Ифа положительный на сифилис


ИФА на сифилис: как проводится анализ

Иммуноферментный анализ на сифилис является одной из самых распространенных методик по выявлению венерического недуга.

В перечень стандартных диагностических мероприятий, применяемых для инфекционных заболеваний, входит иммуноферментный анализ. Если ИФА на сифилис положительный, не стоит сразу впадать в панику.

Рассмотрим подробнее особенности этой методики исследования и принципы расшифровки полученных результатов у разных категорий пациентов.

Суть исследования

Иммуноферментный анализ является одним из наиболее распространенных методов диагностики инфекционных заболеваний. Он относится к категории трепонемных тестов, то есть с его помощью можно установить наличие в организме пациента возбудителя сифилиса – бледной трепонемы.

ИФА-диагностика помогает определить наличие бледной трепонемы в организме человека.

Методом ИФА сифилис обнаруживается благодаря выявлению антител к трепонеме. Они содержаться в крови больного, причем их тип и количество зависят от стадии и формы заболевания, что позволяет получить важную информацию о текущем состоянии здоровья человека.

Этот метод также применяется для диагностики других венерических и инфекционных заболеваний, в частности, аутоиммунных, паразитарных, системных и т. д.

Преимущества и недостатки

ИФА очень часто назначается при подозрении на сифилис или другие инфекционные заболевания. Это обусловлено тем, что анализ позволяет выявить точный тип и стадию заболевания, причем его достоверность сохраняется на высоком уровне – вероятность ошибки по итогам многократного исследования составляет всего 1%, первичный ИФА имеет точность около 90%.

Использование качественных реактивов и современного оборудования позволяет максимизировать точность показателей.

В целом преимуществами метода являются:

  1. Высокая точность результата. Вероятность получения ложных данных очень мала.
  2. Минимизация человеческого фактора влияния. Современное оборудование для проведения ИФА исключает влияние человека на итоги исследования за счет автоматизации процесса.
  3. Выявление конкретных антител. Спутать антигены одного вида с другими невозможно, поэтому анализ показывает точный результат по конкретному диагнозу.
  4. Фиксация малейших отклонений от нормы. Даже самая незначительная концентрация патологических агентов не останется без внимания.

Не стоит забывать и о слабых сторонах этого метода. ИФА обладает следующими недостатками:

  1. Высокая цена. Высокая стоимость обусловлена многими факторами, в частности, необходимостью хорошего оборудования, качественных реагентов и специалистов с достаточным уровнем подготовки.
  2. Необходимость постановки предварительного диагноза. Нужно знать какие именно антигены искать, так как без дополнительных данных поставить точный диагноз будет невозможно.
  3. Вероятность ложноположительного результата. Некоторые состояния организма и прочие факторы могут исказить итоговые данные.

Показания к проведению

Врач может назначить проведение иммуноферментного анализа для диагностики не только сифилиса, но и ряда других инфекционных заболеваний.

Если рассматривать ситуацию непосредственно с заражением трепонемой, поводом для обследования могут стать:

  • появление внешних симптомов заболевания (шанкры, сифилитическая сыпь, гуммы и т.д.);
  • существенное понижение иммунитета;
  • выявление или подозрение на сифилис у полового партнера, близких и членов семьи;
  • положительная реакция при проведении других тестов;
  • выявление других заболеваний, которые могут быть связаны с сифилисом;
  • личное пожелание человека пройти обследование.
ИФА на сифилис назначают при наличии признаков, присущих недугу.Иммуноферментный анализ назначают также, чтобы подтвердить результаты других обследований, например, домашних экспресс-тестов.

Способы проведения

ИФА может проводиться разными способами. В каждом конкретном случае подбирается наиболее подходящий вариант.

В первую очередь, существует разделение методов на:

  1. Качественный. Выявляется наличие инфекции или вируса в организме пациента.
  2. Количественный. Определяет концентрацию антител к патогенному агенту в организме человека, что указывает на стадию и интенсивность развития заболевания.

Также существует классификация способов проведения ИФА по принципу воспроизведения необходимой реакции.

Различают 3 варианта:

  1. Прямой. Меченные антитела вводятся в предоставленные образцы крови.
  2. Непрямой с антигенами. Предварительно производится размещение сорбированных антигенов в ячейки полистирольного планшета, предназначенного для проведения ИФА. Затем к ним добавляются антитела вирусов, что провоцирует образование иммунных комплексов, необходимых для дальнейшей оценки результатов.
  3. Непрямой с антителами. Для венерических заболеваний часто используется именно этот способ. Он предполагает предварительное сорбирование антител, лишь затем на планшет добавляют антигены.

Правила забора материала

Для того чтобы сократить риски получения недостоверных результатов, необходимо правильно сдать кровь для анализа.

Перед прохождением ИФА нужно соблюдать некоторые ограничения:

  • избегать интенсивных физических и эмоциональных нагрузок;
  • отказаться от курения и приема алкоголя минимум за 1 — 3 дня;
  • на несколько дней нужно перейти на правильное питание;
  • женщинам желательно контролировать фазу менструального цикла, так как гормоны способны исказить результаты;
  • последний прием пищи должен быть за 8 — 10 часов до сдачи крови;
  • за 10 дней исключается прием лекарств, которые могут повлиять на результаты исследования.

Для ИФА берется венозная кровь из локтевой вены, сдавать ее нужно утром натощак. В целом применяются стандартные правила подготовки к забору венозной крови. В зависимости от того наличие какого заболевания тестируется, могут вноситься дополнительные требования к предварительной подготовке пациента.

Методика проведения

Инструкция по проведению ИФА достаточно проста:

  1. У пациента берется кровь из вены.
  2. Взятый материал проходит подготовку и разделяется на пробы на специальной мелкоячеистой палетке.
  3. Проводится смешивание антигенов с антителами по выбранной методике.
  4. Оценивается реакция. Пробы сравниваются с контрольными образцами, производится качественная и количественная оценка результатов.
  5. Данные заносятся в специальную таблицу с приложением количественных показателей (суммарные антитела).
  6. Лечащим врачом производится расшифровка результатов. При необходимости назначается соответствующее лечение.

После проведения исследований пациенту выдается документ с результатами. Он имеет вид таблицы с соответствующими обозначениями напротив каждого типа иммуноглобулина на пересечении с наименованиями инфекционных заболеваний.

Расшифровка

Только специалист сможет грамотно расшифровать результаты анализов. Самостоятельно трудно разобраться, например, что означает результат ИФА к=1 4. Сифилис к тому же может протекать в разных формах, что также отражается на итоговых данных.

