Пцр диагностика инфекций

Диагностика инфекций методом ПЦР

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это высокочувствительный специфический метод диагностики вирусных заболеваний, который проводится с помощью молекулярно-генетического исследования крови пациента. Такой метод диагностики способен обнаружить также и наследственные болезни. С помощью ПЦР определяют не только диагноз, а еще и стадию, на которой находится заболевание. Поговорим что такое диагностика инфекций методом ПЦР, узнаем о значениях результатов и многое другое.

Разработчиком метода полимеразной цепной реакции стал американец Кэри Мюллис, создав его в 1983 году. В 1993 году Кэри получил Нобелевскую премию в области химии.

Анализ ПЦР является золотым стандартом в диагностике заболеваний. Без этого метода невозможно было бы постановить окончательный диагноз и, следовательно, применить адекватное лечение. Очень часто анализ стает единственным методом для выявления активных инфекций в организме в то время, как другие методы оказались не эффективными.

Метод полимеразной цепной реакции

Подробнее о методе полимеразной цепной реакции.

В основу теста входит многократное удвоение ДНК или РНК, которое осуществляется с помощью ферментов и проводится в лаборатории. Таким образом образовывается нужное для визуального анализа количество материала. При выполнении ПЦР проводится копирование только нужного участка, который соответствует заданным параметрам.

К примеру, происходит помещение биологического материала человека, в котором вероятно присутствует возбудитель, в амплификатор. Затем, ферменты, добавленные в реактор, связываются с патогеном, и получается синтез копии ДНК и РНК. Копирование ведется несколько этапов, что образует цепную реакцию, образовывая сотни копий из одного генетического материала. После этого лаборанты проводят анализ и сравнивают результаты с информацией в базе данных. ПЦР выдает как качественный, так и количественный результат исследования.

Данный метод широко распространен в медицине, он используется для проведения опытов с мутацией и сращиванием ДНК, а также для других экспериментов.

Преимущества диагностики вирусных инфекций методом ПЦР

Чувствительность теста очень высока, и может обнаружить даже единичные агенты возбудителя. Чувствительность составляет 10-1000 клеток одного образа материала. Для сравнения можно сказать, что чувствительность микроскопических тестов не превышает 105 клеток;

Специфичность ПЦР находится на высоком уровне, что дает возможность определить участок РНК и ДНК возбудителя. Таким образом, тест не выдает ложных показателей;
ПЦР непосредственно обнаруживает агент вируса, возбудителя инфекции в исследуемом образце;
Тест проводится очень быстро. Уже через 4 часа можно оценить результаты исследования;
Универсальная методика исследования позволяет обнаружить разные виды возбудителя. Можно использовать одну пробу для выявления нескольких видов агентов возбудителя.
С помощью ПЦР можно провести доклиническую и ретроспективную диагностику. Доклиническая диагностика выявляет патогены еще до наступления болезни, а ретроспективная делается после перенесенной болезни. Это позволяет проводить исследование в инкубационный период болезни, когда жалоб на здоровье еще нет, но при этом пациент уже заражен вирусом. Также, возможно выявить латентную инфекцию, которая протекает бессимптомно.
ПЦР можно проводить на основе образцов архивного материала или на основе биологических остатков. Это помогает идентифицировать личность или установить отцовство.

Кроме того, диагностика методом ПЦР в последнее время активно развивается. Так, появляются все более новые тесты для исследования. Таким образом, цена на проведение таких тестов с каждым годом падает, что дает возможность доступа к методу многим лицам.

Инфекции которые можно обнаружить

Инфекции, которые можно обнаружить в организме человека с помощью полимеразной цепной реакции:

инфекция ВИЧ;
гепатиты А, В, С, G;
мононуклеоз;
цитомегаловирусная инфекция;
инфекция герпеса, 1 и 2 типов;
инфекции, передающиеся половым путем (хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз и другие);
туберкулез;
онкогенные вирусы (папиллома);
листериоз;
кандидоз;
боррелиоз;
клещевой энцефалит;
хеликобактерная инфекция, а также другие инфекции.

Диагностика методом ПЦР широко распространенна во многих отраслях медицины, например в урологии, гинекологии, фтизиатрии, онкологии и других.

Анализ

Анализ ПЦР сроки

Результаты и сроки анализа ПЦР, проведенных методом полимеразной цепной реакции, выдаются уже через двое суток после сдачи образцов для исследования. Иногда, результаты изготовляются в течение 1 дня.

