Пцр диагностика инфекций


Диагностика инфекций методом ПЦР

Диагностика инфекций методом ПЦР

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это высокочувствительный специфический метод диагностики вирусных заболеваний, который проводится с помощью молекулярно-генетического исследования крови пациента. Такой метод диагностики способен обнаружить также и наследственные болезни. С помощью ПЦР определяют не только диагноз, а еще и стадию, на которой находится заболевание. Поговорим что такое диагностика инфекций методом ПЦР, узнаем о значениях результатов и многое другое.

Разработчиком метода полимеразной цепной реакции стал американец Кэри Мюллис, создав его в 1983 году. В 1993 году Кэри получил Нобелевскую премию в области химии.

Анализ ПЦР является золотым стандартом в диагностике заболеваний. Без этого метода невозможно было бы постановить окончательный диагноз и, следовательно, применить адекватное лечение. Очень часто анализ стает единственным методом для выявления активных инфекций в организме в то время, как другие методы оказались не эффективными.

Метод полимеразной цепной реакции

Подробнее о методе полимеразной цепной реакции.

В основу теста входит многократное удвоение ДНК или РНК, которое осуществляется с помощью ферментов и проводится в лаборатории. Таким образом образовывается нужное для визуального анализа количество материала. При выполнении ПЦР проводится копирование только нужного участка, который соответствует заданным параметрам.

К примеру, происходит помещение биологического материала человека, в котором вероятно присутствует возбудитель, в амплификатор. Затем, ферменты, добавленные в реактор, связываются с патогеном, и получается синтез копии ДНК и РНК. Копирование ведется несколько этапов, что образует цепную реакцию, образовывая сотни копий из одного генетического материала. После этого лаборанты проводят анализ и сравнивают результаты с информацией в базе данных. ПЦР выдает как качественный, так и количественный результат исследования.

Данный метод широко распространен в медицине, он используется для проведения опытов с мутацией и сращиванием ДНК, а также для других экспериментов.

Преимущества диагностики вирусных инфекций методом ПЦР

  • Чувствительность теста очень высока, и может обнаружить даже единичные агенты возбудителя. Чувствительность составляет 10-1000 клеток одного образа материала. Для сравнения можно сказать, что чувствительность микроскопических тестов не превышает 105 клеток;
  • Специфичность ПЦР находится на высоком уровне, что дает возможность определить участок РНК и ДНК возбудителя. Таким образом, тест не выдает ложных показателей;
  • ПЦР непосредственно обнаруживает агент вируса, возбудителя инфекции в исследуемом образце;
  • Тест проводится очень быстро. Уже через 4 часа можно оценить результаты исследования;
  • Универсальная методика исследования позволяет обнаружить разные виды возбудителя. Можно использовать одну пробу для выявления нескольких видов агентов возбудителя.
  • С помощью ПЦР можно провести доклиническую и ретроспективную диагностику. Доклиническая диагностика выявляет патогены еще до наступления болезни, а ретроспективная делается после перенесенной болезни. Это позволяет проводить исследование в инкубационный период болезни, когда жалоб на здоровье еще нет, но при этом пациент уже заражен вирусом. Также, возможно выявить латентную инфекцию, которая протекает бессимптомно.
  • ПЦР можно проводить на основе образцов архивного материала или на основе биологических остатков. Это помогает идентифицировать личность или установить отцовство.

Кроме того, диагностика методом ПЦР в последнее время активно развивается. Так, появляются все более новые тесты для исследования. Таким образом, цена на проведение таких тестов с каждым годом падает, что дает возможность доступа к методу многим лицам.

Инфекции которые можно обнаружить

Инфекции, которые можно обнаружить в организме человека с помощью полимеразной цепной реакции:

  • инфекция ВИЧ;
  • гепатиты А, В, С, G;
  • мононуклеоз;
  • цитомегаловирусная инфекция;
  • инфекция герпеса, 1 и 2 типов;
  • инфекции, передающиеся половым путем (хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз и другие);
  • туберкулез;
  • онкогенные вирусы (папиллома);
  • листериоз;
  • кандидоз;
  • боррелиоз;
  • клещевой энцефалит;
  • хеликобактерная инфекция, а также другие инфекции.

Диагностика методом ПЦР широко распространенна во многих отраслях медицины, например в урологии, гинекологии, фтизиатрии, онкологии и других.

Анализ

Анализ ПЦР сроки

Результаты и сроки анализа ПЦР, проведенных методом полимеразной цепной реакции, выдаются уже через двое суток после сдачи образцов для исследования. Иногда, результаты изготовляются в течение 1 дня.