В результатах указываются 3 вида иммуноглобулинов:

  1. IgM. Позволяют определить срок заражения сифилисом. Положительный результат свидетельствует об обострении заболевания. Их отсутствие может указывать на ремиссию хронических патологий или скрытую форму болезни.
  2. IgA. Указывает на заболевание, с момента заражения которым прошло больше месяца. Также является признаком острой фазы болезни, причем как при обычных патологиях, так и запущенных хронических.
  3. IgG. Является признаком пикового периода заболевания, то есть его обострение. При сифилисе положительная реакция проявляется некоторое время после прохождения лечения. При некоторых видах заболеваний может быть признаком выработанного иммунитета.

Эти вещества вырабатываются организмом в определенной последовательности, что является дополнительным признаком болезни. При качественных тестах устанавливается лишь присутствие иммуноглобулинов в крови каждого типа.

Это выражается в изменении цвета материалов, участвующих в анализе. Количественные показатели являются вспомогательными, они более точно описывают ситуацию. Соотношение антигенов и антител указывает на степень тяжести заболевания и интенсивность ответных действий организма.

Что делать

Если у пациента действительно имеется сифилис, положительный ИФА обнаруживается абсолютно всегда, не заметить присутствия трепонем при таком исследовании невозможно. Не стоит отчаиваться, заболевание хорошо поддается лечению, особенно на начальных стадиях.

Что необходимо делать при положительных результатах теста:

  • по показаниям врача пройдите дополнительные обследования;
  • пройдите курс антибиотикотерапии по выбранной схеме;
  • направьте усилия на укрепление иммунитета;
  • сообщите о заболевании своему половому партнеру;
  • в дальнейшем регулярно проходите профилактическую диагностику до момента снятия с учета в диспансере (через 5 лет при отсутствии положительных результатов анализов).

Не нужно откладывать уход на больничный и бояться огласки результатов. Диагноз шифруется и остается в секрете, лишь при угрозе инфицирования других людей необходимо сообщить о проблеме родственникам и половому партнеру, чтобы они прошли требуемые обследования.

Ложноположительный результат и его причины

Иногда фиксируется результат других тестов и ИФА ложноположительный на сифилис. Именно поэтому рекомендуется проводить 2 — 3 вспомогательных метода и через некоторое время повторять иммуноферментный анализ.

Подобные неточности встречаются редко, они обусловлены преимущественно такими факторами:

  • беременность;
  • хронические заболевания;
  • недавняя вакцинация;
  • травмы.

Ложноположительные результаты разделяют на острые и хронические, в зависимости от характера спровоцировавшего их фактора.

Основные из них представлены в таблице:

Название и фотоКраткое описание
Беременность

При беременности могут исказиться результаты ИФА-обследования.

Плод и генетический материал отца расцениваются, как чужеродные агенты .
Острая форма
Инфекция

При инфекции, не связанной с венерическими болезнями, реакция ИФА может быть положительной.

Происходит выработка иммуноглобулинов для борьбы с заболеванием.
Травма

Иногда у травмированных людей при наличии воспаления, анализы указывают на венерический недуг.

Организм реагирует воспалительным процессом, может произойти сопутствующее инфицирование.
Интоксикация

Бывает, что при интоксикации организм пациента дает сбой, и ИФА указывают на наличие трепонемы.

Возникает при отравлении токсическими веществами или проникновении некоторых патогенных микроорганизмов.
Инфаркт

Иногда при инфаркте анализы по венерологии могут быть положительны.

Острые проблемы с сердцем создают существенную нагрузку на организм и вызывают ряд десенсибилизирующих реакций.
Вакцинация

При вакцинации увеличивается количество иммуноглобулинов, что может спровоцировать положительный результат обследования на сифилис.

Введение вакцины влияет на выработку иммуноглобулинов.
Хроническая форма
Туберкулез

При туберкулезе в запущенной форме ИФА может быть положительным.

Подобную реакцию проявляет запущенная форма туберкулеза.
Патологии печени

Заболевания печени влияют на работу различных органов, а это иногда приводит к искажению результатов обследований.

Нарушается работа всего организма.
Аутоиммунные заболевания

Причиной положительного результата на вензаболевания могут стать аутоиммунные недуги.

При подобных сбоях выработка иммуноглобулинов может быть необоснованной наличием антител.
Болезни соединительной ткани

Наследственные болезни соединительных тканей иногда приводят к ложному результату на выявление бледной трепонемы.

Преимущественно являются генетическими патологиями и иногда «сбивают» результаты обследований.
Возрастные изменения

При возрастных изменениях могут происходить сбои в работе всех органов и систем, а это может привести к искажению в результатах диагностики.

У пожилых людей иммунная система работает со сбоями, к тому же имеется множество хронических болезней.

При наличии подобных проблем со здоровьем тест на сифилис может показать положительный результат, но это является лишь следствием выработки организмом белков для борьбы с заболеванием. Однако ИФА распознает их, как антигены.

У здорового ребенка до полуторагодовалого возраста могут наблюдаться ложноположительные результаты ИФА, если женщина во время беременности была инфицирована сифилисом. До этого возраста кровь еще не успевает полностью обновиться, поэтому в ней могут присутствовать антитела матери. Исключение составляет ситуация с обнаружением иммуноглобулинов IgM.

Больше информации об особенностях иммуноферментного анализа и методике его проведения вы можете узнать, посмотрев видео в этой статье.

Ифа на сифилис

При проведении диагностических тестов на сифилис, применяются различные серологические реакции: агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценции, связывания комплемента, иммуноферментный анализ и др. В основе всех этих серологических реакций лежит взаимодействие антигенов и антител. 

Специфические серологические тесты называются трепонемными потому, что в этих тестах используются бледные трепонемы или их антигены, то есть антигены трепонемного происхождения.

Цель трепонемных тестов — выявление специфических антител к антигенным структурам возбудителя сифилиса, то есть антител, направленные конкретно против самих бактерий T.

Pallidum, а не против тканей организма, поврежденных трепонемой. Специфические противотрепонемные антитела класса IgM могут быть обнаружены уже в конце второй недели заболевания.

Как и в нетрепонемных тестах, при проведении трепонемных тестов используется реакция «антиген-антитело». Для проведения и обнаружения результатов реакции «антиген-антитело» используют более сложные и дорогие методы, чем в случае нетрепонемных тестов.

Своевременное и качественное распознавание сифилитической инфекции связывается в настоящее время с широким внедрением трепонемных тестов. 

