Что такое ифа


ИФА анализ - иммуноферментный анализ крови: что это такое? Расшифровка, диагностика и как проводится исследование, принцип метода

Иммуноферментный анализ (ИФА) – это современный способ распознавания огромного количества возбудителей болезней, основанный на способности человеческого организма вырабатывать так называемые антитела в ответ на обнаружение чужеродных веществ – антигенов.

В настоящее время ИФА анализ крови используется:

  • для диагностики множества ЗППП;
  • с целью выявления предрасположенности к тем или иным болезням, обусловленным наследственностью;
  • с целью выявления той или иной стадии заболевания;
  • с целью контроля эффективности лечения.

Так, например, широкое распространение этот метод получил при диагностике следующих заболеваний:

Что касается общемедицинской практики, то в этом случае иммуноферментный анализ крови позволяет:

  • выявить эндокринные патологии, например, такие, как сахарный диабет;
  • оценить вероятность возникновения инсульта или инфаркта;
  • понять, насколько хорошо работают системы организма;
  • выявить наличие аллергических реакций;
  • оценить работу иммунной системы;
  • оценить состояние репродуктивных функций организма.

Материалом для исследования в данном случае может являться как венозная кровь, так и жидкость, находящаяся в стволе спинного мозга, секрет стекловидного тела, околоплодные воды.

Иммунная и ферментативная реакции

Как явственно следует из названия, анализ крови ИФА включает в себя несколько составляющих, а именно – иммунную и ферментативную реакции. Иммунная реакция позволяет связать клеточные элементы и болезнетворные микроорганизмы, а ферментативная дает возможность визуализировать и оценить результат предыдущей реакции.

Рассмотрим каждую реакцию более подробно.

Что такое иммунные реакции?

Иммунными называются специфические реакции, позволяющие связать антиген с антителом и создать иммунный комплекс. Что же это значит? В первую очередь, необходимо понимать, что любая клеточная поверхность содержит молекулы, содержащие данные о клетке, называющиеся антигенами и подразделяющимися на:

Индивидуальные антигены, несмотря на некоторую схожесть, имеют и множество различий. Они имеются у одного конкретного организма и никогда не повторяются в других. Видовые антигены можно обнаружить в организмах тех или иных видов живых существ. Так, например, обезьяны, лошади или собаки имеют свой, ни на что не похожий антиген. Именно поэтому антигены этого типа используются иммунной системой для распознавания своих и чужих клеток, что, собственно говоря, и лежит в основе иммуноферментного анализа крови.

Как распознаются антигены? Здесь все достаточно понятно. Говоря простым языком, клетка, являющаяся иммунной, отлавливает клетку, вызвавшую у нее «подозрение», и сравнивает ее антиген с имеющимся в памяти описанием. Если антиген вызвавшей сомнение клетки соответствует ему, то иммунная клетка «отпускает» ее и отправляется дальше. Если же описание отличается, то ответ организма на угрозу один – уничтожение. Причем распознавание «врага» в данном случае равняется почти 100%.

Что собой представляет антитело?

По своей сути антитело, имеющее огромное значение при использовании метода ИФА, является специальной молекулой, существующей на поверхности иммунной клетки и позволяющей последней связаться с антигенами сомнительного микроорганизма. Именно антитело служит проводником данных, позволяющих оценить угрозу, и именно оно получает сигнал о том, какой является сомнительная клетка – своей или чужеродной. В случае, если захваченная клетка является «своей», антитело выпускает антиген и высвобождает его «хозяйку».

Для чего нужен иммунный комплекс?

Как уже говорилось несколько ранее, при распознавании чужеродной клетки антитело не выпускает антиген чужеродной клетки. Наоборот, посылая определенные сигналы, оно зовет на помощь «подкрепление». В данном случае речь идет о том, что все остальные антитела, расположенные в другой части клетки, являющейся иммунной, начинают движение к участку, сигнализирующему об опасности, и связывают себя с захваченным антигеном, фиксируя его и окружая со всех сторон. После того, как антиген будет полностью окружен, начинается уничтожение чужеродного микроорганизма.

Антитела

Антитела, которые позволяет выявить ИФА диагностика, представляют собой белковые структуры – иммуноглобулины, подразделяющиеся на несколько видов:

Однако для диагностики берется лишь один вид антител, являющийся наиболее специфичным в отношении искомых микроорганизмов. Как правило, подобными антителами являются разновидности IgG и IgM.

Что такое ферментативные реакции?

Ферментативными называются реакции, позволяющие одно вещество превратить в другое. Материал, на который воздействуют в ходе исследования крови методом ИФА, носит название «субстрат», а материал, получаемый под воздействием фермента, носит название «продукт реакции». Причем особенности данного процесса таковы, что воздействовать тот или иной фермент может исключительно на конкретный субстрат. Подобное свойство фермента определять «свой» субстрат носит название «сродство». Исходя из вышесказанного, становится предельно понятно, что с каждым ферментом связана исключительно одна, специфичная исключительно для него реакция.

При этом стоит отметить, что метод ИФА диагностики подразумевает использование не более десятка реакций ферментативного типа, вследствие которых образуются колорированные вещества, позволяющие использовать для определения концентрации возбудителя метод химической реакции – колориметрию.

Что такое колориметрия?

Колориметрия – это способ измерения концентрации вещества в зависимости от того, какой является плотность окраски раствора, подразумевающий использование специально предназначенного для этого прибора – колориметра.

Причем в этом случае возможны две вариации зависимости плотности окраски раствора от его концентрации:

  • прямо пропорциональная;
  • обратно пропорциональная.