Правила забора материала для исследования методом ПЦР

Практически все пациенты, которые сдают материал для проведения ПЦР диагностики, могут рассчитывать на достоверные и быстрые результаты. Однако, чистота анализа также зависит и от пациента, собирающего материал. Материал для анализа должен собираться в условиях, исключающих его загрязнение, что может существенно повлиять на объективность результата.

Рекомендации по сбору образцов для анализа:

  • за сутки до сдачи анализа избегать половых контактов;
  • забор крови происходит только утром, натощак, это значит, что нельзя употреблять пищу и напитки перед взятием крови;
  • моча для анализа сдается в стерильном контейнере, при этом собирается только утренняя моча.

Для исследования методом ПЦР собирается тот биологический материал, в котором предположительно могут быть патогенные бактерии. Это может быть:

  • кровь,
  • слюна,
  • образцы слизи из слизистых оболочек,
  • плацента,
  • моча,
  • мокрота,
  • соскоб,
  • околоплодные воды и плевральная жидкость.

Для проведения анализов на половые инфекции, берется образцы выделений из половых органов.

Для диагностики Torch-инфекций берутся образцы крови. Чтобы провести анализ на мононуклеоз берется мазок из зева, для диагностики ЦМВИ – образцы мочи. Спинномозговая жидкость берется для диагностики поражений нервной системы человека.

При внутриутробных инфекциях производят забор тканей плаценты и околоплодных вод.

Результаты анализа

Результаты анализа ПЦР могут быть положительными и отрицательными. При отрицательном результате анализа ПЦР, организм пациента не подвергался заражения и, следовательно, является здоровым. При положительном результате можно утверждать факт наличия инфекционных возбудителей в организме пациента.

Существует также здоровое носительство бактерий, при котором симптомов заболевания у пациента нет. В таком случае результат ПЦР окажется положительным. Но говорить здесь об активной инфекции нельзя. При этом лечение проводить не нужно, но наблюдаться регулярно у врача необходимо. Такое явление распространено при таких заболеваниях, как ВПЧ, герпес, ЦМВИ и других. Очень важно помнить, что носитель инфекции может передать ее здоровому человеку. Также, сам носитель может перейти в стадию хронического протекания болезни.

ПЦР диагностика — видео пояснение

simptomlecheniye.ru

ПЦР-диагностика инфекций мочеполовой системы

Гонорея, трихомоноз также приобретают новые черты: вместо яркой клинической картины с жжением и большим количеством неприятных выделений, они сразу хронизуются и текут незаметно, вяло. В какой-то мере это связано с неконтролируемым приемом антибиотиков. Микроорганизмы вырабатывают к ним устойчивость, меняя свои свойства до неузнаваемости. В итоге пройдя антибиотикотерапию ИППП не полностью, человек становится источником нетипичной инфекции, которую крайне сложно распознать без анализов.

Наука не стоит на месте и наряду с изменением в строении возбудителей происходит разработка более совершенных методов диагностики. ПЦР – полимеразная цепная реакция – один из самых чувствительных и распространенных способов обнаружения инфекций на сегодняшний день. В том числе и тех из них, которые сложно диагностировать иными методами.

Что такое ПЦР?

Любой микроорганизм содержит в своем составе молекулы ДНК или РНК – наследственную информацию. Она необходима ему для дальнейшего размножения, роста и развития. Метод ПЦР способен обнаружить наследственную информацию любых возбудителей инфекционных болезней. Для этого достаточно наличие хотя бы одной подобной молекулы и исследуемом материале, что говорит об уникальной чувствительности методики.

Обнаруженная ДНК или РНК возбудителя многократно синтезируется специальным ферментом. В итоге количество молекул наследственной информации становится видимым для регистрирующей системы и она выдает положительный результат. Если генетического материала микроорганизма в исследуемой ткани нет, то результат будет отрицательный. ПЦР-диагностика ценна высокой точностью: риск ложноположительных или ложноотрицательных ответов минимален.

Различают ПЦР-диагностику:

  • Качественную – она позволяет обнаружить ДНК или РНК возбудителя в исследуемом материале в принципе, ее используют для первичной постановки диагноза.
  • Количественную – учитывается количество копий ДНК или РНК в 1 мл исследуемого материла. Соответственно, чем больше микроорганизмов в нем содержится, тем большее число копий будет в результате. Метод используют обычно для контроля эффективности лечения.