Трепонемные тесты используют, чтобы подтвердить наличие сифилиса — с их помощью проверяют результаты нетрепонемных тестов, что особенно необходимо при диагностике скрытых форм сифилиса. Трепонемные тесты также применяются для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда нетрепонемные кардиолипиновые тесты (реакция Вассермана, реакция микропреципитации и др.) отрицательные. 

Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности, т/к трепонемные реакции у некоторых больных могут оставаться положительными в течение многих лет после полноценного лечения сифилиса.

Однако, при проведении трепонемных тестов, в небольшом числе исследований могут встречаться ложноположительные результаты, особенно при наличии у пациента таких заболеваний, как инфекционный мононуклеоз, болезни соедининтельной ткани, лепра или инъекционная наркомания. 

По клинической специфичности трепонемные тесты сопоставимы с нетрепонемными, по клинической чувствительности – превосходят их.

Причины ложноположительных результатов

Реакция Вассермана может определять «острый» и «хронический» ложноположительный результат. Его выраженность зависит от характера изменений состояния человека. Показывать стадию обострения RW может в таких случаях:

  • инфекционные заболевания в стадии обострения;
  • травматические повреждения;
  • инфаркт миокарда;
  • введение любой вакцины за несколько дней до пробы;
  • пищевое отравление.

Типы анализов на сифилис

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

  1. 1Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
  2. 2Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
  3. 3Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

Прямые методы

  1. 1Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
  2. 2Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
  3. 3ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
  4. 4ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

Непрямые методы

Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

  1. 1Нетрепонемные тесты:
    • Реакция Вассермана (РСК);
    • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
    • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
    • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
    • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней — VDRL.
  2. 2Трепонемные тесты:
    • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
    • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
    • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
    • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
    • Иммуноблоттинг.

Рисунок 1 — Алгоритм серодиагностики сифилиса

Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра.

Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

Методы клинических исследований стремительно совершенствуются с каждым годом. С разработкой новых  способов диагностики, ложноположительная реакция на сифилис встречается всё реже.

При необходимости диагностика может включать в себя несколько разных методик – это позволяет получить наиболее достоверный результат.

Нетрепонемные методы исследования

Эти методики направлены на выявление белков, которые образуются в результате активности бледной спирохеты. Они направлены на определение «следов» возбудителя.

Такие методы имеют относительно высокий процент погрешности (до 10%). Подобные методики являются неспецифичными, но позволяют по титру антител определять степень заражения.

Реакция Вассермана RW

Наиболее распространённым анализом, который проводится для выявления бледной трепонемы, является серологическое исследование крови. Реакция Вассермана позволяет всего за несколько минут определить наличие болезни.

Поэтому данная методика применяется в лабораториях чаще всего – она не требует много времени и имеет относительно низкую стоимость.

Для выполнения анализа используется спинномозговая жидкость или кровь. Забор исследуемого материала может осуществляться из пальца (если анализ всего один) или из вены (если требуется проведение нескольких исследований).

В результате проведения анализа может быть не только ложноположительный, но и ложноотрицательный. Он возможен при следующих обстоятельствах:.

  • ранняя стадия заражения, когда количество трепонем в организме ещё низкое;
  • хроническое заболевание в стадии затихания, когда число антител снижается.

Для выявления болезни используют различные методики и биоматериалы. На ранних этапах сифилис определяют с помощью бактериоскопического теста.

Образцы исследуют под микроскопом. Прибор позволяет обнаружить штаммы возбудителя.

Позднее проводят серологические анализы. Благодаря им, в пробах выявляют антигены и антитела к болезни.

Способы определения половой инфекции поделены на 2 категории:

  • Прямые, выявляющие патогенный микроорганизм. К ним относят: темнопольная микроскопия, RIT-анализ (инфицирование кроликов биоматериалом для исследования), метод ПЦР – полимеразной цепной реакции (с его помощью находят генетические элементы возбудителя).
  • Непрямые (серологические) позволяют обнаружить антитела к патогену. Они продуцируются иммунной системой, как ответная реакция на заражение.

Серологические методики поделены на 2 категории: трепонемные и нетрепонемные.

Нетрепонемные, включающие: тест с толуидиновым красным, анализ РСК, RPR- тест, исследование крови экспресс-методом РМП.

Трепонемные, объединяющие: иммуноблоттинг, РСК-тест, РИТ-анализ, исследование РИФ, РПГА-тест, ИФА-анализ.

Информативность тестов на инфекцию различна. Чаще делают основные виды анализов на сифилис, к которым отнесены серологические методики. Пациентам, нуждающимся в обследовании, врач назначает тесты индивидуально.

Биоматериал для исследования

Чтобы выявить бледную трепонему – патогена, который выглядит, как спираль и вызывает сифилис, берут пробы:

  • венозной крови;
  • ликвора (секрета из спинномозгового канала);
  • содержимое лимфатических узлов;
  • ткани изъязвлений.

Если необходимо провести тесты на обнаружение сифилиса, кровь сдают не только из локтевой вены, но и из пальца. На выбор биоматериала и способ исследования влияет тяжесть течения инфекции и оснащенность диагностического центра.

Лабораторные анализы на выявления трепонемы называются серодиагностикой. Серодиагностика сифилиса условно подразделяется на две группы:

  • Специфические анализы, дающие положительную пробу даже после излечения заболевания;
  • Неспецифические анализы, показывающие результат, при наличии в конкретное время заболевания.

Как называется анализ на сифилис? Исследования в зависимости разделают на 2 группы:

Специфические анализы:

  • Сифилис рпга, что расшифровывается как реакция пассивной агглютинации или сифилис трна, что переводится — Treponema pallidum haemagglutination;
  • РИФ или реакция иммунофлюоресценции;
  • РИТ или реакция иммобилизации трепонем;
  • Иммуноферментный анализ;
  • Иммуноблот на сифилис или иммуноблоттинг;

 Наиболее известны следующие трепонемные тесты:

  • Реакция связывания комплемента (реакция Вассермана) с трепонемным антигеном (РСКт).
  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ; Fluorescent treponemal antibody, FTA). Она применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс (FTA-abs; FTA-abs double staining; FTA-abs IgM; РИФ-абс-IgM; 19S-IgM-FTA-abs); РИФц — реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью.
  • Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА; Treponema pallidum haemagglutination assay, TPHA).
  • Реакция пассивной агглютинации желатиновых частиц, сенсибилизированных антигенами возбудителя сифилиса (TPPA, Treponema pallidum particle agglutination assay)
  • Иммуноферментный анализ (ИФА; Enzyme Lynced Immunosorbent Assay, ELISA).
  • ИХЛ — иммунохемилюминесцентное исследование (ИХЛ; Chemiluminescence immunoassays, CLIA)
  • Реакция иммобилизации бледных трепонем РИБТ (РИТ), в зарубежной литературе TPI (Treponema pallidum immobilization test). В последние годы используется все реже и только в научных целях и в исследовательских лабораториях.
  • Иммуноблотинг (ИБ; Western Blot, Line Blot). Как правило, используется метод линейного иммуноблотинга, являющийся вариантом иммуноферментного анализа. Применяется в двух вариантах: для выявления IgG и IgM-антител к возбудителю сифилиса 
ПОДРОБНЕЕ ПРО:  Сифилис на члене фото

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела классов IgM, IgG и суммарные имеют универсальное значение и применяются как для скрининга, так и для подтверждения диагноза.