В первом случае плотность окраски раствора увеличивается при увеличении его концентрации, во втором же плотность окраски раствора снижается при увеличении его концентрации. Технически это осуществляется следующим образом. Берутся несколько растворов, обладающих определенной концентрацией вещества, производятся замеры их плотности, и далее выстраивается график зависимости плотности окраски раствора от его концентрации. Затем измеряется плотность окраски испытуемого раствора, и по выстроенному графику находится величина его концентрации, находящаяся в соответствии с замеренной плотностью окраски раствора.

Причем использующиеся для замера колориметры после единичной калибровки способны сами отстроить кривую калибровки, остающуюся в их памяти и позволяющую им работать в режиме автомата. Стоит отметить, что в ИФА крови, как правило, используются такие ферменты, как авидин, пероксидаза и щелочная фосфотаза.

Способы проведения ИФА

В зависимости от способа проведения исследование ИФА подразделяется на прямое и обратное. Рассмотрим каждый из способов более подробно.

Что такое «прямой иммуноферментный анализ»?

Прямой иммуноферментный анализ подразумевает использование антител к определяемому антигену, соединенных специальной меткой, являющейся субстратом реакции, носящей ферментативный характер. Исходя из этого, прямой ИФА — это анализ забранного у пациента биологического материала, помещенного в лунки с последующим добавлением антител к антигену того или иного заболевания.

Таким образом, при выявлении сифилиса в лунки будут добавлены антитела против сифилитических антигенов, полученные на производстве и закупленные лабораторией. Полученная смесь оставляется на время, требуемое для того, чтобы антитела захватили «свой» антиген. Причем, как было сказано ранее, антитела, запускающие реакцию, связываются и со специфической меткой.

Ввиду того, что антител добавляется много, далеко не все они смогут захватить антиген в случае его нахождения в пробе. Для того, чтобы избавиться от лишних антител, жидкость из лунок выливается. Антитела же, связавшиеся с антигенами, остаются на их поверхности. Затем приступают ко второй части анализа на ИФА – ферментативной реакции. В лунки добавляется ферментный раствор и оставляется в них на полчаса либо на час. Вполне естественно, что добавленный фермент аналогичен метке, связывающей антитела. В конце реакции в лунке оказывается вещество, приобретшее соответственный оттенок.

Окрашенное вещество исследуется колориметром. Причем ввиду того, что метка, имеющаяся в лунке, уже связалась с антителами, концентрация окраски образовавшегося там вещества будет соответствовать концентрации антител, аналогичной по размеру количеству антигенов. Таким образом, анализ позволяет понять, сколько выявляемых микроорганизмов или гормонов содержится в забранной пробе.

Что такое непрямой иммуноферментный анализ?

Непрямой анализ крови на ИФА производится в 2 этапа. На первом этапе используются антитела без меток, добавляемые к требуемым определения антигенам, а на втором – антитела с метками к первым антителам без меток. Таким образом удается осуществлять двойной контроль реакции:

  • антитела осуществляют связь с антигеном;
  • следующие антитела связываются с антителами, связанными с антигеном.

Осуществляется анализ следующим образом. У пациента забирается биологический материал, вносится в лунки и оставляется до того момента, пока антигены не приклеятся к их поверхности. Затем к нему добавляются антитела без меток и оставляются на время, требуемое для того, чтобы они связались с имеющимися антигенами, создав требуемый иммунный комплекс. После того, как процесс связывания будет окончен, излишние антитела удаляются посредством выливания жидкости из лунок.

По окончании этого процесса берутся следующие антитела (помеченные), добавляются в лунки и оставляются на время, требуемое для образования комплекса из 2-х антител и антигена. Затем раствор также выливается (с целью удаления излишних антител).

На следующем этапе непрямого анализа крови методом ИФА вносится фермент, превращающий «метки» в вещество, имеющее цвет. Развитие окраски в данном случае занимает от пяти минут и до получаса. После проявления окраски производят колориметрию и определяют концентрацию раствора, имеющего окраску. Ввиду того, что данная величина в указанном случае соответствует концентрации антител с метками, которая равна концентрации антигена, в конце исследования можно получить представление о количественном содержании возбудителя заболевания.

Как расшифровываются анализы крови методом ИФА?

В современном мире медицины расшифровка анализа крови методом ИФА позволяет не только диагностировать заболевание, но и понять, в каком состоянии оно находится по типу антител, присутствующих в данный момент в организме. Таким образом, всего один анализ позволяет определить острую или хроническую стадию течения болезни. Так, например, присутствие антител IgM говорит о том, что заболевание находится в стадии острого течения.

Подобный тип антител возникает сразу же после заражения и находится в организме только что заболевшего человека. Затем антитела IgM исчезают. Таким образом, при наличии этих антител требуется сразу же назначить лечение.

При наличии антител Ig G, появляющихся в организме после того, как человек выздоровел, и находящихся в нем постоянно, необходимости в лечении нет ввиду того, что они лишь говорят о процессах, приобретших хроническую форму. Антитела подобного вида являются своеобразным маркером того, что больной когда-то перенес это заболевание и остался его носителем на всю жизнь.

Если же в биологическом материале обнаруживаются и антитела IgM, и Ig G, расшифровка иммуноферментного анализа будет говорить о том, что у больного произошло обострение хронического заболевания, требующее проведения соответствующей терапии. Существует и еще один типа антител – Ig А, который говорит об острой стадии заболевания. Такие антитела сохраняются в организме на протяжении 4-5 недель и исчезают после выздоровления. Наличие подобных антител говорит о том, что больной является потенциальным переносчиком того или иного заболевания.

venerologiya.ru

Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

Метод иммуноферментного анализа является современным методом лабораторного исследования крови на присутствие в ней антител к вирусам и антигенов к возбудителям болезни. Этот метод способен не только выявить этиологию, но еще и определить стадию заболевания. Результаты анализа имеют качественный и количественный показатель.