Как проводят исследование?

Для ПЦР диагностики воспалительных болезней мочеполового тракта используют соскоб эпителия из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, биопсийный и послеоперационный материал – небольшие кусочки органов, мочу. Перед сдачей анализа рекомендовано воздерживаться от половых контактов минимум 24 часа, мужчинам также нельзя мочиться за 3 часа до исследования. К женщинам последнее правило относится лишь в том случае, если материал забирается из уретры.

Соскоб выполняют при помощи специальной тонкой щеточки, которую вводят в мочеиспускательный канал. Врач-гинеколог проворачивает ее несколько раз, чтобы отслоить клетки с поверхности слизистой – большинство возбудителей ИППП паразитируют именно в них. При выраженном воспалении процедура может показаться болезненной, но длится она меньше минуты. Срок изготовления анализа – несколько часов, хотя лаборатория обычно выдает заключение через 1-3 суток, что зависит от ее удаленности от лечебного учреждения и загруженности.

Что можно выявить с помощью ПЦР?

ПЦР-диагностику используют для выявления:

  • хламидий;
  • уреаплазмы;
  • микоплазмы;
  • вируса генитального герпеса;
  • вируса папилломы человека;
  • гонококка;
  • трихомонады;
  • гарднереллы.

Зачастую доктор вместе с поиском возбудителя в мочеполовом тракте назначает анализ крови на антитела к нему же. Совместная интерпретация полученных данных позволяет ему судить о давности заболевания, его активности и назначать наиболее подходящую терапию. Ежегодное обследование поможет вовремя выявить скрытые бессимптомные инфекции и предотвратить их негативные последствия в виде бесплодия и нарушения сексуальной функции.

infmedserv.ru

ПЦР диагностика инфекций

ПЦР — диагностика — диагностика методом полимеразно цепной реакции — наиболее современный, быстрый и точный метод исследования для обнаружения многих заболеваний. ПЦР — диагностика выявляет присутствие инфекционных возбудителей в случаях, когда другими методами (бактериологическими, иммунологическими, микроскопическими) это сделать не удается.

Точность метода достигается благодаря специфичности ПЦР – диагностики — в исследуемом материале выявляют фрагмент РНК или ДНК, который характерен только лишь для данного возбудителя, что подтверждает его наличие в организме.

ПЦР — диагностика включает три основные процедуры — подготовку пробы материала для исследования (выделение ДНК или РНК), собственно полимеразную цепную реакцию и детекцию продукта ПЦР. Чужеродный генетический материал при этом копируется в пробирке многократно с помощью ДНК-полимеразы, а потом огромные количества копий специфичных фрагментов ДНК регистрируют визуально. Поэтому при ПЦР — диагностике можно выявить даже единичные клетки вирусов или бактерий. Возбудителей, имеющих высокую антигенную изменчивостью или паразитов, находящихся внутри клетки другими методами очень сложно обнаружить.

Преимущества ПЦР – диагностики

Быстрота исследования заключается в том, что не нужно выделять и долго выращивать возбудителя с целью его поиска. Процесс стандартизирован и автоматизирован, что сводит к минимуму возможность ошибок, которые связаны с подготовкой и тестированием проб вручную. Результат при ПЦР — диагностике можно получить за несколько часов, при положительном ответе он выражается по четырехбальной шкале — от одного плюса до четырех.

Универсальность ПЦР – диагностики в том, что она позволяет выявить чужеродное ДНК в разных биологических тканях — моче, слизи, крови, соскобе эпителиальных клеток, мокроте. Определяются все возбудители, чьи ДНК присутствовали в материале, который исследовался. Особая популярность ПЦР – диагностики в обнаружении инфекций, которые передаются половым путем, особенно хронических или скрытых — уреаплазмоза, хламидиоза, гарднереллеза, гонореи, микоплазменной инфекции.

Что исследуют этим методом

С помощью ПЦР — диагностики исследуются вирусы, например, вирус папилломы человека. Для этого берут соскоб папилломатозных элементов, для ПЦР — диагностики вирусных гепатитов производят забор крови из вены. Проводят также ПЦР — диагностику ВИЧ, особенно ее врожденной формы.

Реже ПЦР — диагностика используется для дифференциальной диагностики туберкулеза, вирусных и бактериальных пневмоний, дифтерии, определения онковирусов и цитомегаловирусной инфекции, в гастроэнтерологии для выявления геликобактериоза.

nmedicine.net


Смотрите также