Правила забора материала для исследования методом ПЦР

Практически все пациенты, которые сдают материал для проведения ПЦР диагностики, могут рассчитывать на достоверные и быстрые результаты. Однако, чистота анализа также зависит и от пациента, собирающего материал. Материал для анализа должен собираться в условиях, исключающих его загрязнение, что может существенно повлиять на объективность результата.

Рекомендации по сбору образцов для анализа:

за сутки до сдачи анализа избегать половых контактов;
забор крови происходит только утром, натощак, это значит, что нельзя употреблять пищу и напитки перед взятием крови;
моча для анализа сдается в стерильном контейнере, при этом собирается только утренняя моча.

Для исследования методом ПЦР собирается тот биологический материал, в котором предположительно могут быть патогенные бактерии. Это может быть:

кровь,
слюна,
образцы слизи из слизистых оболочек,
плацента,
моча,
мокрота,
соскоб,
околоплодные воды и плевральная жидкость.

Для проведения анализов на половые инфекции, берется образцы выделений из половых органов.

Для диагностики Torch-инфекций берутся образцы крови. Чтобы провести анализ на мононуклеоз берется мазок из зева, для диагностики ЦМВИ – образцы мочи. Спинномозговая жидкость берется для диагностики поражений нервной системы человека.

При внутриутробных инфекциях производят забор тканей плаценты и околоплодных вод.

Результаты анализа

Результаты анализа ПЦР могут быть положительными и отрицательными. При отрицательном результате анализа ПЦР, организм пациента не подвергался заражения и, следовательно, является здоровым. При положительном результате можно утверждать факт наличия инфекционных возбудителей в организме пациента.

Существует также здоровое носительство бактерий, при котором симптомов заболевания у пациента нет. В таком случае результат ПЦР окажется положительным. Но говорить здесь об активной инфекции нельзя. При этом лечение проводить не нужно, но наблюдаться регулярно у врача необходимо. Такое явление распространено при таких заболеваниях, как ВПЧ, герпес, ЦМВИ и других. Очень важно помнить, что носитель инфекции может передать ее здоровому человеку. Также, сам носитель может перейти в стадию хронического протекания болезни.

ПЦР диагностика — видео пояснение

ПЦР-диагностика инфекций мочеполовой системы

Гонорея, трихомоноз также приобретают новые черты: вместо яркой клинической картины с жжением и большим количеством неприятных выделений, они сразу хронизуются и текут незаметно, вяло. В какой-то мере это связано с неконтролируемым приемом антибиотиков. Микроорганизмы вырабатывают к ним устойчивость, меняя свои свойства до неузнаваемости. В итоге пройдя антибиотикотерапию ИППП не полностью, человек становится источником нетипичной инфекции, которую крайне сложно распознать без анализов.

Наука не стоит на месте и наряду с изменением в строении возбудителей происходит разработка более совершенных методов диагностики. ПЦР – полимеразная цепная реакция – один из самых чувствительных и распространенных способов обнаружения инфекций на сегодняшний день. В том числе и тех из них, которые сложно диагностировать иными методами.

Что такое ПЦР?

Любой микроорганизм содержит в своем составе молекулы ДНК или РНК – наследственную информацию. Она необходима ему для дальнейшего размножения, роста и развития. Метод ПЦР способен обнаружить наследственную информацию любых возбудителей инфекционных болезней. Для этого достаточно наличие хотя бы одной подобной молекулы и исследуемом материале, что говорит об уникальной чувствительности методики.

Обнаруженная ДНК или РНК возбудителя многократно синтезируется специальным ферментом. В итоге количество молекул наследственной информации становится видимым для регистрирующей системы и она выдает положительный результат. Если генетического материала микроорганизма в исследуемой ткани нет, то результат будет отрицательный. ПЦР-диагностика ценна высокой точностью: риск ложноположительных или ложноотрицательных ответов минимален.

Различают ПЦР-диагностику:

Качественную – она позволяет обнаружить ДНК или РНК возбудителя в исследуемом материале в принципе, ее используют для первичной постановки диагноза.
Количественную – учитывается количество копий ДНК или РНК в 1 мл исследуемого материла. Соответственно, чем больше микроорганизмов в нем содержится, тем большее число копий будет в результате. Метод используют обычно для контроля эффективности лечения.