Для чего проводиться иммуноферментный анализ:

  • обследования крови(общий анализ крови) на присутствие в ней аутоиммунных болезней;
  • обследование больного на онкомаркеры;
  • возможность исследовать гормональный состав крови;
  • поиск антигенов к инфекционным и венерологическим болезням;
  • поиск антител к вирусным инфекциям.

Преимущества иммуноферментного анализа состоят в том, что он гарантирует высокий уровень специфичности результатов и имеет высокую чувствительность (больше 90 %) к возбудителям инфекций. ИФА является доступным методом диагностики, который выполняют в каждом медицинском центре. Также, с помощью такого метода можно определить не только заболевание, но и следить за процессом его развития, сравнивая количество выработанного в крови белка, в разные промежутки время.

Единственным недостатком ИФА, пожалуй, является то, что с его помощью нельзя определить возбудителя инфекции, а можно только выявить иммунный ответ на этот возбудитель.

Основные термины иммуноферментного анализа (ИФА)

Сначала разберемся с некоторыми понятиями, чтобы разобраться в принципе проведения лабораторного исследования.

Иммунный комплекс – это комплекс антител и антигенов, присутствующих в крови, и участвующих в иммунном процессе.

Антигены – это вещества, которые имеют органическое происхождение и образовываются в результате той или иной болезни в клетках организма. Причиной этому может стать аутоиммунное или онкологическое заболевание. Также, антигенами могут быть вещества различных возбудителей инфекционных заболеваний.

Авидность антител — это показатель прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении.

Антитела (иммуноглобулины) – это специальный белок, который вырабатывают лимфоциты, то есть иммунные клетки, при попадании в организм человека бактерий, вирусов или грибов (инфекционного патогена). Существуют иммуноглобулины пяти видов: A, E, M, G, D. Они отличаются друг от друга массой, формой, участием в инфекционном процессе, периодом полураспада, сроками образования с момента заражения.

Самый большой молекулярный вес имеет иммуноглобулин IgM (пентамер), он весит 950000 дальтон, в то время как остальные имеют вес в пределах 150 – 200 000 дальтон. Из-за своих размеров IgM не проходят через плацентарный барьер. В сыворотке из крови основную массу занимают иммуноглобулины IgG, их процентное соотношение занимает приблизительно 80 %. А самую малую часть в сыворотке занимают антитела IgE – 0,003%. В инфекционном процессе участвуют иммуноглобулины IgG, IgМ, IgА. В то время, как IgE являются результатом аллергических реакций. Такие белки как IgD принимают участие в формировании местного иммунитета и образовываются в лимфоузлах и миндалинах.

Основы метода иммуноферментного анализа

Основы метода иммуноферментного анализа

Существует несколько видов ИФА, среди них прямой, непрямой, конкурентный и метод блокирования. Хотя на практике, лаборанты чаще всего используют твердофазный гетерогенный иммунный анализ, который называется ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Принцип проведения иммуноферментного анализа проявляется в реакции антитела и антигена, при которой образовывается иммунный комплекс – антиген-антитело. Такая реакция приводит к тому, что ферментная активность меток на поверхности антител изменяется.

Чтобы разобраться в этом, рассмотрим этот процесс поэтапно.

Первый этап. На этом этапе лаборант, проводящий исследование, размещает на поверхность лунок планшета очищенный антиген инфекционного возбудителя. Затем, к возбудителю добавляют сыворотку крови больного, что провоцирует специфическую реакцию между антителом в крови и антигеном. Это полученное соединение и участвует в следующем этапе эксперимента.

Второй этап. На втором этапе исследования происходит образование иммунных комплексов, которые являются реакцией между антигеном, полученным на первом этапе, и конъюгатом, то есть иммуноглобулином, помеченным ферментом пероксидазы. При этом добавляется специфический хромоген. В результате реакции получается окрашенное соединение в лунке. Интенсивность цвета при этом зависит от количества иммуноглобулинов, содержащихся в крови пациента.

Третий этап. На третьем этапе лаборанты обычно занимаются оценкой результатов исследования. Для этого проводится фотометрирование с использованием спектрофотометра, сравнение плотности биологического материала с плотностью проб, также, проводится математический подсчет результатов. Уровень иммуноглобулинов в крови зависит от плотности лунки планшета. В практике чаще всего применяют 96 луночные планшеты.

Когда происходит измерение оптической плотности (сокращенно ИП) крови, то проводят подсчет антител в одной единице объема. После чего полученный результат сравнивают с контрольным материалом. Важно помнить о том, что для каждого метода исследования устанавливаются свои показатели, с помощью которых учитываются референтные значения теста. Это показатели патологий и норм. Поэтому, нужно помнить об этом в каждом конкретном случае. Нельзя проводить интерпретацию результатов одного исследования в иное. Также, нельзя и сравнить результаты отдельно взятых лабораторий.

Заболевания выявляющиеся ИФА диагностикой

С помощью иммуноферментного анализа, можно выявить наличие в организме таких заболеваний:

1) Инфекционные болезни

  • вирус иммунодефицита человека,
  • вирусные гепатиты А, В, С, D, E и другие,
  • цитомегаловирусные инфекции,
  • инфекции герпеса первого и второго типа,
  • токсоплазмоз;
  • инфекцию краснухи,
  • мононклеоз, инфекция Эпштейн-Барра,
  • инфекцию кори,
  • бруцеллез,
  • псевдотуберкулез,
  • салмонеллез,
  • дизентерия или шигеллез,
  • аспергиллез,
  • энцефалит,
  • паразитозы, например, лямбиоз, трихинеллез, токсокароз, описторхоз и некоторые другие,
  • инфекции, передающиеся половым путем: сифилис, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз,
  • хеликобактерная инфекция.