Эти методики просты и доступны в проведении, имеют высокую воспроизводимость, автоматизированы. При применении ИФА или РПГА обязательным условием является использование в повторном анализе той же тест-системы, что и при первичном обследовании.

РИФ (fluorescent treponemal antibody, FTA) основана на визуализации при люминесцентной микроскопии комплексов антигенов с антителами с помощью сыворотки против Ig человека, меченной флюорохромом.

Методы РИФ, ИФА, иммуноблоттинг (ИБ) позволяют выявить специфические антитела к антигенам T. pallidum (при сифилисе результаты тестов становятся положительными) с 3-й недели от момента заражения и ранее, РПГА и РИБТ – с 7–8-й недели.

Из наиболее распространенных специфических трепонемных тестов в мировой практике, в которых используется реакция агглютинации, можно перечислить следующие. В РПГА (Treponema pallidum hemagglutination assay, ТРНА),  реакции микрогемагглютинации (microhemagglutination assay for Treponema pallidum, MHA-TP) при положительном результате происходит агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных (обработанных) трепонемным антигеном, в присутствии антитрепонемных антител. Использование в качестве носителя латекса или желатиновых частиц в тесте ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination) позволяет применять нагрузочный тест в случае лизиса эритроцитов (распада эритроцитов из-за разрушения их мембраны) сыворотками некоторых больных, а также придает стабильность реагентам. 

Трепонемные тесты

Антиген Улавливающая система Тест

Живые патогенные трепонемы

Взвесь живых трепонем

РИТ, РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем)

Интактные трепонемы Трепонемы, фиксированные на стеклах

РИФ (реакция иммунофлуоресценции), РИФ-абс (РИФ с абсорбцией), РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца и т.п.

Очищенные и разрушенные ультразвуком трепонемы Связаны с эритроцитами РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)
Связаны с желатиновыми частицами Реакция агглютинации частиц (TPPA)
Связаны с поверхностью лунок микропланшета ИФА

Белки, разделенные методом электрофореза в полиакриламидном геле и перенесенные на мембраны методом вестерн-блоттинга

Иммуноблоттинг
Рекомбинантные Связаны с поверхностью лунок микропланшета Рекомбинантный ИФА

Белки, разделенные методом электрофореза в полиакриламидном геле и перенесенные на мембраны методом вестерн-блоттинга

Иммуноблотинг с рекомбинантными АГ
Связаны с частицами латекса Латекс-агглютинация

Диагностировать болезни возможно посредством прямых и непрямых способов. Сама бледная трепонема выявляется только прямым методом.

Непрямой же метод обнаруживает антитела к спирохете. Если найдены антитела, то это подтверждает наличие спирохеты в организме.

К непрямым способам диагностики относятся серологические реакции, объектом исследования которых является сыворотка крови.

Антитела можно обнаружить в процессе их контактирования с антигенами. Поэтому для проведения серологической реакции употребляются вещества с содержанием заданного антигена. По типу данного антигена реакции подразделяются на трепонемные и нетрепонемные:

  • Трепонемная реакция проходит с выявлением антител к антигенам трепонемы.
  • К нетрепонемным относятся реакции, обнаруживающин антитела к липопротеидам разрушенных трепонем или клеток человеческого организма.

Важно! Так как последние мало чем отличаются от липопротеидов тканей животных, то итог анализа на сифилис может оказаться ложноположительным. Кардинально подтвердить диагноз заболевания может только положительная трепонемная реакция.

Для диагностики применяют весь арсенал обследований. Обычно для подтверждения диагноза необходимы несколько анализов.

Подтверждаем или исключаем сифилис: анамнез, симптомы, анализы

Подтвердить или исключить диагноз может только дерматовенеролог. Уролог или гинеколог могут лишь заподозрить болезнь по внешним признакам. И тогда они должны направить пациента к дерматовенерологу для дальнейшего обследования, лечения и наблюдения.

Диагноз «сифилис» основывается на совокупности следующих признаков:

  1. На наличии или отсутствии внешних проявлений и симптомов.
  2. На результатах минимум двух лабораторных исследований: нетрепонемного (РМП, или RW, или RPR) и трепонемного (РПГА или ИФА) тестов.
  3. На данных о том, был ли сифилис ранее, и проводили ли уже его лечение.

Если симптомы присутствуют

Основные тесты на сифилис — RPR и РПГА
  • Наиболее очевидным и обоснованным диагноз считается тогда, когда имеются клинические симптомы и подтверждающие результаты двух анализов: RPR (или RW, РМП) и РПГА (или ИФА).
  • Если же при наличии симптомов результаты анализов расходятся, и RPR отрицательный, а РПГА (или ИФА) положительный, проводят дополнительный трепонемный тест — ИФА (или РПГА, если вначале проводился ИФА). В случае положительного дополнительного анализа диагноз считается доказанным и проводится лечение, в случае отрицательного — кровь отправляют в экспертную лабораторию.Отрицательный RPR при положительном ИФА/РПГА встречается обычно в позднем периоде. Тогда на наличие инфекции обязательно исследуют спинномозговую жидкость (РИФ-ц, РИТ).
  • Обратная ситуация, когда RPR положительный, а РПГА отрицательный (или сомнительный) встречаются крайне редко. Это возможно в первые 3–4 недели после появления твердого шанкра, а также во вторичном периоде во время иммунной «прозоны» (чрезмерно большого количества антител). В этом случае анализ рекомендуется повторить.
RPR/RW/

РМП

РПГА ИФА Лечение проводилось Диагноз Дальнейшая тактика
+ + + «Сифилис» Лечение
+ + «Поздний сифилис» Исследование спинномозговой жидкости. Лечение

Если внешних признаков нет

Тогда диагностика усложняется. Здесь врачи опираются только на анализы и сведения о проводимом или непроводимом ранее лечении.

