Рпга на сифилис


РПГА анализ крови на сифилис

Исследование крови на сифилис РПГА методом проводится пациентам для подтверждения инфицирования бледными трепонемами и определения стадии болезни. Прямая реакция пассивной гемагглютинации является одним из самых достоверных методик и относится к специфическим тестам. Чувствительность РПГА достигает 98-100% при соблюдении определенных условий. При выдаче направления на анализ врач должен уведомить пациента о необходимости соблюдения правил. Невыполнение рекомендаций может привести к получению ложных результатов.

Общая характеристика РПГА

РПГА-тест связан с феноменом агглютинации эритроцитов, поверхность которых адсорбирует антиген бледной трепонемы в момент добавления к нему крови сифилитического больного. Организм начинает синтезировать антитела класса М спустя 14 суток после внедрения спирохеты. Иммуноглобулины класса G возникают в крови инфицированного через месяц. В некоторых случаях время образования антител удлиняется до 45 дней, поэтому РПГА-метод при первоначальной форме венерического заболевания менее чувствителен по сравнению с исследованием, осуществляемом на втором и третьем этапах сифилиса.

Тест, в котором применяется гемагглютинация, характеризуется высокой специфичностью (до 98%), что позволяет применять пассивный метод для подтверждения диагноза после использования неспецифического анализа. Степень чувствительности РПГА во вторичной, третичной фазе, а также при скрытой форме сифилиса достигает 100%. Достоверность этого и других трепонемных методик гораздо выше по сравнению с тестом, основанном на микрореакции преципиации, поэтому в настоящее время в лабораториях чаще применяются специфические способы при скрининговых исследованиях.

Часто результаты РПГА-метода остаются положительными даже после завершения терапии инфекционного заболевания. Лишь при проведении лечения на первоначальной стадии анализ становится отрицательным. Тест-система не позволяет дифференцировать раннюю и позднюю форму сифилиса, поскольку положительный результат сохраняется на всю жизнь. Также с помощью РПГА невозможно оценивать степень эффективности терапии.

Исследование с использованием реакции пассивной гемагглютинации рекомендуется пройти не только при наличии признаков инфицирования бледными трепонемами, но и при подготовке к беременности.

Выявление сифилиса на ранней стадии позволяет избежать развития врожденных дефектов у плода и раннего родовспоможения. Анализ может назначаться во время подготовки пациента к плановой операции, а также при желании стать донорами крови.

Читайте также:  Первая стадия сифилиса: симптомы и лечение

Методика проведения

В условиях лаборатории к реагентам РПГА специалисты добавляют сыворотку инфицированного человека, что приводит к агглютинации эритроцитов и выпадению их в осадок. Степень склеивания связана с концентрацией белковых образований в крови, поэтому серодиагностика, проводимая этим методом, выявляет не только наличие антител, но и определяет их число.

Результаты исследования представляются в виде титров. При получении положительного анализа можно говорить о наличии в организме пациента бледной трепонемы. В некоторых случаях возможно получение ложноположительной реакции. Значительное завышение показателей означает, что у больного вторичный или скрытый сифилис.

Как подготовиться к сдаче анализа

Для того чтобы тест-система показала верные результаты, пациенту необходимо тщательно подготовится к исследованию:

  1. Последний прием пищи должен быть не позже 20 часов вечера. Накануне сдачи крови желательно употреблять продукты с минимальным количеством жиров. Тяжелая пища может способствовать получению ложноположительного или ложноотрицательного результатов. В этом случае пациенту придется пересдавать кровь на повторное исследование.
  2. Забор крови проводится утром, поскольку многим пациентам сложно обойтись без пищи длительное время.
  3. Перед посещением лаборатории запрещается курить, пить кофе и чаи. Вещество, содержащееся в табачном дыме и попавшее в кровь, может привести к получению ложноположительного или отрицательного результатов.
  4. Врачи не рекомендуют непосредственно перед сдачей анализов физически перегружать организм. Запрещено заниматься силовыми тренировками, избегать стрессовых ситуаций.
  5. За несколько дней до процедуры забора крови необходимо полностью отказаться от алкогольных напитков. Спирт может привести к искажению результатов и получению неверных значений.
  6. Перед сдачей анализов допускается выпить небольшое количество чистой питьевой воды без содержания газов.

Как сдают материал на исследование?