2) Показатели состояния человеческого иммунитета и маркеры аутоиммунных болезней. 3) Онкологические заболевания (хронический гонадотропин, простатспецифический антиген, альвеомуцин, фактор некроза опухоли, раково-эмбриональный антиген и другие). 4) Эндокринные заболевания.

5) Нарушения работы репродуктивной системы.

В список включены не все заболевания, которые могут быть диагностированы с помощью ИФА, этот перечень можно продолжать.

Исследования

Забор материала для исследования методом иммуноферментного анализа.

Для исследований методом ИФА у пациентов могут быть взяты спинномозговое вещество, жидкость стекловидного тела, околоплодные воды, слизь, выделенная из цервикального канала или уретры, а также мазки. Но самым распространенным образцом для исследований является все же кровь пациента.

Забор образцов крови проводится утором, натощак. При этом, нельзя принимать пищу или какие-либо медицинские препараты. Что же касается разного рода терапий, которые включают антибактериальное лечение, лечение от вирусов, паразитов и другие, то их необходимо прекратить не менее, чем за две недели до сдачи анализа.

Результаты иммуноферментного анализа обычно изготавливаются в течение суток. Задержек происходить не должно, хотя при больших скоплениях сывороток, лаборанты могут просто не успеть сделать анализ вовремя.

Результаты исследований методом иммуноферментного анализа

Результаты исследований

Оценивая результаты проведенных исследований на выявление каких-либо инфекций, особое значение имеет количество иммуноглобулинов, обнаруженных в крови, а также, их вид. От этих показателей зависит присутствие в организме инфекции или же ее отсутствие. Также, сравнив количественные и качественные показатели, лаборант может определить предполагаемую стадию развития болезни, а также отличить острую форму заболевания от хронической формы. Оценивают также и наличие в организме человека активного вируса, что проявляется при обостренной хронической или острой форме заболевания. Приблизительное время, через которое происходит появление в крови иммуноглобулинов Ig.

Дело в том, что IgМ являются самыми быстро появляющимися антителами. Обнаружение их происходит уже через 1 – 3 недели после процесса инфицирования организма, это является признаком острой фазы заражения вирусом человека.

Также, подобные антитела можно обнаружить в крови пациента при обострении протекания хронической болезни. Количество антител IgМ сохраняется около 3 месяцев с момента их образования, потом они постепенно начинают исчезать. Хотя случаются и исключения. Например, некоторые пациенты после окончательного выздоровления сохраняют количество антител в своей крови. Так, циркуляция иммуноглобулинов проходит через несколько лет после заражения.

У таких пациентов необходимо проверять положительные показатели на присутствие IgМ антител, поскольку возможны ситуации, когда система тестирования допускает ошибку и выдает ложно положительный результат. Такие ситуации очень часто случаются с беременными женщинами.

Что же касается появления антител IgA, то они способны образоваться через 2 или 4 недели после того, как организм подвергся действию инфекции. Но обнаружить антитела можно только через месяц. Именно тогда количество их достигает оптимального для выявления числа.

Антитела IgA вырабатываются клетками лимфоузлов, селезенки, а также слизистых оболочек. Подобные иммуноглобулины способны концентрироваться на поверхностях слизистых оболочек органов, где и выполняют свою защитную функцию, участвуя в местном иммунитете человека.

Появление антител IgG прослеживается тестирующими системами уже на 4 неделе прогрессирования инфекционного процесса в организме. Титр таких иммуноглобулинов постепенно может увеличиваться в течение 2 месяцев. После выздоровления небольшой их титр сохраняется в организме и поддерживает иммунитет. Такие болезни как хламидиоз, трихомониаз и микоплазмоз характеризируются невысоким уровнем антител IgG в крови, что объясняется отсутствием стойкого иммунитета к таким инфекциям.

Классы

Варианты выявления в крови человека иммуноглобулинов разных классов.

  • Выявление антител IgM, которое проводится изолированно, свидетельствует о первичном инфицировании человека.
  • Обнаружение в сыворотке крови одновременно антител класса IgM и IgG происходит также при первичном инфицировании, произошедшем в последние 2-3 месяца. Или же такое сочетание может быть признаком обострения хронического заболевания.
  • Таким образом, такие результаты при беременности не всегда говорят о первичном заражении.
  • Обнаружение изолированно антител класса IgG может быть признаком иммунитета к данной инфекции, хотя также это может указывать и на хроническую болезнь. При наличии хронической формы заболевания большую роль играет количество антител и их динамика. Такие исследования проводят с интервалом примерно в 2 недели.
  • Когда в крови присутствуют сразу антитела IgA и IgM, то это может говорить о первичном инфицировании. Обнаружение IgA изолированно тоже является последствием первичного поражение инфекцией организма.

При обнаружении антител IgA вместе с антителами IgG означает активацию хронической формы инфекции. Иммуноглобулины появляются в крови через 2 недели после обострения болезни. Авидность антител является показателем прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это дополнительный этап в диагностике методом ИФА.

Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности. А также, можно оценить все риски внутриутробного инфицирования ребенка.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении. Высокая авидность антител свидетельствует о хронической форме болезни, либо же является признаком стойкого иммунитета.

