Расшифровка анализа пцр


Количественная ПЦР: суть анализа и расшифровка результатов

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Описание

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Суть анализа

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

  • отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
  • положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача на ПЦР биоматериала

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

Количественная оценка полученных результатов

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Что обнаруживается?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Особенности

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

  1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
  2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

Стоимость ПЦР-диагностики

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

Результаты ПЦР диагностики

Методика обладает сто процентной специфичностью, то есть в ходе анализа определяется именно запланированный возбудитель. В отличие от микроскопии мазков при данном исследовании нельзя принять один вид возбудителя за другой. Или спутать его с внешне похожими клетками, например, измененным эндотелием. Даже обломки нуклеиновых кислот, остающиеся после инфекционного агента по окончании терапии специфическими антибактериальными препаратами, будут давать положительные результаты анализов ПЦР. Для получения максимально достоверных результатов важен правильный забор биологического материала. Он должен исключать загрязнение инородными инфекционными агентами.

ПЦР положительный чаще всего фиксируется в период клинических симптомов (разгара болезни). В случае носительства возбудителя, а также до трех-шести месяцев после проведения лечения и эрадикации возбудителя.

Нередко встречается и ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Когда разрушенные участки генетического материала уже погибшего возбудителя еще сохраняются в крови или биологических средах. Результат становится отрицательным по истечении шести-девяти месяцев после терапии.

Какой врач проводит расшифровку ПЦР-исследований

Первично назначается анализ либо венерологом, либо урологом, либо гинекологом (для женщин).

Оценка анализа и выставление результатов в бланке ответа – это функция врача-лаборанта, проводившего исследование. Дальнейшая интерпретация полученных данных – это функционал узкого специалиста, к которому обращается пациент.

Врач назначает такие исследования обычно при:

  • признаках острого воспаления урогенитального тракта,
  • для уточнения причины воспаления,
  • в случае бесплодия,
  • перед планируемой беременностью или эко,
  • у беременных с отягощенной акушерской историей,
  • для контроля эффекта от проводимого лечения по поводу вензаболевания (не раньше, чем спустя месяц после окончания терапии),
  • в качестве скрининга для исключения бессимптомного течения инфекции (при наличии более одного партнера за год).

Когда становятся положительными результаты ПЦР крови и мазков после заражения

Как только ДНК или РНК возбудителя начинают появляться в крови или исследуемой биологической среде организма, может быть анализ ПЦР положительный. Методы молекулярной биологии имеют важное от культуральных или серологических методик отличие. Они не требуют определенного накопления возбудителя или антител к нему и чувствительны практически сразу от момента заражения.

Нет смысла выдерживать паузу в течение предполагаемого инкубационного периода венерической инфекции. Анализ можно сдавать сразу после того, как возникли подозрения о возможном заражении или развитии инфекционного агента.

ПЦР: результат отрицательный

Отсутствие возможности даже ускоренного ферментами удвоения фрагментов генетического материала говорит об отрицательном результате исследования. Чаще всего при отрицательном результате речь идет о том, что специфические для искомого возбудителя ДНК или РНК не обнаружены. Или концентрация генетического материала ниже пороговой чувствительности теста.

Как выглядит бланк результатов ПЦР анализов?

В нем стандартно отмечается “обнаружено” или “не обнаружено”. Первый вариант говорит о наличии инфекционного процесса, вызванного искомым возбудителем. Второй – об отсутствии генетического материала инфекционного агента или его количестве ниже порога чувствительности.

Расшифровка результатов ПЦР исследований проводится в тот же день, когда получены результаты или в момент обращения к врачу.

Время получения данных анализа составляет от нескольких часов до трех суток (в зависимости от лаборатории). Идеальным можно считать вариант, когда от момента первичного обращения к врачу до интерпретации проб проходит не более суток (в клиниках, оснащенных современными лабораториями).

ПЦР диагностика: ошибки метода

Диагностика методом ПЦР может сегодня считаться достаточно точной. Однако и она не исключает ложноположительных или ложно отрицательных ответов. В основном это связано с погрешностями при заборе лабораторного материала.

Нельзя утверждать, что кровь может быть универсальным материалом для установки диагноза. В идеале должна забираться биологическая проба из предполагаемого места воспаления. Так, для половых инфекций более актуальным будет исследование соскоба эпителия урогенитального тракта. Ошибки могут скрываться и на этапе обработки исследуемого материала и быть технической погрешностью работы персонала. Таким образом, все достоинства метода нуклеарного поиска инфекции способны раскрыться при использовании качественных реактивов и аппаратуры высоко квалифицированным персоналом.

Если вам необходимо сдать анализы на ПЦР исследования, обращайтесь к грамотным венерологам.