Анализ на сифилис РПГА может проводиться с применением венозной, капиллярной крови, а также спинномозговой жидкости (ликвора), забираемой при подозрении на поражение бледными трепонемами нервной системы (нейросифилис).

Во многих лабораториях для проведения теста используют венозную кровь.

Она набирается в чистые сухие пробирки или вакутайнеры без использования веществ-антикоагулянтов. Биоматериал помещается в термостат на час (T=37), после чего переносится на 60-90 минут в холодное место. Центрифугирование получившегося сгустка совершается в течение ¼ часа при 1000 оборотах в минуту.

Читайте также:  Можно ли заразиться сифилисом повторно, может ли вернуться

После расслаивания образца жидкая часть быстро забирается на исследование, поскольку может наступить распад антител. При необходимости плазма может храниться 5 дней в холодном месте (2-8С). Сильная заморозка допускается только однократно. Хранение такого материала возможно не более 1,5 месяцев. Исследование ликвора проводится в краткие сроки. Перед анализом спинномозговая жидкость не подготавливается.

В стандартных тест-системах (Эколаб) применяются следующие наборы:

  • пробирка с эритроцитами с содержащимися на поверхностной части антигенами патогенного возбудителя;
  • флакон, в котором находятся чистые кровяные тельца;
  • емкость с буферным раствором для разведения крови больного;
  • сыворотка инфицированного человека, применяемая для контроля;
  • сыворотка здорового пациента для сравнительного анализа;
  • пластмассовый планшет, имеющий нумерованные лунки для перемешивания образцов и определения результата.

Набор для проведения исследования содержит определенное число реактивов.

Расшифровка результатов — нормы и отклонения

Сифилитический РПГА-метод предоставляет два вида показателей:

  1. Качественный. Отвечает за наличие в сыворотке белковых телец, появление которых вызвано внедрением в организм патогенного возбудителя.
  2. Количественный. Помогает оценивать степень интенсивности продукции антител и определять характер активности бледной трепонемы.

В первую очередь лаборанты выявляют качественный результат. При обнаружении иммуноглобулинов устанавливается их число.

Анализ может показывать:

  • 4+ — результаты положительные;
  • 3+ — положительные;
  • 2+ — слабоположительные;
  • 1+ — результат сомнителен;
  • — — инфицирования нет.

При получении сомнительного результата рекомендуется провести повторное исследование через 14 дней после первого анализа.

Для первичной формы сифилиса характерны сниженные показатели (менее 1:320). При вторичном венерическом заболевании выявляются повышенные значения титров (более 1:320). При скрытом течении инфекции показатели также занижены.

Отрицательный РПГА-тест означает, что пациент не инфицирован бледными трепонемами либо заболевание находится в инкубационном периоде, который составляет 7-14 дней. В некоторых случаях такой результат получается из-за ошибки лаборанта при взятии биологического материала для проведения исследования.

Читайте также:  Cколько действителен анализ на сифилис

Причиной получения ложноположительного результата становятся:

  1. Беременность.
  2. Аутоиммунные процессы.
  3. Гепатиты.
  4. Бактериальные эндокардиты.
  5. Состояния после вакцинаций.

Исследования с применением РПГА-метода не позволяют проводить дифференциацию сифилиса и других трепонематозов, ранней и поздней формы венерического заболевания. Результаты необходимо оценивать в совокупности с другими показателями, полученными с использованием лабораторных, инструментальных методов.

Цена вопроса

Стоимость исследования крови с применением реакции пассивной гемагглютинации составляет в среднем 5,6$. При этом в частных лабораторных центрах за взятия венозной крови для проведения анализа берется 2,8$. В государственных клиниках исследование проводится бесплатно по направлению врача-венеролога.

Где сдать анализ

Услуги по осуществлению анализов с помощью РПГА-тестов предлагают разные диагностические центры.

В лабораторной службе Хеликс результаты можно получить через 2 дня после сдачи биологического материала. Инвитро предлагает свои услуги по исследованию крови на сифилис методом РПГА. Срок исполнения в этом центре — 1 рабочий день. В медицинской лаборатории Гемотест также можно сдать кровь на анализ с применением РПГА. Результаты выдаются через сутки после забора биологического материала.

Метод РПГА является высокоточным и позволяет определить наличие трепонемной инфекции на любом этапе венерического заболевания. Анализы назначаются для подтверждения заражения пациента, ранее обследованного с помощью неспецифических тестов.

Результаты могут быть ложными при определенных заболеваниях, связанных с аутоиммунными процессами, поражением печени, сердечной мышцы.