Особенности появления антител в крови грудных детей

Если у детей в возрасте до года или до 1,5 лет в крови обнаружены материнские IgG, то это значит, что антитела проникли в организм ребенка через плаценту во время вынашивания плода. Этот признак не может свидетельствовать об инфицировании малыша, а является передавшемся от матери иммунитетом к инфекции.

Но, если в маленьком организме обнаружено иммуноглобулины класса IgM, которые из-за своего веса не могут проникнуть через плаценту к малышу, то это является признаком инфицирования. Заражение могло произойти уже после рождения или же в период внутриутробного развития.

Количественный метод иммуноферментного анализа.

Результат диагностики заболеваний методом ИФА представлен в определенных единицах измерения:

  1. ОП – оптическая плотность образца – это уровень концентрации антител в одной единице объема. Чем выше этот показатель, тем больше находится иммуноглобулинов в крови.
  2. Некоторые результаты ИФА подразумевают наличие такой единицы как коэффициент позитивности – КП. Это тоже обозначение плотности образца.
  3. Единицы концентрации иммуноглобулинов выражены в нанограммах, миллилитрах или же в нг/мл.
  4. Титры сывороток крови выражены так: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и тому подобное.
  5. Титры, при которых происходит диагностирование заболевания для разных инфекций разные.
  6. В результатах исследования присутствуют такие символы : «-», «+»,«?» (+, ++, +++, ++++).
  7. Качественная же оценка подразумевает наличие только одного пункта из двух: положительно либо отрицательно.

Правильность интерпретации результатов данного исследования зависит от квалификации врача, поскольку кроме специалиста никто не имеет права назначать лечение.

Специалисты оценивают количество антител в крови, их вид и концентрацию.

Также, необходимо помнить о том, что нельзя сравнивать результаты разных методов исследования, либо же результаты тестов, полученные в разных лабораториях. Поскольку для любого метода диагностики существуют свои показатели и единицы измерения.

Сравнивание результатов допустимое только в пределах одной и той же лаборатории.

Видео метода иммуноферментного анализа ИФА

simptomlecheniye.ru

Что такое анализ крови на ИФА

Развитие современной медицины в мире диагностики не перестает удивлять своими достижениями, и теперь врачу нет необходимости высказывать предположения о вероятном диагнозе, опираясь лишь на косвенные признаки. Создание и введение в мир лабораторных исследований иммуноферментного анализа крови (ИФА) позволяет быстро и точно определить не только наличие возбудителя, но и многие другие характеристики заболевания.

История создания и развития ИФА

Данный метод исследования крови стал применяться в практической медицине еще в середине прошлого столетия – где-то в 60-х годах. Изначальной его целью были научные исследования в области гистологии, которые ограничивались поиском и изучением клеточной антигенной структуры биологических видов. Анализ крови методом ИФА основан на взаимодействии родственных антигенов (АГ) и специфических антител (АТ), с формированием комплекса «антиген-антитело», определяемого ферментом.

Такой феномен подтолкнул ученых к решению, что способ можно применять для распознавания белковых соединений различных классов, образующихся в сыворотке крови при попадании в организм возбудителя. Из-за своей непосредственной вовлеченности в функционирование иммунной системы эти соединения получили название иммуноглобулины (ИГ, Ig), а открытие стало величайшим прорывом в лабораторной диагностике.

При этом активно использовать этот высокочувствительный метод стали лишь в 80-х годах, и доступен он был только в узкоспециализированных медицинских учреждениях. Самыми первыми получили возможность пользоваться иммуноферментными анализаторами станции и центры переливания крови, венерологические и инфекционные лечебные заведения. Это было связано со стремительным распространением «чумы XX века» – СПИДа, и требовалось срочное принятие диагностических и терапевтических мер.

Возможности методики

Область применения анализа крови на ИФА довольно широка – на данный момент невозможно и представить, насколько бы усложнились поиски причины множества заболеваний. Такое исследование теперь применяется практически во всех медицинских отраслях, даже в онкологии. Хоть для неосведомленных это сложно понять, но в отдельных случаях проведя его, удалось спасти жизнь пациентам, обнаружив опухоль на ранних стадиях.

Важно! ИФА – анализ крови, который показывает маркеры, характерные для некоторых злокачественных процессов, что позволяет обнаружить заболевание на том временном этапе, когда никакому другому способу это неподвластно.

В современных диагностических центрах, лабораторные обследования представлены не только онкомаркерами – они снабжены внушительным арсеналом панелей для проведения данной диагностики. С их помощью можно определить множество патологических состояний, таких как гормональные отклонения и инфекционные процессы различного происхождения.

Кроме этого, проведение и расшифровка анализа крови ИФА даст возможность отследить действие медицинских препаратов на организм больного человека и даже животного. Последнее широко применяется в ветеринарных клиниках, помогая сохранить здоровье нашим домашним питомцам либо кормильцам, обеспечивающим стабильное поступление мясной, молочной продукции и незаменимых в рационе яиц.

Так, в результате забора всего нескольких миллилитров венозной крови и ее диагностики методикой ИФА, врач, описав материалы исследования, сможет определить:

  • гормональное состояние, включающее биологически активные вещества половых и щитовидной желез, а также надпочечников;
  • наличие бактериальной и вирусной инфекции (гепатит В и С, сифилис, герпес, хламидиоз, туберкулез, мико- и уреаплазмоз, ВИЧ, TORCH) и другие заболевания данной природы;
  • признаки жизнедеятельности возбудителей патологического процесса, завершившегося выздоровлением и перешедшего в стадию образования антител (иммунного ответа).

