Серологическое исследование это


Серологические исследования крови в диагностике болезней

Серология – это раздел иммунологии, изучающий реакции антигенов на антитела сыворотки.

Серологические исследования - это методика изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови пациентов. Основываются они на ответных реакциях иммунитета. Широко применяются данные исследования в процессе диагностики различных инфекционных заболеваний и при определении группы крови человека.

Кому назначается серологическое исследование

Серологический анализ назначается пациентам с подозрением на какое-либо инфекционное заболевание. Этот анализ в противоречивых ситуациях с постановкой диагноза поможет установить возбудителя заболевания. Также от результатов серологических исследований во многом зависит дальнейшее лечение, так как определение конкретного микроорганизма способствует назначению специфического лечения.

Серологические исследования подразумевают забор биологического материала от пациента в виде:

- сыворотки крови;

- слюны;

- фекальных масс.

Материал в кратчайшие сроки должен оказаться в лаборатории. В противном случае его можно сохранить в холодильнике при температуре +4 или добавив консервант.

Проведение забора анализов

К забору данных анализов специально подготавливать пациента не надо. Исследование безопасно. Забор анализа крови производится в утренние часы натощак, как из локтевой вены, так и из безымянного пальца. После забора кровь следует поместить в стерильную, герметичную пробирку.

Серологическое исследование крови

Человеческая кровь выполняет в организме множество функций и имеет очень широкое поле деятельности, поэтому и вариантов исследования крови также существует много. Одним из них являются и серологические исследования крови. Это базовый анализ, проводимый с целью распознания тех или иных микробов, вирусов и инфекций, а также стадии развития инфекционного процесса. Используются серологические исследования крови для:

- определения количества антител против вирусов и микробов, находящихся в организме. Для этого в сыворотку крови добавляется антиген возбудителя заболевания, после чего оценивается происходящая химическая реакция;

- определения антигена путем введения в кровь антител;

- определения группы крови.

Серологические исследования крови всегда назначаются два раза - для определения динамики развития заболевания. Однократное определение взаимодействия антигенов и антител свидетельствует лишь о факте заражения. Для отражения полной картины, где можно наблюдать увеличение количества связей между иммуноглобулинами и антигенами, необходимо повторное исследование.

Серологические исследования: анализы и их расшифровка

Повышение количества комплексов антиген-антитело в организме свидетельствует о наличии инфекции в организме пациента. Проведение специфических химических реакций при росте этих показателей в крови способствуют определению болезни и ее стадии.

Если результат анализа показывает отсутствие антител к возбудителям, то это говорит об отсутствии заражения организма. Однако такое случается редко, так как назначение серологического анализа уже свидетельствует об обнаружении симптомов той или иной инфекции.

Что может повлиять на результат анализа

Следует внимательно следить за условиями, в которых делается забор крови. Нельзя допускать попадания в кровь чего-то постороннего. За день до анализа не следует перегружать организм жирной пищей, спиртными и сладкими напитками. Следует исключить стрессовые ситуации и уменьшить физические нагрузки. Биологический материал должен попасть в лабораторию как можно скорее, так как длительное хранение сыворотки приводит к частичной неактивности антител.

Серологические методы исследования

В лабораторной практике серологическое исследование крови является дополнительным к бактериологическому исследованию. Основные методы представлены:

1. Реакцией флюоресценции, которая проводится в два этапа. Сначала выявляются антитела в циркулирующем комплексе антиген. Затем на контрольный образец наносится антисыворотка, с последующим инкубированием препаратов. РИФ применяется для быстрого обнаружения возбудителя заболевания в исследуемом материале. Результаты реакций оцениваются с помощью люминесцентного микроскопа. Оценивается характер свечения, форма, размер объектов.

2. Реакцией агглютинации, которая представляет собой простую реакцию склеивания дискретных антигенов при помощи антител. Выделяют:

- прямые реакции, использующиеся для обнаружения антител в сыворотке крови больного. Определенное количество убитых микробов добавляется к сыворотке и вызывает образование осадка в виде хлопьев. Серологические исследования на брюшной тиф подразумевают проведение именно прямой реакции агглютинации;

- реакции пассивной гемагглютонации, основанные на возможности эритроцитов адсорбировать антиген на своей поверхности и вызывать склеивание при его контакте с антителом, и выпадение видимого осадка. Применяется в процессе диагностики инфекционных заболеваний для выявления повышенной чувствительности к определенным препаратам. При оценивании результатов учитывается внешний вид осадка. Осадок в виде кольца на дне пробирки свидетельствует об отрицательной реакции. Кружевной осадок с неровными краями говорит о наличии той или иной инфекции.