При получении сомнительного анализа врачи рекомендуют пройти повторное исследование через 2 недели.

Анализ крови РПГА — реакция пассивной гемагглютинации

Анализ крови РПГА относится к классическим способам диагностики, которые применяются уже многие десятки лет, но по-прежнему актуальны. Для чего в настоящее время проводится РПГА? Почему его иногда предпочитают современным методикам, и когда может столкнуться обычный человек с необходимостью такого исследования?

Наиболее современным методом современной лабораторной диагностики инфекционных заболеваний является полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет определить в любом биологическом материале, от крови и до соскоба со слизистых оболочек остатки генома, или уникального наследственного кода возбудителя болезни. Вторым методом диагностики является определение иммуноглобулинов класса М и G в крови пациента, которые свидетельствуют о развитии специфического иммунного ответа.

Что такое РПГА в анализе крови?

Этот способ исследования (реакция пассивной гемагглютинации, РПГА) имеет и второе название: реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). И в практике может встретиться как аббревиатура РПГА, так и РНГА. Что это за анализ? Для него необходима центрифугированная сыворотка крови пациента, которую совмещают с особым диагностическим реагентом. Классически он называется «эритроцитарный антигенный диагностикум». Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты. Но так было сравнительно давно, а в настоящее время биологический материал уже не используют, и вместо этого применяют микроскопические частицы латекса.

На эти частицы с помощью особой технологии наносят характерные для данного инфекционного возбудителя антигены, которые являются его «визитной карточкой». В результате получается множество частиц, на поверхности которых находятся адсорбированные, и крепко связанные с носителем активные молекулы антигена.

В том случае, если в сыворотке крови пациента находятся выработанные к данному возбудителю антитела, то эти частицы латекса или эритроциты, склеиваются антителами между собой, и выпадают в осадок, который называется агглютинацией (переводе означает «склеивание»). Эту реакцию ставят в специальных планшетах, которые выполнены из пластика и рассчитаны на небольшие объемы. А раньше анализ крови на РПГА проводилась с набором обычных пробирок. В них в разных разведениях находилась кровь пациента, к которой и добавляли диагностикум.

В некоторых случаях применяется зеркальный метод, когда диагностикум содержит не антигены, а антитела. Этот метод (РОНГА, или обратная гемагглютинация) применяется при поиске инфекции, при которых в крови циркулируют токсины, например при ботулизме. В таком случае, если у пациента в крови есть ботулотоксин, то он связывается со специфическими антитоксическими антителами диагностикумов, и также наблюдается реакция агглютинации, которую можно определить в зависимости от разведения сыворотки крови.

Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

РПГА при сифилисе

Анализ крови РПГА — что это при сифилисе? Это проведение реакции в ее классическом виде, при которой у пациента в сыворотки его крови выявляются циркулирующие антитела к возбудителю сифилиса. Этот способ является недорогим, быстрым, и позволяет первично использовать исследовать биологический материал для скрининга этой инфекции, для обследования доноров, сдающих кровь, для контактных лиц, близко общавшихся с больными.

Таким образом, РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Но это вовсе не значит, что если такие антитела выявлены, то это анализ может считаться недостоверным. Выявление антител к бледной спирохете является основой лабораторной диагностики сифилиса и его подтверждения. И реакция пассивной гемагглютинации относятся к специфическим или трепонемный тестам, поскольку в нем используются «настоящие», сифилитические антигены.

После того, как к специфическому диагностикуму добавляется сыворотка крови, больного сифилисом, то происходит гемагглютинация. Эти циркулирующие в крови антитела могут появиться уже через 2 недели после заражения. В этом случае речь идет об антителах «быстрого реагирования», или об иммуноглобулинах класса М. Через месяц они дополняются специфическими иммуноглобулинами класса G. Поэтому при начале заболевания эта реакция определяет только один вид антител, говорящих об острой инфекции, а во вторичном и третичном периоде сифилиса она «улавливает» антитела класса G, которых в крови накапливается довольно много. Именно поэтому чувствительность этой реакции при дебюте заболевания несколько ниже, а если человек болен сифилисом несколько лет, то ее чувствительность приближается к 100% против 86% в случае первичного, свежего и недавнего сифилиса.