Такие комплексы гораздо проще распознаются и ликвидируются клетками иммунитета. Остаточные явления в виде антител во множественных случаях содержатся в крови пожизненно, что практически сводит риски повторного заражения к нулю.

Разновидности иммуноглобулинов

Существует несколько видов антител, причем каждый из них вовлекается в процесс иммунного ответа на определенном этапе. К примеру, первыми в ответ на попадание АГ в организм образовываются иммуноглобулины класса М (IgM). Самые высокие их показатели наблюдаются в первые дни заболевания.

Виды используемых при ИФА иммуноглобулинов

Затем иммунная система запускает в плазму ИГ класса G (IgG), ответственные за полное уничтожение антигенов и выздоровление больного. Позже они так и продолжают находиться в крови, тем самым подготавливая иммунитет к повторному попаданию идентичного возбудителя. По такому принципу работает вакцинация. При введении ослабленных антигенов патологических микроорганизмов, в плазме появляется и остается циркулировать много иммуноглобулинов.

И, впоследствии, если происходит патогенный контакт, они быстро справляются с инфекцией, уберегая организм от угрозы здоровью. IgА в большом количестве сосредоточены в слизистых оболочках, преграждая попаданию внутрь организма болезнетворных вирусов и бактерий. IgЕ ответственны за уничтожение паразитарных инфекций, а также существует множество других иммуноглобулинов, участвующих в ответе иммунитета.

Основными интересующими объектами для лабораторной диагностики считаются Ig классов M, G и A. По уровню их концентрации можно определить стадию заболевания и узнать, какими инфекционными болезнями человек болел в своей жизни. Например, можно проверить была ли в анамнезе ветряная оспа или краснуха. Врачу, чтобы узнать присутствует ли определенный вид АТ или АГ в организме пациента или концентрацию какого-либо гормона, нет необходимости назначать множественные лабораторные обследования – достаточно выписать направление на ИФА.

Иммуноферментный анализ крови на паразитов и других микроорганизмов – вредителей здоровью организма дает возможность не только установить наличие возбудителей, но и расскажет об их численности в плазме крови пациента. Таким образом, подобное исследование позволяет произвести и качественный и количественный анализ патогенных микроорганизмов, обнаруженных в сывороточном материале.

Уровень концентрации возбудителя в значительной мере оказывает влияние на развитие инфекции и скорость выздоровления, поэтому качественная оценка считается не менее важной, чем количественная. Ей отводится далеко не последняя роль как при лечении детей, так и взрослых. Но как же получается, что ИФА удается распознавать такой обширный диапазон микроорганизмов, которые паразитируют в теле человека и животных, принося вред и снижая качество жизни?

Методика исследования строится на нескольких вариантах (прямой и непрямой – конкурентный и неконкурентный) выполнения поставленных задач, причем каждый из них предназначен для определенных целей. Такой подход позволяет производить целенаправленный поиск, и в кратчайшие сроки выявлять причину той или иной патологии. Для обнаружения Ig разных классовых категорий применяется 96-луночный планшет (полистироловая панель), а в его лунках расположены сорбированные рекомбинантные белки. Они исполняют роль антигенов, и на начальном этапе находятся в твердой фазе.

При попадании в лунку с плазмой крови, антигены или антитела идентифицируют в связи со своей направленностью объект, и формируют комплекс (АГ – АТ). Данное образование закрепляется ферментным соединением (коньюгатом), который впоследствии проявится измененным окрашиванием лунки. ИФА производится на специфических тест-системах, изготовленных в профильных лабораториях и укомплектованных полным набором реагентов.

Данный анализ можно выполнять на вошерах – промывных аппаратах и считывающих спектрофометров, но они требуют ручного труда. Безусловно, лаборанту в несколько раз удобнее и быстрее осуществлять все манипуляции на полностью автоматизированных приборах. При их использовании сотрудники лаборатории освобождаются от большого объема монотонной деятельности – промывания, закапывания и остальной рутины, но не все лечебные учреждения могут себе позволить такую дорогостоящую аппаратуру

Поэтому многие больницы и диагностические заведения продолжают осуществлять ИФА по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация материалов исследования исключительно компетенция специалиста лабораторной диагностики – только ему могут рассказать результаты о специфике и тонкостях протекания заболевания. При этом врач должен обязательно учесть возможность получения ложноотрицательных или ложноположительных ответов.

Расшифровка материалов

Итогом качественной иммуноферментной диагностики должно стать однозначное заключение – найден искомый микроорганизм или нет в данном образце крови. Количественный анализ будет указывать на уровень концентрации и может выражаться двумя способами – значением в цифрах либо количеством знаков «+».

Анализируемые показатели

В процессе исследования производится тщательное изучение основных иммуноглобулинов, вовлеченных в иммунный ответ, таких как:

Анализ крови на криоглобулины
  • IgM – обнаружение данного класса означает развитие острой формы инфекционного заболевания. Отрицательный результат по поиску IgM может быть как свидетельством отсутствия искомого возбудителя, так и перехода болезни в хроническое течение.
  • IgА – определение этого класса при отсутствии IgM в большинстве случаев сигнал о хронической либо скрытой форме развития инфекционной болезни.
  • IgM и IgА (одновременное наличие) – положительные результаты на оба вида свидетельствует о самом пике острой формы патологии.
  • IgG – его наличие указывает на трансформацию заболевания в хроническую форму либо на выздоровление и формирование иммунитета к определяемому агенту.