3. Иммуноферментным анализом, в основе которого лежит принцип присоединения ферментной метки к антителам. Это позволяет увидеть результат реакции по появлению ферментной активности или по изменению ее уровня. Этот метод исследования имеет ряд преимуществ:

- очень чувствителен;

- используемые реагенты - универсальны, и они стабильны на протяжении полугода;

- процесс учета результатов анализа автоматизирован.

Выше перечисленные серологические методы исследования имеют некоторые преимущества перед бактериологическим методом. Эти методы позволяют определить антигены возбудителей за несколько минут или часов. Более того, эти исследования могут выявлять антигены возбудителя даже после проведения лечения и гибели бактерий, вызывающих его.

Диагностическая ценность исследования

Результаты серологических исследований являются ценным диагностическим методом, но имеют вспомогательную значимость. Базой для диагноза все равно остаются клинические данные. Серологические исследования делаются для подтверждения диагноза, если реакции не противоречат клинической картине. Слабоположительные реакции серологических исследований без подтверждающей её клинической картины не могут стать основой для постановки диагноза. Такие результаты стоит учитывать, когда у пациента в прошлом было аналогичное заболевание, и он прошел курс соответствующего лечения.

Определение наследственных признаков крови, подтверждение или опровержение отцовства, изучение наследственных и аутоиммунных болезней, установка природы и источника инфицирования при эпидемиях – все это помогают выявить серологические исследования крови. Расшифровка результатов дает информацию о присутствии специфических белков к инфекциям типа сифилис, гепатит, ВИЧ, токсоплазмоз, краснуха, корь, брюшной тиф.

Серологические исследования - Likar.Info

Пятница, 21 декабря, 2012

Что такое серологические исследования, для чего они проводятся, каковы основные методы серологической диагностики?

Серологические исследования — это методы изучения антигенов или антител в биологическом материале больных, основанные на определенных реакциях иммунитета. Обнаружение в биологическом материале антител к возбудителю инфекции или антигенов позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования не обладают 100% специфичностью и чувствительностью при диагностике инфекционных заболеваний. Поэтому оценивать их результаты нужно с учетом клинической картины заболевания. Этим обусловлена необходимость использования для диагностики инфекции нескольких тестов, а также применение методов Western-blot, подтверждающих результаты скрининговых методов.

«Иммуноблоттинг (Вестерн-блот, Western-blot) является фактически конечным верификационным (подтверждающим) методом в цепи иммунологических исследований, которые позволяют сделать окончательное лабораторное заключение. Особенно важный данный тест для подтверждения или опровержения инфекционного заболевания (например, коклющ, боррелиоз и т.д.). Метод Вестрен-блота, как правило, необходим после обнаружения положительных антител класса IgG инфекционного процесса, т.к. именно в такой комбинации происходит более правильная лабораторная интерпретация результатов и дальнейшая тактика лечения пациента. Для постановки Вестерн-блота используют специальные нитроцеллюлозные полоски, на которые методом горизонтального и затем вертикального иммунофореза перенесены белки в порядке нарастания молекулярного веса. Антитела сыворотки пациента взаимодействует с белками в определенных зонах полоски, а дальше происходит ход реакции аналогичный иммуноферметному анализу (ИФА)»,- объясняет к.мед.наук, медицинский директор лаборатории СИНЭВО Украина, Оксана Владиславовна Небыльцова.

Биологический материал, используемый для серологического исследования
  • Сыворотка крови
  • Слюна
  • Фекальные массы
Для диагностики каких состояний используются серологические исследования

Целью серологических исследований является установление эффективности проведенного лечения после выздоровления пациента, а также обнаружение рецидива заболевания. Кроме того, серологические методы могут выявить такие заболевания как:

  • Амебиаз
  • Лямблиоз
  • Описторхоз
  • Трихинеллёз
  • Токсоплазмоз
  • Токсокароз
  • Цистицеркоз
  • Эхинококкоз
  • ЗППП
Основные методы, используемые в серологической диагностике
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, метод Кунса)

Разновидности метода:

Прямой: микробы или антигены тканей или микробы обрабатваются специальными сыворотками с антителами, а также меченными флюорохромами, которые светятся в УФ-лучах. Бактерии, таким образом, светятся в виде каймы зеленого цвета по периферии клетки. Наблюдается в люминисцентном микроскопе.