ПЦР анализ — что это такое, расшифровка диагностики инфекционных заболеваний.

Методика ПЦР – популярная диагностика вирусов и бактерий, которая в основе своего исследования берет принципы и научную базу молекулярной биологии.

У каждого вируса/бактерии есть ДНК, маленькие фрагменты которого и выявляет анализ ПЦР с помощью определенного генетического детектора. Биоматериал для ПЦР исследования берется с кожи, слизистых, крови, слюны, мочи и т.д.

Эта методика не раз доказала свою эффективность и сверхчувствительность к различным видам возбудителей поэтому многие врачи часто назначают пациентам такие анализы.

ПЦР исследование: что это такое? В чем преимущества и недостатки?

ПЦР сейчас повсеместно используют в медицинских клиниках для точного диагностирования вирусов и бактерий. Точное расшифровка названия ПЦР — это полимеразная цепная реакция, которая способна выявлять даже единичные бактерии и вирусы, то есть в очень малых концентрациях.

ПЦР исследует всего лишь ДНК вируса и искусственно увеличивает его генетическую информацию методом копирования, используя специальные реагенты, ферменты для каждого вируса и инфекции. Обнаружение чужеродных, нехарактерных участков ДНК- пробы указывает на наличие инфекции.

Данная методика быстро и в кротчайшие сроки обнаруживает возбудителя и это значительно уменьшает время и ресурсы врача для постановки диагноза. Исследование проводится буквально 1-2 рабочих дня, чтобы точно ответить на вопрос о наличии или отсутствии инфекционного агента.

Таким образом, главное преимущество анализа – это его быстрота, универсальность и высокая чувствительность. Но, однако, нередко пациенты жалуются, что результаты ПЦР-исследования получаются ложноположительными или ложноотрицательными, что подрывает доверие людей к этому анализу.

Однако, дело не в самой методике, которая признана точной и эффективной, а в ряде человеческих и профессиональных факторов, среди которых нужно выделить:

  • Игнорирование пациентом требований врача или правил подготовки к исследованию;
  • Непрофессионализм врача;
  • Недостаточная квалификация медицинского работника (медсестра);
  • Дешевые реагенты лаборатории;
  • Несоблюдение стандартов тест-систем лабораториями.

Перед сдачей анализа пациентом должны быть соблюдены определенные требования, чтобы не получить ложноотрицательные результаты. К тому же нередко непрофессиональные врачи или недостаточно квалифицированные работники берут биоматериал не из того участка слизистой или кожи, что приводит к грубым ошибкам исследования. А дешевые или некачественные реагенты – это проблема любого анализа, приводящая к искажению результатов.

Вирусы способны к мутациям, а человеческий иммунитет не успевает реагировать на изменения. Наглядно это можно представить по вирусу гриппа, поэтому нередко пациенты сталкиваются с противоположными результатами, сделанными в разных лабораториях. Это происходит только по причине несоблюдения стандартов используемых тест-систем при проведении анализа, которые должны реагировать на мутацию.

Диагностика методом ПЦР: что выявляет и диагностирует

Как правило, данное исследование ассоциируется с диагностикой инфекций урогенитального тракта, но возможности ПЦР позволяют выявлять куда более широкий спектр заболеваний. В лаборатории могут взять анализ крови, спинномозговой жидкости, а также отделяемого из слизистой зева, носоглотки, ушей, влагалища, цервикального канала, уретры и других участков.

Таким методом можно исследовать абсолютно любой пригодный биоматериал. В этом его главное преимущество в отличии от серологических (выявление антител) и культурологических исследований (посевы). Чаще всего методику ПЦР используют, чтобы диагностировать половые инфекции, такие как:

  • Хламидии (хламидиоз);
  • Трихомонады (трихомониаз);
  • Гонококки (гонорея);
  • Гарднереллы (гарднереллез);
  • Уреаплазмы (уреаплазмоз);
  • Микоплазмы (микоплазмоз)
  • Грибы Candida (кандидоз);
  • Цитомегаловирус;
  • Вирус герпеса 1 и 2 типа (генитальный герпес);
  • Вирус папилломы человека;
  • Другие инфекции.

Методика ПЦР является «золотым стандартом» диагностики выше указанных заболеваний и инфекций.

Обычный мазок на флору не способен точно выявить половые инфекции, как и другие анализы. В основном, врач или медсестра берет мазок содержимого из цервикального канала, влагалища у женщин и из уретры — у мужчин.

Кроме того, в сыворотке крови методом ПЦР могут обнаружить вирусы гепатита всех видов, Эпштейн Барра, туберкулеза, герпеса всех типов, ВИЧ, бактерию Helicobacter pylori, грипп, токсоплазмоз и другие инфекции. В лаборатории осуществляют обычный забор крови из вены, который везется на исследование. ПЦР можно делать как качественным методом, так и количественным. Во втором случае с точностью подсчитывается количество вируса или инфекции в пробе. Это называется в медицине «вирусная нагрузка», которая позволяет определить степень выраженности инфицирования и самого заболевания.

