Диагностическая лаборатория в Уфе
Среда для шигелл и сальмонелл
Агар Сальмонелла-Шигелла
| SS Agar Агар Сальмонелла-Шигелла | M108 |
| Salmonella Shigella AgarАгар Сальмонелла-Шигелла | M108D |
| Salmonella Shigella Agar ModifiedАгар Сальмонелла-Шигелла модифицированный | M1032 |
Эти дифференциально-селективные среды используют для выделения сальмонелл и некоторых шигелл из патологического материала, подозрительных пищевых материалов и т.п.
| Рост на среде SS Agar (M108): Escherichia coli (красные колонии), Salmonella серовара Enteritidis (бесцветные колонии с черным центром) и Shigella flexneri (бесцветные колонии) |
Состав**:
| Ингредиенты | М108 грамм/литр | М108D грамм/литр | М1032 грамм/литр |
| Пептический перевар животной ткани | 5,00 | – | 5,00 |
| Протеозопептон | – | 5,00 | – |
| Мясной экстракт | 5,00 | 5,00 | 5,00 |
| Лактоза | 10,00 | 10,00 | 10,00 |
| Желчные кислоты, смесь | 8,50 | 8,50 | 5,50 |
| Натрия цитрат | 10,00 | 8,50 | 10,00 |
| Натрия тиосульфат | 8,50 | 8,50 | 8,50 |
| Железа цитрат | 1,00 | 1,00 | 1,00 |
| Бриллиантовый зеленый | 0,00033 | 0,00033 | 0,00033 |
| Нейтральный красный | 0,025 | 0,025 | 0,025 |
| Агар-агар | 15,00 | 13,50 | 12,00 |
| Конечное значение рН (при 25°С) | 7,0 ± 0,2 | 7,0 ± 0,2 | 7,2 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 63,0 г порошка М108 или 60,0 г порошка М108D или 57,0 г порошка М1032 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить с частым помешиванием для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ И НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Перегревание снижает селективные свойства среды. Остудить примерно до 50°С, перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.
Принцип и оценка результата:
Эти среды рекомендуют в качестве дифференциально-селективных для выделения сальмонелл и некоторых шигелл из патологического материала (1), подозрительных пищевых материалов и т.п. (2, 3, 4, 5), а также для теста на присутствие микроорганизмов (6). Агар Сальмонелла-Шигелла модифицированный (М1032) особенно рекомендуется для выделения шигелл, поскольку их рост значительно меньше подавляется на этой среде. Такие изменения, как сниженное количество желчных солей, слегка повышенное значение рН, способствуют выделению шигелл, не влияя на рост комменсалов.
Пептический перевар животной ткани, протеозопептон и мясной экстракт обеспечивают присутствие в среде необходимых питательных веществ. Лактоза является ферментируемым субстратом. Желчные кислоты, тиосульфат и бриллиантовый зеленый подавляют рост грамположительных и колиформных микроорганизмов. Некоторые кишечные микроорганизмы восстанавливают тиосульфат натрия до сульфита и газообразного сероводорода (обладают тиосульфатредуктазной активностью). Продукцию сероводорода определяют по образованию черного преципитата сульфида железа (после взаимодействия сульфита с цитратом железа), в результате чего такие микроорганизмы образуют на данной среде колонии с черным центром.
Высокая селективность среды позволяет прямо засевать их большим объемом инокулюма (фекалиями, ректальными тампонами и другим материалом, подозрительным на содержание патогенных кишечных бактерий). При росте немногих ферментирующих лактозу представителей нормальной кишечной микрофлоры образуются кислые продукты, изменяющие цвет индикатора нейтрального красного с желтого на красный, поэтому их колонии окрашиваются в красный цвет. Колонии не ферментирующих лактозу микроорганизмов бесцветны, прозрачны с черным центром или без него. Рост сальмонелл на данной среде не подавляется: они образуют бесцветные колонии с черным центров (продукция сероводорода). Шигеллы также растут в виде бесцветных колоний, но без черного центра, т.к. не продуцируют сероводород.
Наряду с агаром Сальмонелла-Шигелла для более легкого выделения шигелл (7) рекомендуется одновременно засевать менее селективные среды: Агар «Гектоен энтерик» (М467) или Дезоксихолат-цитратный агар (М065).
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий розоватый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М108) или 1,35%-ному агаровому гелю (М108D) или 1,2%-ному агаровому гелю (М1032).