Непрямой: мазки обрабатываются антителами антимикробной кроличьей сыворотки. Затем антитела, которые не связались с антигенами микробов, отмываются. Таким образом, выявляются оставшиеся на микробах антитела. В итоге, образуется комплекс микроб + антикроличьи антитела + антимикробные кроличьи антитела, помеченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдается в люминесцентном микроскопе.

Для оценки результатов существует четырёхбалльная шкала, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:

+ очень слабое свечение клетки

++ слабое свечение периферии клетки

+++/++++ яркое свечение клетки

Титром реакции считается разведение сыворотки с результатом результат реакции +++ или ++++.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГ)

Реакция пассивной или непрямой гемагглютинации используется при диагностике инфекций, вызванных простейшими, бактериями и риккетсиями.

Методика состоит из нескольких этапов. Сначала эритроциты обрабатываются «отмываются» изотоническим раствором хлорида натрия, после, при необходимости, - раствором танина 1: 20000, далее сенсибилизируются растворимыми антигенами. После обработки буферным изотоническим раствором хлорида натрия, антиген готов к употреблению. Сыворотку разводят в пробирках изотоническим раствором хлорида натрия, после чего к каждой разведенной сыворотке добавляют эритроцитарный диагностикум.

Результаты оценивают по характеру осадка эритроцитов:

+ слабая интенсивность

++ средняя интенсивность

+++ интенсивная реакция

++++ резко интенсивная реакция

Положительным считается результат реакции с интенсивной реакцией +++ или резко интенсивной реакцией ++++, при которых эритроциты покрывают все дно пробирки.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью, более 90%. Основное достоинство - возможность выявления инфекции и прослеживания динамики процесса, на который указывает уровень антител.

Применяется анализ для диагностики широкого круга инфекций, в том числе:

  • ВИЧ-инфекция
  • Вирусные гепатиты
  • ЗППП
  • Цитомегаловирусная инфекция
  • Герпесная инфекция
  • Токсоплазменная инфекция

Антиген или антитело фиксируется на твёрдых планшетах, затем, с помощью ферментной метки выявляются комплексы антиген – антитело.

ИФА имеет ряд преимуществ перед остальными серологическими методами. Реакция наиболее чувствительная, а в тестах используются универсальные реагенты. Анализ отличается быстротой, возможностью исследования иммуноглобулинов различных классов. В настоящее время ИФА является одним из основных методов лабораторной диагностики.

Оценка результатов ИФА проводится автоматически с помощью специальных приборов. В некоторых случаях также допускается и визуальный учёт результатов реакции. Достоверность серологической диагностики зависит от организации лабораторного контроля, состоящего из нескольких процедур, предназначенных для оценки качества результатов.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:

ПЦР-диагностика – надежный способ выявить инфекцию

Ангиография: общие принципы и методика

Иридодиагностика: о чем говорят глаза?

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Серологические исследования — это методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанные на реакциях иммунитета. С их помощью также выявляют антигены микробов или тканей с целью их идентификации.

Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инфекции или соответствующего антигена позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования применяют также для определения антигенов групп крови, тканевых антигенов и уровня гуморального звена иммунитета.

Серологические исследования включают в себя различные серологические реакции:1. Реакция агглютинации.2. Реакция преципитации.3. Реакция нейтрализации.4. Реакция с участием комплемента.

5. Реакция с использованием меченых антител или антигенов.

Реакция агглютинации

Реакции агглютинации — это простые реакции склеивания корпускулярных антигенов с помощью антител.

