамин, фуадин, гидралазин, гидрохлортиазид, ибупрофен, инсулин, изониазид, леводофа, мефенаминовая кислота, мелфалан, метадон, метилдофа, метилсергид, номифензин, пеницилламин, пенициллины, фенацетин, фенилбутазон, пробенецид, прокаинамид, хинидин, хинин, рифампин, стрептомицин, сульфонамиды, производные сульфонилмочевины, тетрациклин, триамтерен, тримеллитиновый ангидрид.

|

Цель исследования

1. Выявление неполных антител к эритроцитарным антигенам реципиента и донора перед проведением гемотрансфузии. 2. Выявление анти-D-антител в крови матери. 3. Выяснение необходимости введения Rhо(D)-иммуноглобулина. 4. Диагностика приобретенной гемолитической анемии.

|

Отклонения от нормы

Положительный результат пробы указывает на наличие в сыворотке крови пациента антител к эритроцитам и, следовательно, на несовместимость донорской крови и крови пациента. Положительный результат пробы у беременной с резус-отрицательной кровью свидетельствует о присутствии у нее в крови антител, к резус-фактору в результате ранее выполненной трансфузии несовместимой крови или предшествующей беременности резус-положительным плодом. Положительный результат пробы свидетельствует о возможности развития у ребенка гемолитической болезни новорожденых. Поэтому необходимо многократное выполнение пробы, чтобы выяснить, не происходит ли нарастание титра циркулирующих в крови будущей матери антител.

Непрямая реакция Кумбса

Back to top

Опубликовано 30 июня 2018 пользователем israilov.n

Описание

Непрямая проба Кумбса или непрямой антиглобулиновый тест (НАТ) необходим для определения антител к эритроцитам, содержащимся в сыворотке крови.

До настоящего времени проба Кумбса широко применяется в лабораторной практике для диагностики иммунопатологических состояний, в частности при аутоиммунных гемолитических анемиях, характеризующихся деструкцией эритроцитов вследствие связывания клеточной мембраны с антителами и (или) компонентами системы комплемента. С его помощью выявляют присутствие на эритроцитарной мембране IgG (обычно IgG1 и IgG3), которые могут активировать комплемент, а иногда и комплемента (С3d). Однако в остром периоде заболевания в связи с разрушением эритроцитов, на которых фиксировалось большое количество антител, при гемолитическом кризе, а также при недостаточном количестве антител при хроническом течении болезни может отмечаться отрицательная прямая проба Кумбса.

Непрямая проба Кумбса остается наилучшим методом индивидуального подбора трансфузионных сред, так как позволяет наиболее точно установить индивидуальную совместимость донора и реципиента по эритроцитарным антигенам.

Дополнительное выполнение прямого антиглобулинового теста на наличие аутоантител рекомендуется при обследовании всех реципиентов органов и тканей в предтрансплантационном периоде и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток также и после трансплантации. Кроме иммуногематологии и трансфузиологии антиглобулиновые пробы широко применяются при диагностике целого ряда патологических состояний: при гематологических заболеваниях, включая лимфопролиферативные, при системных заболеваниях соединительной ткани, болезни Шегрена, хроническом активном гепатите и др.

Активно используются пробы Кумбса в медицинской генетике и судебной медицине для определения поверхностных эритроцитарных антигенов.

Показания 

– для более точного установления резус-принадлежности (антиген D) при нечетких результатах определения резус-фактора другими методами (полиглюкиновый, желатиновый и др.); – для выявления слабых эритроцитарных антигенов (системы Келл, Даффи, Кидд, Льюис и др.) и антител к этим антигенам; – для обнаружения и идентификации аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела, вызывающие гемолитические посттрансфузионные реакции; – для определения наличия иммунных антител системы АВ0 при трансфузионных гемолитических осложнениях;

– в качестве пробы на совместимость при индивидуальном подборе переливаемой крови и ее компонентов.

Интерпртация В норме реакция Кумбса отрицательная.

Положительный непрямой антиглобулиновый тест при отрицательной прямой пробе обычно указывает на присутствие в исследуемой сыворотке аллоантител в свободном состоянии, связанное с предшествующими переливаниями крови или беременностями. Проба Кумбса часто бывает положительной при обострении пароксизмальной ночной гемоглобинурии; позитивная проба Кумбса с анти-С3 и анти-С3dg является маркером холодовой агглютининовой болезни.

Положительные результаты прямого и непрямого антиглобулиновых тестов не являются абсолютным доказательством наличия антител, поскольку положительные реакции могут наблюдаться и при различных патологических состояниях, не связанных с изосенсибилизацией или аутосенсибилизацией организма. 

Поэтому только сопоставление результатов нескольких иммуносерологических методов с клинической картиной заболевания позволяет в полной мере судить о развивающемся патологическом процессе.

Показания Интерпретация результатовИнтерпретация результатов: 

Смотрите также