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет красновато-оранжевую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, когда в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водные растворы М108 (6,3% вес/об) или М108D (6,0% вес/об) имеют рН 7,0 ± 0,2, а раствор М1032 (5,7% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
| Штаммы микроорганизмов (АТСС) | Рост | Цвет колоний |
| Salmonella typhimurium (14028) | Хороший | Бесцветные с черным центром |
| Salmonella typhi (6539) | Хороший | Бесцветные с черным центром |
| Salmonella enteritidis (13076) | Хороший | Бесцветные с черным центром |
| Shigella flexneri (12022) | Хороший | Бесцветные |
| Escherichia coli (25922) | Слабый или хороший | Розовые с преципитатом желчи |
| Enterobacteraerogenes(13048) | Слабый или хороший | Кремово-розовые |
| Proteusmirabilis(25933) | Слабый или хороший | Бесцветные, иногда с черным центром |
| Enterococcusfaecalis (29212) | Слабый или отсутствует | Бесцветные |
Ссылки:
1. Lennette and others (Eds.), 1985, Manual of Clinical Microbiology, 4th ed., ASM, Washington, D.C. 2. Vanderzant C. and Splittstoesser D. (Eds.), 1992, Compendium of Methods for Microbiological Examination of Food, 3rd ed., APHA, Washington, D.C. 3. Marshall R. (Ed.), 1992, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 16th ed., APHA, Washington, D.C. 4. Greenberg A. E., Clesceri L. S. and Eaton A. D. (Eds.), 1992, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 18th ed., APHA, Washington, D.C. 5. Official Methods of Analysis, 1995, 16th ed., AOAC, AOAC International, U.S.A. 6. U.S. Pharmacopeia / National Formulary, 2002, USP 25 / NF 20, Asian Edition, U.S. Pharmacopeial Convention, Rockville, MD.
7. MacFaddin J., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
Агар Сальмонелла-Шигелла
Назначение
Плотная селективная среда для выделения сальмонелл и шигелл из различных клинических образцов, еды и т.д.
Описание
Агар SS - селективный агар для выделения сальмонелл и шигелл от загрязненных образцов.
Селективность обеспечена высокой концентрацией солей желчных кислот и бриллиантового зеленого, которые подавляют рост грамположительных бактерий. Что касается грамнегативной флоры, ее рост подавляется солями лимонной кислоты и тиосульфата. Однако, некоторые колиформные микроорганизмы все же могут расти на этой среде. В этом случае отличить патоген энтеробактерии от Условных патогенных можно по цвету выросших колоний. Окрашивание колоний обусловлено наличием или отсутствием у микроорганизмов фермента, утилизировать лактозу. Так, на данной среде лактозопозитивные микроорганизмы растут в виде разовых колоний, при этом цвет среды изменяется на красный, а лектонегативные растут в виде бесцветных колоний, меняя среды на желтый. Если микроорганизмы продуцируют h3S, то выросшие колонии приобретают черный цвет. Пептон и Мясной экстракт обычно стимулируют рост большинства патогенных энтеробактерий, однако некоторые Шигеллы очень разборчивы и растут плохо.
Приготовление
Развести 60,1 г порошка в 1 л дистиллированной воды. Довести до кипения, помешивая до полного растворения. Не автоклавировать. Остудить до 50ºС, хорошо перемешать и разлить в стерильные чашки Петри. Повторно не нагревать.
Техника посева
Если есть подозрения, что жизнеспособность микроорганизмов в исследуемом образце может быть снижена (пищевые продукты, подвергавшиеся технологической обработке, образцы кала пациентов, получающих антибиотики, и т.п.), рекомендуется предварительно провести обогащение с использованием основы Селенитового бульона с цистином (Артикул 02-602) или основы тетратионатного бульона (Артикул 02-033/Артикул 02-335). После обогащения проводят густой посев на чашки с SS-агаром и далее действуют как при посеве образцов на менее селективные среды, такие как агар с бриллиантовым зеленым (Артикул 01-203) или агар Мак-Конки (Артикул 01-118).
Чашки инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 37°C. Колонии предположительно патогенных микроорганизмов пересевают на дифференциальные среды для идентификации биохимическими или серологическими методами.
Колонии на SS-агаре вырастают после 24 ч инкубирования.
Характеристика колоний на SS Агар:
Schigella – бесцветные, прозрачные, плоские колонии;
Salmonella (непродуцирующие сероводород) - бесцветные, прозрачные, плоские колонии;
Salmonella (продуцирующие сероводород) – черные или с черным центром плоские колонии с прозрачными краями;
Proteus – похожи на колонии сальмонелл, но меньшим размером;
E.coli – если они растут, то растут в виде маленьких выпуклых розовых или красных колоний;
Колиформные (в целом)– большие, матовые, круглые и окрашенные в цвета от белого до розового.
Хранение
Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности 0.50
Бесцветные колонии с черным центром (h3S+)
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Продуктивность > 0.50
Бесцветные колонии с черным центром (h3S+)
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Продуктивность > 0.50
Бесцветные колонии с черным центром (h3S+)
Shigella flexneri ATCC 12022
Продуктивность > 0.50
Бесцветные колонии с прозрачным центром (h3S-)
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076
Информация для заказа:
| Артикул | Упаковка |
| 01-555BA05 | 5 саше |
| 01-555-025 | 25 кг |
| 01-555-500 | 500 г |
2.3 Методика определения сальмонелл (Salmonella)
Навеску продукта массой 25 г от объединенной пробы, тщательно измельченной стерильными ножницами, вносят во флакон Сокслета, содержащий 100см3 среды обогащения (Мюллера, Кауфмана, хлористо-магниевой) или 225 см3 селенитового бульона. Содержимое перемешивают встряхиванием и помещают в термостат при 37 °С. Через 16—24 ч содержимое флакона тщательно перемешивают бактериологической петлей (диаметр 0,4—0,5 мм) или пастеровской пипеткой и проводят посев из среды обогащения в чашки Петри с предварительно подсушенной средой Эндо, БФА, Плоскирева, Левина или висмут-сульфит-агар (по выбору). При значительном помутнении следует использовать среду Плоскирева.