Различают:— прямые реакции агглютинации, которые используют для выявления антител в сыворотке крови больного. Добавление взвеси убитых микробов к сыворотке больного вызывает образование хлопьевидного осадка (положительная реакция склеивания микробов антителами). Используется для определения брюшного тифа, паратифа и др.— реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами, взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных приводит к образованию фестончатого осадка. Используется для определения беременности, выявления повышенной чувствительности больных к лекарственным препаратам и гормонам;— реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате теряют свойство склеивать эритроциты. Используется для диагностики вирусных болезней;

— реакция коагглютинации — разновидность реакции агглютинации, в которой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой.

Реакции преципитации

Реакции преципитации — реакции, в которых происходит осаждение комплекса антиген-антитело. Антиген в данном случае должен быть растворимым. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят путем наслоения раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Наибольшее распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара (двойная иммуно-иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.). Реакцию используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента.

Реакция нейтрализации

Реакция нейтрализации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки или ткани. При отсутствии повреждающего эффекта смеси антител и микробов или их токсинов на культуру клеток говорят о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Реакции с участием комплемента

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к комплексу антиген-антитело. Если комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая тем самым гемолиз (разрушение) эритроцитов (реакция радиального гемолиза). Применяется для диагностики инфекционных болезней, в частности, сифилиса.

Реакция с использованием меченых антител или антигенов

Реакция основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками, меченными флюорохромами, способны светиться в ультрафиолетовых лучах люминисцентного микроскопа (реакция иммунофлюоресценции).

В иммуноферментном анализе вместо флюорохромов иммунную сыворотку можно метить ферментом (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). Реакцию оценивают по окрашиванию раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфотаза) цвет.

Радиоиммунологический метод — количественное определение антител или антигенов, меченых радионуклидами, с применением аналогичных антигенов или антител.

Методы применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.

Серологические исследования

Серологические исследования — это иммунологические методы, при которых по известному антителу (диагностические сыворотки) определяется неизвестный антиген или по известному антигену (диагностикум) — неизвестное антитело. Серологические исследования широко применяются при различных инфекционных заболеваниях, а также для установления групп крови и видовой принадлежности белка.

В инфекционной патологии обнаружение в сыворотке крови больных антител к тому или иному виду возбудителя при отрицательном бактериологическом исследовании позволяет определить этиологию заболевания. В случае получения чистой культуры возбудителя с помощью соответствующих сывороток определяют его видовую принадлежность.

Серологические реакции являются результатом взаимодействия (соединения) антигена (см.) с соответствующим антителом (см.), которое может проявиться как в условиях плотной среды (агаровый гель), так и жидкой. Они протекают в две фазы: 1) невидимая — непосредственное соединение антигена с антителом, 2) видимая — конечный результат реакции. Реакции проявляются в присутствии электролитов (0,85% раствор NaCl) при t° 37°.

Большинство серологических реакций обладает высокой специфичностью. Однако при наличии у различных видов бактерий, вирусов, тканей так называемых общих антигенов могут наблюдаться неспецифические (групповые) реакции.

К серологическим реакциям относятся: агглютинация (см.), преципитация (см.) в жидкостях и гелях, опсонофагоцитарная реакция, реакция нейтрализации (вирусов, токсинов) и реакция связывания комплемента — РСК (см. Борде—Жангу реакция) и ее модификации. Кроме того, применяется так называемая реакция иммобилизации, которая основана на том, что в случае взаимодействия антител с соответствующими подвижными видами микроорганизмов последние теряют способность к движению. Это явление служит показателем образования специфического комплекса антиген — антитело.

Реакция агглютинации нашла широкое применение при диагностике туляремии, кандидоза, дизентерии, брюшного тифа (см. Видаля реакция), сыпного тифа (см. Вейля — Феликса реакция) и др. Реакция преципитации широкого применения в микробиологической диагностике не получила, исключение — реакция термопреципитации (см. Асколи реакция) и реакция диффузионной преципитации в геле, с помощью которой определяют токсигенность дифтерийных культур. Вместе с тем реакция преципитации широко применяется в судебной медицине и гигиене.

Реакция нейтрализации основана на том, что специфическая иммунная сыворотка нейтрализует действие соответствующего антигена.

Реакция связывания комплемента (РСК) широко применяется при диагностике сифилиса (см. Вассермана реакция), гонореи, риносклеромы, сапа, токсоплазмоза и др.

Реакция иммобилизации применяется при диагностике сифилиса — реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), а также холеры.


Смотрите также