Варианты в этом случае:

  • Если нетрепонемный (один из РМП/RW/RPR) и трепонемный тест (РПГА/ИФА) — положительны, проводится дополнительный альтернативный трепонемный тест (ИФА, если первый тест был РПГА, и наоборот — РПГА, если был ИФА). Если тест становится отрицательным, то кровь пациента направляют в экспертную лабораторию и проводят дополнительные анализы. В случае если второй трепонемный тест становится положительным, ставят диагноз: «скрытый сифилис».Такое состояние может наблюдаться некоторое время после проведенного лечения. Если пациенту было проведено до этого лечение, то для того чтобы подтвердить диагноз, проводят дополнительное исследование на IgM. При положительных результатах — диагноз подтверждается, но исследование все равно рекомендуется повторить через 2 недели. При отрицательных результатах сифилис опровергается.
  • Если нетрепонемный тест (РМП/RW/RPR) отрицательный, а трепонемный (РПГА/ИФА) положительный, то состояние может оцениваться как «поздний сифилис» или «отсутствие сифилиса», если пациенту было проведено ранее полноценное лечение. Для разграничения этих двух состояний проводят дополнительный тест на IgM (ИФАIgM, РИФ-абс-IgM, Иммуноблоттинг-IgM). Если IgM в крови имеются, ставят «поздний сифилис» и лечат. Если нет — пациент считается здоровым.
  • Если RPR (или RW/РМП) положительный, РПГА положительный, а ИФА отрицательный (или наоборот: РПГА «-» и ИФА «+»), то результаты анализов вызывают сомнение и рекомендуется отправить кровь в экспертную лабораторию или провести альтернативные анализы (РИФ, Иммуноблоттинг).
  • Если нетрепонемный тест (PMП/RW/RPR) положительный, а трепонемный (РПГА/ИФА) отрицательный, то проводится дополнительный трепонемный тест (ИФА/РПГА). Если он дает положительный результат, то кровь направляют в экспертную лабораторию. Если отрицательный, то диагноз опровергается, а результат нетрепонемного теста признается ложноположительным.

Классификация методов лабораторной диагностики

Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения.

На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода.

Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес.

— после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении.

Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем.

В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др.

Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе,  онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя.

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные.

Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена.

В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др.

С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения.

Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов.

В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.   

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра.

Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии.

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями.

При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%.

РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных.

РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

Некоторые пациенты, приходя на обследование к гинекологу или андрологу, не предоставляют объективную информацию о качестве своей половой жизни.

Возможно, причина — в обычном смущении, а может, виной тому является недостаток информации в области венерических заболеваний.

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 — Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. 1Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. 2Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. 3Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. 4Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. 5Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Где сдавать анализ

Всегда существует вероятность того, что результат теста ошибочный. При расшифровке анализов на сифилис особое внимание следует уделить внешним факторам, не зависящим от пациента. Ошибаться также может лаборант, проводящий исследования или пациент, когда неправильно подготовился к забору крови или не предоставил доктору правдивую информацию о себе. Ложный положительный результат возможен при влиянии следующих факторов:

  • Диабет любого типа
  • Наличие в крови наркотических веществ
  • Алкогольное опьянение
  • Заболевания инфекционного типа (корь, гепатит, мононуклеоз и пр.)
  • Доброкачественные или злокачественные новообразования
  • Болезни сердца
  • Прием антибиотиков или недавняя прививка
  • Аутоиммунные заболевания (красная волчанка, ревматоидный артрит и пр.)
  • Беременность
  • Употребление жирной, острой или соленой пищи в течение суток до забора крови

В зависимости от стадии заболевания некоторые тесты не могут выявить заболевание. Так, Реакция Вассермана (РСКт, и РСКк) проводится только спустя 3-4 недели после возможного заражения с вероятностью 100%, при наличии третичного сифилиса достоверность составит всего 75%.

Для диагностики ранних стадий заболевания целесообразно использование ИФА-теста. Анализ представляет собой иммуноферментное исследование с высокой чувствительностью к антителам.

ПОДРОБНЕЕ ПРО:  Где и как можно сдать кровь на сифилис

Достоверность результата близка к 100%, ложноположительный результат при наличии других заболеваний исключен.

Для исследовательских манипуляций зачастую используют кровь из вены. При определенных ситуациях лаборант может взять нужный образец для диагностики из пальца, либо из спинного мозга.

Промежуток от момента сдачи до получения результатов может быть различным: от одного дня до двух недель. Все будет определяться видом тестирования.

При подготовке к сдаче анализа крови на выявление рассматриваемого недуга нужно придерживаться следующих рекомендаций:

Начинать исследование организма на выявление рассматриваемого недуга следует с неспецифических тестов.

В большинстве случаев врач выписывает направление на МР. Даже, если результат слабоположительный («+»), пациент продолжает обследование — но на этот раз он будет сдавать специфические анализы (зачастую это РИФ и РПГА).

Ни один тест не может дать 100% гарантии того, что человек заражен сифилисом.

Положительный анализ не всегда свидетельствует о заболевании.

Он может быть ложным при следующих явлениях:

  • Инфицирование организма (мононуклеоз, туберкулез).
  • Беременность.
  • Онкозаболевание.
  • Аутоиммунные патологии.
  • Человек ранее был заражен сифилисом и прошел успешное лечение.

Результаты анализов и клинические проявления напрямую зависят от иммунного ответа организма.

Ранний сифилис

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы.

Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы.

Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 — Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

Одним из самых неожиданных может стать положительный результат теста на сифилис у беременных, особенно если женщина не меняла партнёра. Такая ситуация нередко приводит в ужас будущих мам, поскольку трепонема может негативно влиять на внутриутробное развитие малыша.

Скрининговое исследование при беременности проводится несколько раз:

  • при становлении на учёт, в 12 недель;
  • начало 3 триместра, в 30 недель;
  • перед родами.

Это то количество исследований, которое считается минимальным. Ложноположительный анализ на сифилис может проявляться из-за перестройки организма, происходящей во время беременности.

Когда женщина вынашивает ребёнка, её иммунная система вырабатывает большое количество антител – это эволюционное приспособление для защиты малыша в первый год жизни.

Во время беременности назначают дополнительный уточняющий анализ, который характеризуется большей точностью. Если контрольное исследование показывает наличие возбудителя в организме, обязательно проводится лечение.