Как проводят исследование?

Для ПЦР диагностики воспалительных болезней мочеполового тракта используют соскоб эпителия из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, биопсийный и послеоперационный материал – небольшие кусочки органов, мочу. Перед сдачей анализа рекомендовано воздерживаться от половых контактов минимум 24 часа, мужчинам также нельзя мочиться за 3 часа до исследования. К женщинам последнее правило относится лишь в том случае, если материал забирается из уретры.

Соскоб выполняют при помощи специальной тонкой щеточки, которую вводят в мочеиспускательный канал. Врач-гинеколог проворачивает ее несколько раз, чтобы отслоить клетки с поверхности слизистой – большинство возбудителей ИППП паразитируют именно в них. При выраженном воспалении процедура может показаться болезненной, но длится она меньше минуты. Срок изготовления анализа – несколько часов, хотя лаборатория обычно выдает заключение через 1-3 суток, что зависит от ее удаленности от лечебного учреждения и загруженности.

Что можно выявить с помощью ПЦР?

ПЦР-диагностику используют для выявления:

хламидий;
уреаплазмы;
микоплазмы;
вируса генитального герпеса;
вируса папилломы человека;
гонококка;
трихомонады;
гарднереллы.

Зачастую доктор вместе с поиском возбудителя в мочеполовом тракте назначает анализ крови на антитела к нему же. Совместная интерпретация полученных данных позволяет ему судить о давности заболевания, его активности и назначать наиболее подходящую терапию. Ежегодное обследование поможет вовремя выявить скрытые бессимптомные инфекции и предотвратить их негативные последствия в виде бесплодия и нарушения сексуальной функции.

ПЦР диагностика инфекций

ПЦР — диагностика — диагностика методом полимеразно цепной реакции — наиболее современный, быстрый и точный метод исследования для обнаружения многих заболеваний. ПЦР — диагностика выявляет присутствие инфекционных возбудителей в случаях, когда другими методами (бактериологическими, иммунологическими, микроскопическими) это сделать не удается.

Точность метода достигается благодаря специфичности ПЦР – диагностики — в исследуемом материале выявляют фрагмент РНК или ДНК, который характерен только лишь для данного возбудителя, что подтверждает его наличие в организме.

ПЦР — диагностика включает три основные процедуры — подготовку пробы материала для исследования (выделение ДНК или РНК), собственно полимеразную цепную реакцию и детекцию продукта ПЦР. Чужеродный генетический материал при этом копируется в пробирке многократно с помощью ДНК-полимеразы, а потом огромные количества копий специфичных фрагментов ДНК регистрируют визуально. Поэтому при ПЦР — диагностике можно выявить даже единичные клетки вирусов или бактерий. Возбудителей, имеющих высокую антигенную изменчивостью или паразитов, находящихся внутри клетки другими методами очень сложно обнаружить.

Преимущества ПЦР – диагностики

Быстрота исследования заключается в том, что не нужно выделять и долго выращивать возбудителя с целью его поиска. Процесс стандартизирован и автоматизирован, что сводит к минимуму возможность ошибок, которые связаны с подготовкой и тестированием проб вручную. Результат при ПЦР — диагностике можно получить за несколько часов, при положительном ответе он выражается по четырехбальной шкале — от одного плюса до четырех.

Универсальность ПЦР – диагностики в том, что она позволяет выявить чужеродное ДНК в разных биологических тканях — моче, слизи, крови, соскобе эпителиальных клеток, мокроте. Определяются все возбудители, чьи ДНК присутствовали в материале, который исследовался. Особая популярность ПЦР – диагностики в обнаружении инфекций, которые передаются половым путем, особенно хронических или скрытых — уреаплазмоза, хламидиоза, гарднереллеза, гонореи, микоплазменной инфекции.

Что исследуют этим методом

С помощью ПЦР — диагностики исследуются вирусы, например, вирус папилломы человека. Для этого берут соскоб папилломатозных элементов, для ПЦР — диагностики вирусных гепатитов производят забор крови из вены. Проводят также ПЦР — диагностику ВИЧ, особенно ее врожденной формы.

Реже ПЦР — диагностика используется для дифференциальной диагностики туберкулеза, вирусных и бактериальных пневмоний, дифтерии, определения онковирусов и цитомегаловирусной инфекции, в гастроэнтерологии для выявления геликобактериоза.