Посевы помещают в термостат при 37 °С на 16—24 ч. На среде Эндо бактерии из рода сальмонелл образуют бесцветные или с розовым оттенком колонии.
На среде БФА сальмонеллы растут в виде крупных, гладких, красноватого оттенка прозрачных колоний (колонии Staphylococcus typhi suis как и на среде Эндо, мелкие). Колонии БГКП желто-зеленого цвета. Бактерии группы протея дают рост через 72 ч.
На среде Плоскирева колонии сальмонелл бесцветные, но более плотные и несколько меньшего размера, чем на среде Эндо; при обильном росте среда желтеет.
На среде Левина сальмонеллы растут в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.
На висмут-сульфитном агаре сальмонеллы образуют черные или коричневые колонии с металлическим блеском, участок среды под колонией чернеет. Исключение составляют некоторые серологические типы из группы С, растущие на этой среде в виде нежных светло-зеленых или крупных серовато-зеленых колоний.
Изолированные колонии (не менее 5), характерные для бактерий из рода сальмонелл, пересевают на трехсахарный агар Крумвиде—Олькеницкого в модификации Ковальчука штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик и инкубируют при 37 ± 1 °С в течение 12—16 ч.
При росте сальмонелл цвет скошенной поверхности среды Крумвиде — Олькеницкого в модификации Ковальчука розовый, столбик желто-бурый. Газообразование устанавливают по наличию трещин и разрыву столбика агара, образующие сероводород виды вызывают потемнение столбика.
Другие грамотрицательные бактерии семейства энтеробактерий дают следующие изменения цвета трехсахарного агара:
БГКП — равномерное окрашивание в синий или сине-зеленый цвет с образованием газа или без него;
бактерии из группы протея — окрашивание в ярко-красный цвет, в случаях выделения Н2S может образоваться черный осадок;
шигеллы и возбудители брюшного тифа окрашивают скошенную поверхность в розовый цвет, столбик — в синий или сине-зеленый.
Вместо среды Крумвиде—Олькеницкого в модификации Ковальчука допускается посев: на углеводные среды короткого пестрого ряда с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом и мальтозой; полужидкий агар уколом (для определения подвижности); бульон Хоттингера для определения образования индола и сероводорода. При использовании полужидких сред с углеводами и индикатором ВР одновременно с ферментативной активностью можно определить подвижность бактерий.
Для дальнейшей идентификации бактерий готовят мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют и изучают антигенные свойства путем постановки пробной агглютинации на предметном стекле с агглютинирующей адсорбированной поливалентной сальмонеллезной О - сывороткой. При получении положительной реакции на стекле с поливалентной сывороткой проводят идентификацию с помощью монорецепторных агглютинирующих О-сывороток. Установив серологическую группу исследуемых бактерий, с помощью Н-сывороток определяют тип (вид) бактерий.
Обнаружение подвижных (кроме Salmonella pullorum и Salmonella gallinarum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элективных средах, неферментирующих лактозу и сахарозу, сбраживающих глюкозу и маннит до кислоты и газа (Salmonella typhi suis не ферментирует маннит), образующих сероводород и не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками, указывает на наличие бактерий из рода сальмонелл.
Питательная среда для выделения сальмонелл и шигелл сухая SS-агар
Категории
- Биологические индикаторы для контроля стерилизации (10)
- Газогенерирующие пакеты (2)
- Иглы IMPROVACUTER (8)
- Контроль качества предстерилизационной очистки (6)
- Контроль продуктов питания (2)
- Контроль условий хранения и транспортирования ИЛП (4)
- Лабораторная посуда и принадлежности из пластика (192)
- Лабораторная посуда и принадлежности из стекла (136)
- Лабораторные препараты (1)
- Мембранные фильтры (12)
- Наборы для концентрирования вирусов (7)
- Наборы для концентрирования вирусов, яиц гельминтов и простейших
- Отчётная документация (15)
- Питательные среды (399)
- Стерилизационное оборудование (1)
- Тест-системы (22)
- Упаковочные материалы для стерилизации (324)
- Устройства контроля процесса стерилизации (2)
- Химические индикаторы для контроля стерилизации (107)
- Чашки Петри (28)
- Экспресс-контроль дезинфекции (152)
- Экспресс-тесты (17)
- Экспресс-тест диагностики инфекционных заболеваний