Влияние терапии на растущий организм существенно меньше возможного вреда от трепонемы.

Одним из способов предупреждения неправильного результата является подготовка к сдаче анализов. Из-за неправильной подготовки возможно появление реакций, которые сопровождаются выработкой неспецифических антител, что и приводит к появлению неправильного результата.

  • Анализ обязательно нужно сдавать натощак. Можно употреблять только чистую воду.
  • За сутки до забора крови стоит полностью исключить алкоголь – он создаёт дополнительную нагрузку на печень, что может привести к появлению положительного результата.
  • Рекомендуется накануне отказаться от употребления жирной и жареной пищи, острых блюд и большого количества специй.
  • Минимум за 60 минут до анализа рекомендуется воздержаться от курения.
  • Перед забором крови из вены нужно отдохнуть минут 10-15 в приёмном покое.
  • Женщинам не рекомендуется сдавать кровь во время менструаций.
  • Нельзя проводить анализ после рентгенологического исследования, физиотерапевтических процедур.
  • Запрещено сдавать кровь на сифилис в период обострения инфекционных заболеваний.

Обратите внимание! Если пациент принимает какие-либо лекарства, он должен проконсультироваться с врачом перед проведением исследования, может потребоваться перерыв в несколько дней между приёмом препаратов и анализом.

Отправляет пациентов на анализ врач-венеролог. Частные лаборатории делают анонимные исследования на сифилис по желанию клиента. Для сдачи теста в них не нужно направление врача.

Правила проведения исследования:

  • Кровь в лаборатории берут утром на пустой желудок (едят после процедуры). До анализа разрешено пить только воду.
  • За 2 суток до обследования запрещено: питаться жирной едой и употреблять спиртное.
  • Кровь берут из пальца или вены.
  • Сколько длится исследование? Обычно не больше суток. Расшифровку анализов на сифилис получают у лаборантов либо лечащего врача.
  • Сколько действителен тест? По прошествии 3 месяцев результаты анализов теряют силу. Их сдают снова.

Если расшифровка анализа показывает, что тест положителен, необходимо посетить венеролога, который назначит дополнительное обследование для точного подтверждения диагноза и подберет схему необходимого лечения.

Для исключения риска искажения результатов при прохождении анализа необходимо соблюдать правила. Если этого не сделать, возможен ложноположительный анализ на сифилис. Для исключения погрешности, необходимо:

  • Сдавать кровь натощак;
  • Воздержаться за несколько дней от спиртного, жирной пищи и физической утомляемости;
  • Не курить за 2 часа до анализа;
  • Рассказать о принимаемых препаратах, о проведенных недавно прививках, о наличии заболеваний, о состоянии беременности и прочих имеющихся обстоятельствах.

Длительность проведения ИФА на сифилис зависит от загруженности лаборатории и наличии в ней медицинского оборудования.

Иммуноферментный анализ (ИФА; The enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) является одним из многочисленных методов серологической диагностики инфекционных заболеваний.

 Иммуноферментный анализ (ИФА) в серодиагностике сифилиса — это тест на антитела классов M, G и A (IgM, IgG, IgA) против антигенов бледной трепонемы.  Возможна постановка ИФА с ликвором.

Внедрение в практику иммуноферментного анализа (ИФА) вместо реакции Вассермана и других кардиолипиновых тестов значительно повысило качество лабораторной диагностики сифилиса. Существенным преимуществом данного метода является возможность автоматизации процесса исследования, что позволяет снизить влияние человеческого фактора. 

1. История метода ИФА

Основные принципы иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя разработали E. Engvar и соавтор.

(1971), B. Van Weeman и A.

Schuurs (1971). Разработанный ими иммуноферментный анализ впервые был предложен для диагностики сифилиса в 1975 г.

J. Veldkamp и A.

Visser, которые оценили потенциал этого автоматизированного теста. ИФА начал повсеместно использоваться в диагностике сифилиса в 1980-е гг.

, когда были разработаны и сертифицированы диагностические тесты и стандартизированы методики тестирования. В СССР методику постановки ИФА для диагностики сифилиса разработали B.

Н. Беднова, А.

В. Бабий и А.

В. Котровский (1982, 1983).

2. Принцип метода ИФА

Иммуноферментный анализ (ИФА) по механизму реакции близок к РИФ (выявляются те же антитела). Реакцию иммуноферментного исследования относят к иммунологическим реакциям, основанным на высокоспецифическом взаимодействии антигенов бледной трепонемы с антителами больного сифилисом.

В сифилидологической практике используется в основном непрямой вариант ИФА. Принцип наиболее часто используемого непрямого варианта реакции состоит в следующем.

На поверхности лунок полистиролового планшета фиксируются иммунные комплексы, образующиеся при взаимодействии антител больного сифилисом с антигенами бледной трепонемы.

После этого их выявляют их в цветной реакции с помощью специфических коньюгатов и соответствующих субстратно-хромогенных добавок.

Порядок выполнения теста следующий: на твердофазный носитель с присоединенным к нему антигеном помещается сыворотка больного. При наличии в ней антител, на поверхности носителя образуется комплекс антиген-антитело.

Для «проявления» результатов реакции используются антивидовые антитела к Ig человека, конъюгированные с ферментными маркерами. В случае положительной реакции фермент, присоединившийся к комплексу антиген-антитело, разлагает добавленный в систему субстрат, в результате чего развивается цветное окрашивание разной интенсивности.

В реакции определения комплекса сорбированных на твердой фазе АГ и АТ проводят с помощью антиглобулиновых антител, меченных ферментом, по цветной реакции фермента с субстратом. 

В реакции определение комплекса сорбированных на твердой фазе антигенов и антител проводят с помощью антиглобулиновых антител, меченных ферментом. 

ИФА представляет возможность выявления сывороточных Ig разных классов. На рынке представлены системы, позволяющие определять раздельно IgM и IgG и суммарные антитела. 

С развитием лабораторной диагностики в условиях модернизации здравоохранения РФ в практику лабораторий вошла автоматизация лабораторных исследований, которая позволяет стандартизовать аналитические этапы исследований.

Это способствует повышению качества диагностики. С внедрением автоматизации стали применяться новые высокотехнологичные методы, обладающие высокой чувствительностью и специфичностью, такие как иммунохемилюминесцентный анализ (ИХА) (chemiluminescence immunoassay — CLIA).

Как подготовиться к процедуре

Для анализа крови на сифилис в разных случаях могут брать капиллярную или венозную кровь. Домашние экспресс-тесты дают ответ по одной капле крови из пальца.