Примером количественного исследования ПЦР является так называемый анализ «Фемофлор«. Благодаря ему определяют состояние микрофлоры урогенитального тракта и наличие возбудителей половых, анаэробных инфекций, рассчитывают общую бактериальную массу и т.д. Далее лаборанты занимаются их количественным подсчетом, составляют графики.

Данный анализ используют для широкой диагностики половых, неспецифических инфекций и биоценоза урогенитального тракта. К тому же количественными методами определяют вирусы гепатита, ВПЧ разных типов, мононуклеоза и других заболеваний. К примеру, вирус гепатита C нельзя достоверно определить иначе, чем методикой ПЦР.

Как берут анализ?

Анализы ПЦР берутся врачом абсолютно безболезненно, не причиняя пациентам сильного дискомфорта. Биологической пробой может стать любая часть тела. Забор крови осуществляют уколом из вены, а соскобы и мазки из слизистых различных органов медицинским шпателем. Однако, брать такие анализы должен только профессионал и желательно врач, а не медсестра, так как нередко это является настоящей причиной искажения результатов.

Медицинские работники попросту делают соскоб или мазок не того биологического материала поэтому на такой, казалось бы, незначительный нюанс следует обратить внимание. Содержимое помещают в искусственную среду для исследования и везут в лабораторию. Сам анализ проводится достаточно быстро и уже на следующий день пациент может забрать результаты. Лаборатории, как правило, предупреждают о всех возможных задержках и нарушениях сроков, так как нередко исследование пробы попадает на нерабочий или праздничный день.

Расшифровка результатов ПЦР

Расшифровка результатов не представляет трудностей даже для рядового пациента, так как, это действительно несложно. Возбудитель либо обнаружен, либо нет, если это качественное исследование, которое не предполагает никаких числовых показателей. Трактовка обнаруженных показателей одинаковая что у мужчин, что и у женщин. В результате анализов ПЦР так и указывается: обнаружено (положительно) или не обнаружено (отрицательно).

Если ничего не обнаружено, то значит это норма и пациент здоров либо получился ложноотрицательный результат, а особенно об этом свидетельствует тот факт, когда у человека ярко выраженная симптоматика. Чаще всего так происходит с половыми инфекциями, так как исследование требует серьезной подготовки. Перед анализом нельзя мочиться хотя бы 2 часа, заниматься спринцеванием, а женщинам нужно ждать окончание менструации и не вставлять вагинальные свечи перед исследованием.

Кровь нужно сдавать натощак, а остальные исследования не требуют специальной подготовки. В ином случае результаты получатся ошибочными, а врач не сможет диагностировать заболевание и понять, как лечить пациента.

Если в анализе написано «обнаружено», то это точно говорит о наличии инфекции и о сопутствующем возбудителю заболевании. В норме инфекции и вирусы должны отсутствовать.

Как правило, если выявлен возбудитель, то проводится его чувствительность к спектру антибактериальных препаратов и это дополнительно отражается в самих результатах анализа. Однако, бывают и такие случаи, когда пациент прошел курс лечения, и инфекция опять обнаруживается в анализах ПЦР.

На самом деле в этом ничего удивительного, так как мертвые клетки вируса какое-то время еще сохраняются поэтому пересдавать анализ нужно через 2 недели после лечения. Ложноположительные результаты чаще всего указывают на ошибки лаборантов. Расшифровка количественного исследования ПЦР уже немного сложнее. В таком случае нужно смотреть на референсные значения лаборатории и читать пояснения к показателям.

В анализах, как правило, указаны такие результаты: «не обнаружено», «меньше порогового титра» «титр, выходящий за пределы порогового значения», «очень высокие титры». В норме ничего не должно быть обнаружено или на крайний случай результат должен быть меньше порогового значения, что говорит о «стертой» клинике и указывает на перенесенную в прошлом инфекцию, а все остальные повышенные показатели являются патологией.

Трактовка результатов ПЦР у женщин

Расшифровка результатов ПЦР, не связанных с гинекологией и урологией, является одинаковой для обоих полов, но в ином случае есть своя специфика. Обнаружение у женщины половой инфекции указывает на урогенитальное заболевание, которое может поразить уретру, органы малого таза, мочевой пузырь и почки. Как следствие, у женщины могут наблюдаться сопутствующие заболевания: пиелонефрит, цистит, уретрит, аднексит и т.д. Все зависит от клинической симптоматики и результатов других анализов.