Эта реакция является высокоспецифичной и с ее помощью можно подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, который был поставлен с помощью применения нетрепонемного теста. К таким нетрепонемным тестам относится RW или всем известная реакция Вассермана. При ее постановке в качестве антигена берется кардиолипиновый антиген, который не имеет никакого отношения к возбудителю. Он очень похож по своей структуре на сифилитический, но, все-таки, несколько отличается от него, и поэтому при этом виде исследования возможны ложноположительные реакции.

РПГА как метод переподтверждения

Поэтому в том случае, если у пациента при реакции Вассермана выявлено положительное ее значение, то для подтверждения или опровержения результатов RW необходимо выполнить реакцию пассивной гемагглютинации. Специфичность РПГА составляет от 96 до 100%. Даже при скрытом сифилисе без всяких проявлений она может также поставить диагноз с практически 100% вероятностью.

Поскольку правила диагностики сифилиса обязательно требуют переподтверждения первичного диагноза другим методом, то в том случае, если первичным методом диагностики является сама РПГА, то ее тоже необходимо переподтвердить, несмотря на ее высокую чувствительность, но уже только с помощью другого метода. И тогда используется тоже трепонемный тест, но только другой, например, нужно расшифровывать новые значения методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Значение при самых ранних сроках и при выздоровлении

Поскольку антитела, принадлежащие к классу иммуноглобулинов G, сохраняются в сыворотке крови, как правило, пожизненно, то даже после активного и успешного лечения сифилиса с последующим выздоровлением эти антитела остаются положительными. Только в том случае, когда сифилис заподозрили и пролечили в «самом зародыше», через несколько дней после заражения, на стадии формирования твердого шанкра и регионарного лимфаденита, то тогда РПГА может быть отрицательной.

Тот факт, что и при вторичном сифилисе, и при третичном РПГА будет одинаково положительной, то это значит, что такое исследование нельзя использовать для дифференциальной диагностики стадий заболевания. С помощью РПГА также невозможно оценить эффективность лечения, поскольку при этом антитела всё равно будут циркулировать в крови. Эффективность терапии необходимо оценивать с помощью других лабораторных анализов. Особенно высокие показатели, то и значительное разведение сыворотки крови пациента при проведении РПГА возникают при вторичном сифилисе, а также при ранней и скрытой форме этой болезни.

О ложноположительных значениях

Но, несмотря на высокую чувствительность и специфичность этого теста, также при проведении РПГА на сифилис возможны ложноположительные значения. Они возникают нечасто, не более чем в 2,6% случаев, и появляются при циркуляции в крови пациента антител, очень похожих на сифилитические, но не являющиеся ими. Это могут быть аутоантитела, и чаще всего такие «сюрпризы» подбрасывает системная красная волчанка.

Также те заболевания, которые вызываются другими представителями трепонем, или спирохет, могут приводить к ложноположительным значениям, например, болезнь Лайма, которую вызывает «близкая родственница» сифилиса Borrelia burgdorferi. О диагностике болезни Лайма, или клещевого боррелиоза, можно прочитать здесь. В некоторых случаях, к таким искажениям приводит онкологическая патология, состояние беременности, и даже вялотекущий острый инфаркт миокарда. В последнем случае в кровь попадают частицы некротизированной сердечной мышцы, которые по своей структуре аналогичны кардиолипиновому антигену, он применяется для постановки реакции Вассермана, и извлекается из сердца крупного рогатого скота.

Также причиной ложноположительных результатов могут быть случаи внутривенной наркомании, ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты B и C, лептоспирозы и возвратный тиф, а также заболевания, которые встречаются в жарких странах и вызываются трепонемами — пинта, фрамбезия, беджель. В редких случаях, у пациентов с низким иммунитетом могут активизироваться трепонемы, которые относятся к сапрофитам и обитают в полости рта. Также туберкулез и инфекционный мононуклеоз могут быть причиной таких реакций, как и в случае обширной политравмы и многочисленных переломов.

Такие ложноположительные реакции необходимо перепроверять через некоторое время, обычно они исчезают в течение полугода, например, после разрешения беременности или в течение более длительного времени.