В этом случае специальной подготовки не требуется. Общая рекомендация: воздерживаться от курения непосредственно перед взятием пробы, а от алкоголя – на протяжении 24 часов.

Похожие требования выдвигаются и при заборе венозной крови. Для пациентов, имеющих проблемы с иммунитетом, дополнительно не советуют заниматься тяжелым физическим трудом накануне анализов. За день до взятия проб лучше употреблять легкую пищу, хорошо выспаться.

Сдача венозной крови проводится утром натощак.

Анализ ИФА при сифилисе

ИФА на сифилис является одним из самых эффективных методов, применяемых для диагностирования венерического заболевания, вызванного бледными трепонемами. Анализ позволяет определить связь антигена с антителом и осуществляется с помощью ферментов.  Этот высокоточный способ выявляет инфекцию в 90% случаев. Тест-система, используемая в иммуноферментной диагностике, предназначена для обнаружения как сифилиса, так и других заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами.

Когда нужно сдавать

Анализ методом ИФА на сифилис назначается через 3-4 недели после предполагаемого инфицирования.

Часто его применяют для того, чтобы подтвердить диагноз после получения положительного результата способом, основанном на реакции Вассермана. Иммуноферментный анализ проводят, если:

  • у пациента обнаружены высыпания в области половых органов;
  • имелись случаи незащищенных сексуальных контактов;
  • женщина беременна;
  • мужчина желает стать донором семенной жидкости;
  • ребенок родился у матери, страдающей сифилисом;
  • у пациента повышена температура по неизвестной причине;
  • планируется госпитализация или оперативное вмешательство;
  • проводится медосмотр работникам детских учреждений, общепита.

Как подготовиться к сдаче анализа методом ИФА

Для того чтобы достоверность иммуноферментного анализа была максимальной, пациенты должны быть осведомлены о правилах подготовки, при несоблюдении которых результат может оказаться ложноположительным. В целях минимизирования погрешности нужно:

  1. Сдавать кровь на голодный желудок.
  2. За двое-трое суток воздержаться от употребления спиртосодержащих напитков, еды с повышенным содержанием жиров.
  3. Ограничить физические нагрузки за несколько дней до забора крови.
  4. За три часа до сдачи биоматериала отказаться от курения.
  5. Сообщить врачу о лекарственных средствах, используемых в настоящее время, а также об имеющихся заболеваниях и прививках, сделанных недавно.
Читайте также:  Первые симптомы и признаки сифилиса у мужчин и женщин

О том, сколько может делаться анализ, лучше спросить работников лаборатории. Срок проведения связан не только с ее загруженностью, но и с наличием специального оборудования.

Как проводят анализ ИФА

В медицинских центрах обнаружение спирохет с применением метода иммуноферментной реакции осуществляется непрямым и прямым способом. В планшет с округлыми углублениями лаборант помещает сыворотку, выделенную из крови, забранной у пациента утром. После внесения хромогенных красящих веществ с помощью применения таблиц с цветовыми схемами, прилагаемыми в наборе для ИФА, осуществляется расшифровка теста. Таким способом работник лаборатории определяет уровни иммуноглобулинов, их число. Для того чтобы оценить исход реакции, применяется также спектрофотометр, который позволяет определить плотность биоматериала и сравнить его с контрольным образцом.

С помощью ИФА возможно выявить антитело, принадлежащее разным классам (А, G, M). При повышении уровня М-иммуноглобулинов врачи определяют время, когда произошло инфицирование бледными спирохетами. Обычно этот период не превышает 90 дней. Если у пациента увеличен титр класса А, это значит, что инфицирование произошло в течение последних 30 суток. G-иммуноглобулины позволяют выявить острый процесс, пролеченное заболевание.

Суммарный анализ, обозначаемый в медицинских центрах как «сифилис igg ИФА», назначается людям, ранее не обследованным на это венерическое заболевание. Метод позволяет обнаружить его при появлении первых симптомов и в первоначальной стадии инфицирования.

Расшифровка результатов — нормы и отклонения

Получив на руки расшифровку, пациент не всегда может правильно истолковать ее значение. Только врач способен определить результаты и поставить точный диагноз. В лабораторном бланке могут быть указаны следующие данные:

  • IgA+ IgM- IgG- — заражение произошло недавно;
  • IgA+ IgM+ IgG- — патогенный возбудитель попал в организм менее 30 дней назад;
  • IgA+ IgM+ IgG+ — инфицирование состоялось более месяца;
  • IgA- IgM- IgG+ — венерическое заболевание пролечено.

В некоторых случаях, если результат теста положительный, врач может назначить проведение дополнительных анализов другими методами.

Точность ИФА

Способ выявления инфекционного заболевания, вызванного бледными трепонемами, считается высокочувствительным. Прозводители ИФА-тестов дают гарантию качества и подтверждение его на опытах, в ходе которых сравнивались результаты других специфических диагностик. Точность составляет 98%.

Читайте также:  Лечение сифилиса на дому

Ложноположительный результат возможен в следующих случаях:

  1. Беременность. В этот период существует вероятность получения искаженных результатов, поскольку генетические материалы отца и сам плод могут быть расценены как чужеродный агент.
  2. Хроническое заболевание. Сомнительный результат возможен, если у пациента имеется запущенная форма туберкулеза, аутоиммунные процессы, патологии печени.
  3. Недавно сделанные прививки. Вакцина оказывает влияние на синтез иммуноглобулинов.
  4. Травма. У пациента с недавними повреждениями развиваются воспалительные процессы, которые могут спровоцировать получение ложноположительного анализа.
  5. Пожилой возраст. У таких людей нередко наблюдается сразу несколько хронических патологий, оказывающих сильное влияние на иммунную систему.
  6. Новорожденные. До полутора лет у маленьких детей серодиагностика по ИФА-методу может показать положительные результаты, если женщины были инфицированы трепонемами в период беременности. В крови малыша в течение года и более циркулируют иммуноглобулины матери.

Цена вопроса

В зависимости от лаборатории цены на специфические тесты методом ИФА варьируются в пределах от 6,1$ до 11,4$. В некоторых диагностических центрах за процедуру взятия крови на анализ берется 2,5$.

Во многих государственных медицинских учреждениях ИФА можно сдать бесплатно. При большой загруженности лабораторий и необходимости получения быстрого результата тест на сифилис лучше сдать в частных лабораториях.

Где сдать анализ

ИФА на выявление сифилиса можно сдать в Инвитро. Стоимость услуг составляет 14$, включая забор крови в процедурном кабинете. Срок выполнения — 7 дней.