Появление и накопление определенного класса ИГ происходит на разных временных этапах. Так, к примеру, первыми появляются IgM, приблизительно на 5 день от попадания возбудителя. ИГ находятся в крови около 5–6 недель, и затем постепенно пропадают. В это время они доступны к определению посредством ИФА. Ориентировочно через 3–4 недели от начала болезни появляются IgG, которые впоследствии могут оставаться на протяжении нескольких месяцев. Но в анализе их не всегда удается обнаружить.

IgА образуются в крови в период 2–4 недели, при этом 20% их содержится в сыворотке, а 80% – в секрете слизистых оболочек. Как правило, эти иммуноглобулины пропадают на протяжении 2–9 недель, что свидетельствует об уничтожении возбудителя и выздоровлении больного. Если же ИФА все же показывает наличие IgА, то это сигнализирует о переходе процесса в хроническую форму.

Варианты результатов анализа

В зависимости от полученных данных, ответы ИФА могут быть выданы на бланке в виде таблицы с полным списком всех АТ и АГ и указанием положительной либо отрицательной реакции. В определенных ситуациях будет выведено количественное значение – резко положительный, положительный, слабоположительный или отрицательный результат. Второй вариант указывает на количество содержащихся АТ в изучаемом образце крови.

Варианты интерпретации материалов ИФА

Кроме вышеперечисленных значений, в процессе ИФА исследуется еще один количественный параметр – индекс авидности АТ, исчисляющийся в процентах. Он показывает, сколько длится заболевание – то есть чем выше показатель, тем больше времени идет развитие патологии.

Альтернативный способ ИФА

Иммуноферментный анализ крови – достаточно известная и распространенная диагностика. Возможно, о ней никогда и не слышали некоторые, но существует одна еще менее известная широкому кругу людей разновидность данного исследования, при котором берется образец не крови. Эта методика называется анализ кала на скрытую кровь, и во многих случаях она позволяет избежать дополнительных изнуряющих процедур, к тому же еще сопровождающихся неприятными ощущениями.

Анализ ИФА на скрытую кровь (молекулы гемоглобина) дает возможность обнаружить кровотечение органов пищеварительной системы, даже незначительное, признаки которого в стуле больного, как говорится, невооруженным глазом не найти. Иммуноферментный анализ скрытой крови в испражнениях человека за короткое время способен показать язвенную болезнь, полипоз, дивертикулез, опухоли, которые на ранних стадиях не сопровождаются определенной симптоматикой.

На сегодняшний день созданы тысячи разновидностей тест-систем иммуноферментной диагностики, которые предоставляют возможность находить АТ и АГ огромного списка патологий. Поэтому данный анализ применяется почти во всех отраслях медицины, для любой возрастной категории. А абсолютная безвредность позволяет прибегать к нему и при беременности, и для диагностики ослабленных пациентов.

diametod.ru

Что такое ИФА? Важность анализа в диагностике и лечении инфекционных, вирусных и паразитарных болезней

Для комплексной оценки состояния здоровья человека и защитных свойств его организма врачи назначают выполнение иммуноферментного анализа кровяной плазмы (ИФА).

Это обследование предназначено для выявления инфекций, аутоиммунных, гематологических заболеваний, разных типов вирусов иммунодефицита. Разберемся, что такое ИФА анализ, и какие методики применяются для исследования.

Как берут пробу?

Показания к диагностике

Как уже отмечалось, ИФА – это лабораторное исследование, во время которого выявляются антитела и антигены в кровяной пробе. Оно может применяться для определения количества гормональных веществ, иммуноглобулинов и иммунологических соединений.

Показания для иммуноферментного обследования:

  • Диагностика аллергических болезней;
  • Определение заболеваний вирусного характера: цитомегаловирус, вирус ВЭБ, гепатиты (ВГС), герпес (ВПГ), туберкулез и пр.;
  • В гинекологии: при беременности, или если пациентка не может забеременеть;
  • Выявление инфекционных поражений, которые передаются через половой контакт: сифилис, уреаплазма, хламидии, трихомонады, микобактерии и микоплазмы;
  • Уточнение диагноза СПИД;
  • Диагностика эпидемического паротита;
  • Для определения ВИЧ в иммуноблоттинге (иммуноблот – метод выявления антител к ВИЧ);
  • Снижение уровня фибриногена;
  • Постановка онкологических диагнозов в клинике;
  • Контроль действенности лечения, в том числе и после инфаркта;
  • Определение количества тех или иных гормонов;
  • Комплексное обследование перед хирургическим вмешательством.
Определение показаний

Механизм биохимии ИФА основывается на обследовании крови на предмет присутствия конкурентных иммуноглобулинов, являющихся специфическими пептидными антителами – бета-амилоидами. Эти компоненты синтезирует иммунная система, когда в организм проникают антигены – несвойственные человеку микроорганизмы. Эти элементы вступают в связь с возбудителями инфекций и нейтрализуют их.

Как проводится анализ крови на ИФА?

Главным отличительным признаком иммунных антител считается их специфичность. За счет таких качеств иммуноглобулины формируют комплексные соединения из антител и антигенов, вступая в связь с конкретными антигенами.

При изучении крови в лаборатории на ИФА данные соединения исследуются по качеству и количеству. Чтобы провести такое обследование, часто применяется человеческая кровь. В качестве биоматериала подходят и околоплодные воды, спинномозговой секрет, наполнение стекловидного тела.

Обычно у пациента берут пробу крови из вены. Человек приходит в диагностический центр натощак (перед этим не есть минимум 10 часов). Если обследуемый употребляет медикаменты, то это должен знать врач, так как отдельные лекарства влияют на результаты. Еще на корректность ответов способны повлиять спиртные напитки и наркотики.