Подготовка и показания к РПГА

Подготовки к анализу никакой не требуются, единственное исключение сделано для курящих. Последняя сигарета должна быть выкуренной не раньше, через 30 минут до сдачи крови, а лучше вообще отказаться от курения в этот день. Забирается венозная кровь из локтевой вены, и показано проведение этого исследования четырем группам пациентов:

  • лицам, у которых есть симптомы и признаки сифилиса (к ним относятся вероятный шанкр, увеличение регионарных паховых лимфоузлов, непонятная кожная сыпь на фоне подозрительного анамнеза, вялотекущий менингит, диффузное облысение, симптомы сифилитической лейкодермы во втором периоде, либо подозрение на образование гумм, признаки спинной сухотки, звездчатые рубцы, говорящие о запущенном третичном сифилисе;
  • лица, находящиеся в половом и бытовом контакте с больными;
  • доноры;
  • оформление санитарной книжки, профилактические медицинские осмотры, плановая госпитализация в лечебное учреждение.

Пятой категорией лиц являются те пациенты, у которых была выявлена положительная реакция на сифилис, полученная другими методами диагностики, чаще всего реакцией Вассермана.

Интерпретация результатов РПГА на сифилис

В норме РПГА должно быть отрицательной, то есть гемагглютинации у пациента не должно возникать ни при каких условиях. В случае положительных результатов — это самая различная форма сифилиса, в том числе врождённый. Все остальные реакции относятся к ложноположительным, и о них уже говорилось выше. Лишь в редких случаях отрицательная реакция РПГА на сифилис может говорить о слишком рано взятом анализе при наличии инфекции, когда ещё не наработались антитела, то есть вплоть до 6 недели после заражения.

Вам могут быть также полезны статьи по этой теме:

Роль РПГА в диагностике сифилиса

Сифилис — инфекционное заболевание, которое стоит на первом месте по уровню распространенности. И, к сожалению, путь заражения не только половой. Медики, доноры, люди, проживающие в одной квартире с больным — все они в группе риска. Чтобы исключить сифилис нужно сдать кровь на анализ, например, РПГА. Этот метод диагностики точен, эффективен и позволяет выявить заболевание на любой стадии (кроме инкубационного периода).

Содержание

  • 1 Что такое РПГА
  • 2 Виды РПГА
  • 3 Как сдавать
  • 4 Видео

Что такое РПГА

Условно лабораторные методы диагностики можно разделить на два типа: ищут или самого возбудителя, или антигены, которые иммунная система выработала к «чужаку». РПГА на сифилис — это специфическое серологическое исследование, позволяющее обнаружить антитела к бледной спирохете. Если они обнаружены, значит результат анализа положительный, если антитела не выявлены — отрицательный.

Для проведения исследования необходим эритроцитарная диагностика, а если проще — эритроциты, обработанные специальным раствором. Их получают, отделив на центрифуге плазму крови от форменных элементов. Если человек болен, то его эритроциты будут нести на себе антитела к антигену (бледной спирохете) и присоединяться к нему, «слипаться». Соответственно, чтобы их обнаружить, нужно ввести в сыворотку крови антиген и пронаблюдать реакцию, которая может быть:

  1. Слабой интенсивности (антител на поверхности эритроцитов нет, в организме отсутствует возбудитель сифилиса или присутствует в неопределяемом количестве).
  2. Средней интенсивности (эритроциты соединились с антигеном, но в количестве недостаточном, чтобы однозначно диагностировать заболевание).
  3. Интенсивная (на поверхности эритроцитов много антител, образовались скопления слипшихся клеток).
  4. Резко интенсивная (большое количество эритроцитов соединились с антигеном, образуя характерный осадок).

В последних двух случаях можно с уверенностью утверждать о наличии заболевания. Реакция средней интенсивности требует уточняющих анализов, так как возможно два варианта. Или заражение произошло недавно и еще не успело выработаться достаточное количество антител, или подготовка крови выполнена неверно, и нужно повторить исследование.

Возможен ли ложноположительный результат на сифилис? Да, несмотря на высокую точность метода РПГА (99-100%) такое может быть. Это связано с тем, что иммунитет вырабатывает антитела ко всем болезнетворным микроорганизмам, а некоторые из них сходны по структуре с бледной трепонемой, например:

  • возбудители клещевого боррелиоза и сапрофитные спирохеты;
  • палочка Коха и вирус ВИЧ;

Также ложноположительный результат возможен при наличии аутоиммунных заболеваний, при инфаркте миокарда и при беременности. И если клиническая картина не указывает на сифилис и есть сомнения, нужно сдать другой анализ, однозначно подтверждающий или исключающий болезнь.

В роли антигена используют фабрично изготовленные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены. Культуры трепонем выращивают в пробирках и обрабатывают ультразвуком. Затем их быстро замораживают, высушивают под низким давлением, и полученный порошок расфасовывают в ампулы.