Центр CMD также предоставляет услуги по определению венерического заболевания. Стоимость анализа составляет 9,2$. Срок выполнения — до 3 дней. При необходимости лаборанты учреждения могут провести взятие крови на дому.

Пройти исследование на сифилис можно в медицинской лаборатории Гемотест. Цена анализа на сифилис РПГ (реакция пассивной гемагглютинации) составляет 10,3$. Срок выполнения — 1 сутки.

Читайте также:  Симптомы и лечение скрытого сифилиса

Все диагностические центры гарантируют полную анонимность.

Сифилитический тест, основанный на иммуноферментной реакции, позволяет с высокой точностью выявить венерическое заболевание, вызванное трепонемами. Анализ назначается, если неспецифический способ выявления инфекции, показывает отрицательный результат при наличии симптомов у пациента или контактах с зараженными лицами.

Лечение проводится только при наличии положительных результатов, полученных несколькими методами.

Анализ ИФА на сифилис

Анализ ИФА на сифилис способен распознать все виды данного заболевания. Своевременное обнаружение венерической патологии предотвратит развитие возможных осложнений.

За состоянием беременных женщин следят особенно часто. Делают это, чтобы предупредить врожденный синдром сифилиса у ребёнка. Анализ на сифилис пользуется спросом ещё с шестидесятых годов прошлого столетия.

Применение ИФА

Благодаря особому ферменту устанавливается связь между антителом и антигеном. Иммуноферментное анализирование используется для проверки влияния новых медикаментов на организм человека. С его помощью можно выяснить:

  • Какой уровень гормонов присутствует в организме;
  • Есть ли наличие вирусов и бактерий;
  • Существует ли в теле больного патогенная микрофлора, вызывающая воспалительные процессы.

Такое обследование помогает не просто определить наличие возбудителя, но и его масштаб распространения. От выясненного показателя, как правило, зависит дальнейшее лечение. Данный анализ крови на сифилис способен распознать любые формы болезни. Материалом для исследования служит кровь, взятая из вены в утреннее время суток на голодный желудок.

ИФА показывает время заражения инфекцией и её стадию.

Расшифровка анализа

Чтобы понять, как расшифровывают результаты анализа, необходимо понимать, что обозначают те или иные показатели:

  • lgМ — значение показывает то, как долго организм заражён инфекцией;
  • lgА —  показатель говорит о продолжительности заболевания сроком более, чем четыре недели;
  • lgG — фактор свидетельствует о достижении пика болезни.

Окрашивание реактива в желтый цвет свидетельствует о том, что возбудитель присутствует в организме.

Для расшифровки результатов анализа используется специализированное оборудование. Оно определяет плотность взятого материала в сравнении с контрольной пробой. Таким образом, устанавливается итог для любого вида возбудителя заболевания.

Ошибочные результаты

За свою жизнь человек очень часто проходит проверку на сифилис. В случае положительного результата многие впадают в панику. Однако не стоит этого делать, потому что есть вероятность ошибки. В такой ситуации необходимо начать подготовку к повторному анализу.

Причинами для результатов, подтверждающих наличие заболевания, могут быть: хронические болезни у человека, имеющиеся травмы, прошествие малого количества времени после вакцинации. В таких состояниях организм выделяет особые белки. Они помогают ему бороться с различными угрозами. Поэтому некоторые виды анализов распознают их в качестве инородных тел.

Рекомендации

Так как сифилис является опасным заболеванием, медлить с посещением венеролога нельзя, иначе вы подвергнете риску своих близких людей. Пройти обследование нужно половому партнёру пациента и другим членам семьи. Несмотря на отрицательный показатель результатов, лечащий врач все равно назначает курс терапии.

Если вы работаете, то во время осмотров и лечения вам оформят больничный лист, но болезнь в нем будет зашифрована. Не забудьте взять справку о пройденной терапии, предъявляйте ее при следующих медосмотрах.

Во время беременности у многих женщин диагностируется сифилис. Но это не считается поводом для переживаний. В таком состоянии организм подвергнется большому количеству изменений. Полностью перестраивается иммунная система, а также гормональный фон. Постольку, поскольку силы направлены на то, чтобы оградить будущего ребёнка от всевозможных недугов, вырабатываются антитела в умноженном количестве.

Для верной диагностики сифилиса необходимо обратиться к грамотному специалисту. Не расшифровывайте результаты анализа самостоятельно, и уж тем более не занимайтесь самолечением, ведь это подвергает ваше здоровье огромному риску. Не стоит халатно относиться к данной диагностике, так как это чревато негативными последствиями.

Часто задаваемые вопросы

Анализ на сифилис оказался положительным, однако заболевание никогда не наблюдалось.

В первую очередь узнайте у врача какие именно анализы дали такой результат. При скрининговой проверке высока вероятность ошибки. В этом случае пройдите другие тесты с трепонемой. Если результат подтвердился, то, возможно, у вас сифилис в скрытой форме.

Возможно ли заражение партнёра при позитивном результате на сифилис? Безусловно, в данной ситуации есть риск заражения вашего полового партнёра. Он повышается, если половая жизнь регулярна. Поэтому вместе с партнёром нужно пройти полное обследование и сдать все необходимые анализы.

Какое количество времени после терапии должно пройти для повторного анализа? Необходимо выждать три месяца после лечения, а потом сдавать кровь на сифилис.

Почему результаты положительные, несмотря на пройденный курс терапии? Трепонемные анализы всегда дают такой результат после пройденного лечения. По этой причине их не используют в качестве контроля наличия сифилиса. Однако если даже иные виды тестов оказываются положительными, то нужно в течение года через каждые три месяца сдавать кровь на сифилис.

Врач будет отслеживать изменение количества антител в организме. Если их наличие уменьшилось в четыре раза, то наблюдение продолжается ещё полгода. Но когда результаты по прошествии двух лет остаются хотя бы слабоположительными, то диагностируется серорезистентный сифилис.

Как лечить серорезистентный сифилис? Для начала нужно определить, находится ли по-прежнему трепонема в организме человека. Чтобы выяснить это, доктор назначает дополнительные анализы. Если окажется, что первый курс терапии не оказал никакого воздействия, а возбудители так же присутствуют в теле пациента, то больной должен пройти повторный курс. В таком лечение используются антибиотики пенициллиновой группы.

В случае если представленный вид сифилиса возник из-за нарушения функционирования иммунной системы, то болезнь считается вылеченной.

Оцените статью (488 оценок, среднее: 4,56 из 5) Загрузка... Советуем почитать


Смотрите также