Преимущества исследования крови методом ИФА

Данная методика имеет довольно высокую специфичность и чувствительность, которая сейчас составляет больше 95 процентов.

Специальные системы и тесты для диагностики иммуноферментного состояния помогают достоверно обнаружить большой перечень инфекций: гепатитные вирусы, ВИЧ, герпесные заболевания, цитомегаловирусные инфекции, токсоплазмозы и пр.

Проба из вены

Благодаря реакции ИФА также эффективно определяется присутствие антител по классификации: IgG, IgA, IgM. Данные агенты вырабатывает организм в случае возникновения в нем инфекции, они борются с возбудителем. Антитела можно выявить во время взаимодействия с некоторыми средствами, содержащими специальные антигены. Они формируют с защитными телами прочные соединения, которые обнаруживаются в лабораторных условиях.

Методика основана на принципе воздействия иммунного сорбента на появившиеся антитела. С учетом того, какие именно применяются антитела, тест по микробиологии определяет в образце крови либо независимые антитела, либо специфические частицы какого- то конкретного класса. В качестве биоматериала лучше всего применять венозную кровяную плазму или сыворотку.

Для определения болезней венерического характера применяется три класса защитных иммуноглобулинов: M, A, G. За счет того, что каждая категория вырабатывается в своем алгоритме, при помощи ИФА можно обнаружить инфекцию на различных стадиях и проследить за темпами прогрессирования болезни.

Последовательность синтеза иммуноглобулинов

Иммуноглобулины

Первыми вырабатываются защитные тела IgM. Обычно это происходит спустя 8-16 дней после попадания инфекции. Время выявления антител определяется и по виду инфекции, и по собственной защитной системе иммунитета. Возникают признаки развития острого инфекционного заболевания. Обнаружение тел IgM во время изучения пробы крови расшифровывается как острая фаза болезни или стадия обострения хронических патологий инфекционного характера.

Спустя 2-3 недели начинают вырабатываться твердофазные тела следующего поколения – IgА. Их большая часть сконцентрирована на слизистых, где и включается в работу функция защиты.

На последнем этапе вырабатываются защитники класса IgG. Обычно это происходит через четыре недели со дня заражения. Когда микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз и другие патологии после лечения исчезнут из организма, концентрация антител в крови тоже снизится, по причине того, что против таких болезней у человека не развивается иммунитет навсегда.

Внимание! Выявление суммарных иммуноглобулинов разных классов может означать присутствие исключительно антител, а не возбудителя. Так что в отдельных случаях иммуноферментное обследование может дать ошибочные ответы: ложноотрицательные или ложноположительные.

Чувствительность и специфика лучших систем тестов ИФА сейчас приближается к 99 процентам, в отличие от методов ПЦР, серологических анализов и других видов диагностики.

ИФА-антипаллидум – быстрый и информативный тест на антитела к трепонема паллидум – возбудителю сифилиса. В отличие от реакции Вассермана, которая назначается при массовых исследованиях и не является специфичной и высокочувствительной, ИФА позволяет точно диагностировать заражение и определить, когда оно произошло.

Итак, за счет огромных преимуществ: скорости ответов, удобства подготовки и применения метода, объективности, возможности изучения иммуноглобулинов разных категорий, сейчас ИФА наравне с хемилюминесцентным иммуноанализом стал одной из главных диагностических методик в лабораториях всего мира.

Иммуноферментный анализ крови: расшифровка у взрослых, норма в таблице

Во время изучения пробы в лаборатории можно выявить разные значения и определения для стадий заболеваний. Анализ крови ИФА расшифровка:

  • M (-), G (-), A (-) – это можно прочитать, как отсутствие иммунитета к инфекционному возбудителю;
  • M (-), G (+), A (-) – титр расшифровывается как образование иммунной защиты после вакцинирования и появление постинфекционного иммунитета;
  • M (+), G (-/+), A (-/+) – в организме присутствует острое инфекционное поражение;
  • M (+), G (+), A (+) – обострилась инфекционная патология хронического характера;
  • M (-), G (+/-), A (+/-) – имеется хроническое инфекционное заболевание;
  • M (-) – наступает стадия выздоровления.

Отметим, что в интерпретации результатов значение «-» говорит об отрицательном, «-/+» – о слабоположительном, а «+» – о положительном ИФА.

Исследование крови методом ИФА, расшифровка и нормальные показатели дают возможность узнать и о классовой принадлежности антител, и об их количественных признаках. Однако здесь определения описаны кратко, расширенное толкование анализа предоставит лишь лечащий врач.

На видео ниже рассказываются особенности расшифровки данных:

ИФА для выявления паразитов

Благодаря диагностике ИФА можно выявить в человеческом организме следующих паразитов:

  • Аскариды;
  • Лямблии;
  • Амебиаз;
  • Хеликобактер пилори;
  • Свободных гельминтов;
  • Цистицеркоз;
  • Трихинеллез.
Паразиты

Для определения трихинеллеза сдавать анализы приходится неоднократно. Спустя два месяца после поражения организма отмечается самое большое количество антител в организме. Таким образом, лабораторное обследование позволяет определить наличие антигенов, паразитов и защитных тел иммунной системы. За счет этого обследования врач получает возможность установить разновидность паразитов и их число в общем, наблюдать за темпами развития патологии.

Читайте также: Анализ крови на хеликобактер пилори – расшифровка, норма и отклонения

Иммуноферментное исследование кровяной сыворотки изучает гормоны щитовидной железы: тироксин и трийодтиронин,  и гормон гипофиза тиреотропин (ТТГ), онкомаркеры и разные виды инфекций.

lechiserdce.ru


Смотрите также