Виды РПГА

Так как при выполнении такого анализа интенсивность реакции варьируется, это послужило основанием для использования этого метода не только для диагностики, но и для отслеживания динамики болезни. Поэтому РПГА условно разделяют на два подвида.

РПГА качественный

Любой анализ, отвечающий на вопрос: есть или нет в организме возбудитель болезни, называют качественным. Часто этого достаточно для того, чтобы диагностировать недуг и приступить к лечению.

Антитела вырабатываются не сразу. Возбудителю (бледной трепонеме) нужно время, чтобы распространится по организму, и вызвать иммунный ответ. Поэтому сдавать анализ на следующий день после вероятного заражения не стоит, результат будет недостоверным.

Однако следует учитывать и тот факт, что антитела к возбудителю недуга остаются в организме навсегда. И если человек заболел сифилисом, прошел курс лечения и выздоровел, даже спустя десятилетия в его крови будут обнаружены антитела. Как же в таком случае узнать: опять произошло заражение или нет? Ответ на этот вопрос дает полуколичественный анализ РПГА.

РПГА полуколичественный

Посчитать количество антител к бледной спирохете невозможно. Однако для того, чтобы примерно оценить их количество проводят титрование исследуемого образца. Определить сифилис рпга полуколичественно  значит последовательно разбавлять сыворотку до того момента, когда «слипшиеся» эритроциты перестают определяться. Соответственно если их мало, потребуется небольшое количество разведений, а если много — разводить придется в большом объеме титранта.

Как сдавать

В качестве исследуемого образца у пациента берут 3-5 мл венозной крови. Лучше сдавать анализ утром, за день до сдачи нужно исключить из своего рациона:

  • жирную пищу и соленые продукты;

Почему нужно соблюдать диету перед сдачей анализа? В первую очередь это нужно для того, чтобы с полученным образцом крови можно было работать. Например, после приема в пищу белковых и молочных продуктов в крови повышается количество микрочастиц жира. После разделения в центрифуге плазма крови будет представлять собой мутную, белесую сыворотку. Отделить эритроциты из такого материала или очень трудно, или вообще невозможно.

Правда ли, что алкоголь никак не влияет на результат анализов?

Алкоголь снижает защитные функции организма, а значит, и возможность вырабатывать антитела к болезнетворным микроорганизмам. Поэтому анализ может показать или слабую, или ложноотрицательную реакцию. Кроме того, этанол влияет на количественные показатели форменных элементов крови, что также усложняет проведение анализа.

Нельзя сдавать анализ на сифилис во время острой фазы вирусного заболевания. Антитела к вирусу могут показать ложноположительную реакцию. Обязательно нужна консультация врача, который скажет, когда можно проводить диагностику.

Видео

Также вы можете посмотреть видеоролик, где врач уролог-венеролог расскажет вам, что представляет собой анализ РПГА.

РПГА — современный и высокоточный анализ, позволяющий с высокой степенью вероятность подтвердить или исключить сифилис. Однако окончательная постановка диагноза происходит с учетом всех факторов: клинической картины, анамнеза, результатов других анализов. И, конечно, интерпретировать результаты любого исследования должен только врач.

Анализ крови РПГА — реакция пассивной гемагглютинации

Анализ крови РПГА относится к классическим способам диагностики, которые применяются уже многие десятки лет, но по-прежнему актуальны. Для чего в настоящее время проводится РПГА? Почему его иногда предпочитают современным методикам, и когда может столкнуться обычный человек с необходимостью такого исследования?

Наиболее современным методом современной лабораторной диагностики инфекционных заболеваний является полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет определить в любом биологическом материале, от крови и до соскоба со слизистых оболочек остатки генома, или уникального наследственного кода возбудителя болезни. Вторым методом диагностики является определение иммуноглобулинов класса М и G в крови пациента, которые свидетельствуют о развитии специфического иммунного ответа.

Что такое РПГА в анализе крови?

Этот способ исследования (реакция пассивной гемагглютинации, РПГА) имеет и второе название: реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). И в практике может встретиться как аббревиатура РПГА, так и РНГА. Что это за анализ? Для него необходима центрифугированная сыворотка крови пациента, которую совмещают с особым диагностическим реагентом. Классически он называется «эритроцитарный антигенный диагностикум». Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты. Но так было сравнительно давно, а в настоящее время биологический материал уже не используют, и вместо этого применяют микроскопические частицы латекса.

На эти частицы с помощью особой технологии наносят характерные для данного инфекционного возбудителя антигены, которые являются его «визитной карточкой». В результате получается множество частиц, на поверхности которых находятся адсорбированные, и крепко связанные с носителем активные молекулы антигена.

В том случае, если в сыворотке крови пациента находятся выработанные к данному возбудителю антитела, то эти частицы латекса или эритроциты, склеиваются антителами между собой, и выпадают в осадок, который называется агглютинацией (переводе означает «склеивание»). Эту реакцию ставят в специальных планшетах, которые выполнены из пластика и рассчитаны на небольшие объемы. А раньше анализ крови на РПГА проводилась с набором обычных пробирок. В них в разных разведениях находилась кровь пациента, к которой и добавляли диагностикум.

В некоторых случаях применяется зеркальный метод, когда диагностикум содержит не антигены, а антитела. Этот метод (РОНГА, или обратная гемагглютинация) применяется при поиске инфекции, при которых в крови циркулируют токсины, например при ботулизме. В таком случае, если у пациента в крови есть ботулотоксин, то он связывается со специфическими антитоксическими антителами диагностикумов, и также наблюдается реакция агглютинации, которую можно определить в зависимости от разведения сыворотки крови.

Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

РПГА при сифилисе

Анализ крови РПГА — что это при сифилисе? Это проведение реакции в ее классическом виде, при которой у пациента в сыворотки его крови выявляются циркулирующие антитела к возбудителю сифилиса. Этот способ является недорогим, быстрым, и позволяет первично использовать исследовать биологический материал для скрининга этой инфекции, для обследования доноров, сдающих кровь, для контактных лиц, близко общавшихся с больными.

Таким образом, РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Но это вовсе не значит, что если такие антитела выявлены, то это анализ может считаться недостоверным. Выявление антител к бледной спирохете является основой лабораторной диагностики сифилиса и его подтверждения. И реакция пассивной гемагглютинации относятся к специфическим или трепонемный тестам, поскольку в нем используются «настоящие», сифилитические антигены.

После того, как к специфическому диагностикуму добавляется сыворотка крови, больного сифилисом, то происходит гемагглютинация. Эти циркулирующие в крови антитела могут появиться уже через 2 недели после заражения. В этом случае речь идет об антителах «быстрого реагирования», или об иммуноглобулинах класса М. Через месяц они дополняются специфическими иммуноглобулинами класса G. Поэтому при начале заболевания эта реакция определяет только один вид антител, говорящих об острой инфекции, а во вторичном и третичном периоде сифилиса она «улавливает» антитела класса G, которых в крови накапливается довольно много. Именно поэтому чувствительность этой реакции при дебюте заболевания несколько ниже, а если человек болен сифилисом несколько лет, то ее чувствительность приближается к 100% против 86% в случае первичного, свежего и недавнего сифилиса.

Эта реакция является высокоспецифичной и с ее помощью можно подтвердить или опровергнуть первичный диагноз, который был поставлен с помощью применения нетрепонемного теста. К таким нетрепонемным тестам относится RW или всем известная реакция Вассермана. При ее постановке в качестве антигена берется кардиолипиновый антиген, который не имеет никакого отношения к возбудителю. Он очень похож по своей структуре на сифилитический, но, все-таки, несколько отличается от него, и поэтому при этом виде исследования возможны ложноположительные реакции.

РПГА как метод переподтверждения

Поэтому в том случае, если у пациента при реакции Вассермана выявлено положительное ее значение, то для подтверждения или опровержения результатов RW необходимо выполнить реакцию пассивной гемагглютинации. Специфичность РПГА составляет от 96 до 100%. Даже при скрытом сифилисе без всяких проявлений она может также поставить диагноз с практически 100% вероятностью.

Поскольку правила диагностики сифилиса обязательно требуют переподтверждения первичного диагноза другим методом, то в том случае, если первичным методом диагностики является сама РПГА, то ее тоже необходимо переподтвердить, несмотря на ее высокую чувствительность, но уже только с помощью другого метода. И тогда используется тоже трепонемный тест, но только другой, например, нужно расшифровывать новые значения методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Значение при самых ранних сроках и при выздоровлении

Поскольку антитела, принадлежащие к классу иммуноглобулинов G, сохраняются в сыворотке крови, как правило, пожизненно, то даже после активного и успешного лечения сифилиса с последующим выздоровлением эти антитела остаются положительными. Только в том случае, когда сифилис заподозрили и пролечили в «самом зародыше», через несколько дней после заражения, на стадии формирования твердого шанкра и регионарного лимфаденита, то тогда РПГА может быть отрицательной.

Тот факт, что и при вторичном сифилисе, и при третичном РПГА будет одинаково положительной, то это значит, что такое исследование нельзя использовать для дифференциальной диагностики стадий заболевания. С помощью РПГА также невозможно оценить эффективность лечения, поскольку при этом антитела всё равно будут циркулировать в крови. Эффективность терапии необходимо оценивать с помощью других лабораторных анализов. Особенно высокие показатели, то и значительное разведение сыворотки крови пациента при проведении РПГА возникают при вторичном сифилисе, а также при ранней и скрытой форме этой болезни.

О ложноположительных значениях

Но, несмотря на высокую чувствительность и специфичность этого теста, также при проведении РПГА на сифилис возможны ложноположительные значения. Они возникают нечасто, не более чем в 2,6% случаев, и появляются при циркуляции в крови пациента антител, очень похожих на сифилитические, но не являющиеся ими. Это могут быть аутоантитела, и чаще всего такие «сюрпризы» подбрасывает системная красная волчанка.

Также те заболевания, которые вызываются другими представителями трепонем, или спирохет, могут приводить к ложноположительным значениям, например, болезнь Лайма, которую вызывает «близкая родственница» сифилиса Borrelia burgdorferi. О диагностике болезни Лайма, или клещевого боррелиоза, можно прочитать здесь. В некоторых случаях, к таким искажениям приводит онкологическая патология, состояние беременности, и даже вялотекущий острый инфаркт миокарда. В последнем случае в кровь попадают частицы некротизированной сердечной мышцы, которые по своей структуре аналогичны кардиолипиновому антигену, он применяется для постановки реакции Вассермана, и извлекается из сердца крупного рогатого скота.

Также причиной ложноположительных результатов могут быть случаи внутривенной наркомании, ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты B и C, лептоспирозы и возвратный тиф, а также заболевания, которые встречаются в жарких странах и вызываются трепонемами — пинта, фрамбезия, беджель. В редких случаях, у пациентов с низким иммунитетом могут активизироваться трепонемы, которые относятся к сапрофитам и обитают в полости рта. Также туберкулез и инфекционный мононуклеоз могут быть причиной таких реакций, как и в случае обширной политравмы и многочисленных переломов.

Такие ложноположительные реакции необходимо перепроверять через некоторое время, обычно они исчезают в течение полугода, например, после разрешения беременности или в течение более длительного времени.

Подготовка и показания к РПГА

Подготовки к анализу никакой не требуются, единственное исключение сделано для курящих. Последняя сигарета должна быть выкуренной не раньше, через 30 минут до сдачи крови, а лучше вообще отказаться от курения в этот день. Забирается венозная кровь из локтевой вены, и показано проведение этого исследования четырем группам пациентов:

  • лицам, у которых есть симптомы и признаки сифилиса (к ним относятся вероятный шанкр, увеличение регионарных паховых лимфоузлов, непонятная кожная сыпь на фоне подозрительного анамнеза, вялотекущий менингит, диффузное облысение, симптомы сифилитической лейкодермы во втором периоде, либо подозрение на образование гумм, признаки спинной сухотки, звездчатые рубцы, говорящие о запущенном третичном сифилисе;
  • лица, находящиеся в половом и бытовом контакте с больными;
  • доноры;
  • оформление санитарной книжки, профилактические медицинские осмотры, плановая госпитализация в лечебное учреждение.

Пятой категорией лиц являются те пациенты, у которых была выявлена положительная реакция на сифилис, полученная другими методами диагностики, чаще всего реакцией Вассермана.

Интерпретация результатов РПГА на сифилис

В норме РПГА должно быть отрицательной, то есть гемагглютинации у пациента не должно возникать ни при каких условиях. В случае положительных результатов — это самая различная форма сифилиса, в том числе врождённый. Все остальные реакции относятся к ложноположительным, и о них уже говорилось выше. Лишь в редких случаях отрицательная реакция РПГА на сифилис может говорить о слишком рано взятом анализе при наличии инфекции, когда ещё не наработались антитела, то есть вплоть до 6 недели после заражения.


Смотрите также