Еще одной опасностью является обнаружение инфекции во время беременности женщины, так как существует большой риск инфицирования плода. Ребенок может заразиться во время беременности или проходя через родовые пути. Это грозит ему серьезными последствиями и болезнями. Самые опасный период — заражение в первом триместре беременности. Обнаружение инфекции требует лечения, а в некоторых случаях и прерывание беременности поэтому диагностику ПЦР лучше делать до планирования ребенка.

Трактовка результатов ПЦР у мужчин

Обнаружение половой инфекции у мужчин указывает на специфический уретрит, простатит, вызванный возбудителями. Анализ ПЦР берут соскобом из уретры, где обычно и оседают все «инфекционные агенты». Они также могут попасть в соседние органы, вызывая другие заболевания и неприятные состояния. Например, скрытое течение болезни хламидиоза может привести к возникновению так называемого синдрома Рейтера, поражающего суставы и иммунную систему.

Обнаруженные инфекции требуют лечения, так как для мужчин тоже крайне опасны последствия не долеченной болезни. Метод ПЦР способен выявить инфекцию, даже если пациент не чувствует никаких симптомов, но у мужчин, как правило, симптомы сразу дают о себе знать. В таком случае нужно обязательно обратиться к врачу или самостоятельно прийти в частную клинику. Тем более, особо важно проходить ПЦР — диагностику обоим партнерам при планировании беременности.

Стоимость анализа

Анализы ПЦР можно сдать сейчас в каждой частной лаборатории. Все зависит от того, что пациенту собираются диагностировать. Если нужно сдать анализ на половые инфекции, то один показатель стоит примерно 300-400 рублей, но, как правило, в прейскуранте медицинской организации предусмотрена возможность сделать комплексное исследование, куда будут включены сразу несколько видов показателей половых инфекций.

Количество таких возбудителей будет разным: 6, 11, 17 и т.д. Цены, соответственно будут варьироваться от 1300 до 6000 рублей. Если сдавать кровь методом ПЦР на выявление различных инфекций, то цены будут абсолютно разными: от 300 рублей до 17000 рублей. Один из самых дорогих анализов ПЦР – это диагностика гепатита С, так как данный анализ требует проведения очень многих дополнительных тестов. Количественные методы ПЦР, как правило, значительно дороже качественных.

Цены на отделяемое из носа, зёва и других органов будут примерно от 350 рублей до 5000 рублей. Пациент может еще и дополнительно оплатить услуги забора крови/ мазка/соскоба, а их стоимость будет примерно 150-350 рублей. Таким образом, ценовая политика зависит от предполагаемого диагноза, а сказать среднюю стоимость анализа ПЦР достаточно сложно.

В заключении можно сказать, что анализы ПЦР, несмотря на незначительные недостатки, обладают 100% точностью и специфичностью. Врачи часто прибегают к данной методике исследования, чтобы выявить любых опасных и скрытых возбудителей, которые являются причиной множества заболеваний.

А тем более без анализов ПЦР не всегда можно точно установить диагноз, так как другие исследования в силу своей специфики не способны выявить определенных инфекционных агентов.

Анализы ПЦР на сегодняшний день практически заменяют другие методы лабораторной диагностики, которые менее точны и специфичны. Быстрота исследования позволяет оперативно выявить заболевание. Но, тем не менее, их стоимость все же немаленькая, а государственные поликлиники могут сделать такие анализы бесплатно за счет полиса ОМС только по острой необходимости, но не в случае обычной профилактики или подозрений.

загрузка...

ПЦР-анализ – диагностика инфекций: показатели и расшифровка результатов

Данная методика славится своей точностью и универсальностью. Посредством ПЦР-обследования можно выявить одновременно несколько видов вредоносных микроорганизмов в одном образце. Для подобных мероприятий биоматериал может быть использован разнообразный: слюна, моча, кровь, плевральная жидкость и т.д.

С другой стороны, для осуществления данной диагностики необходимо современное оборудование и подготовленные должным образом кадры. При выборе медицинского учреждения лучше ориентироваться на крупные заведения, которые могут позволить себе приобрести новейшие приборы. Это прямым образом отобразится на скорости расшифровки анализа и на его точности.

Что представляет собой анализ методом ПЦР?

Вся совокупность генетической информации, которой располагает любой живой организм, содержится в ДНК. Указанную нуклеиновую кислоту составляют четыре соединения. Идентифицировать живое создание совсем несложно: у каждого из них, независимо от параметров (будь то бактерия, животное, рыба), имеется своя уникальная ДНК.

Некоторые же микроорганизмы хранят генетические сведения о себе в РНК.

Фрагменты обоих нуклеиновых кислот (РНК и ДНК) можно выявить посредством полимеразной цепной реакции, которую также именуют ПЦР.

В основе рассматриваемого тестирования – использование специальных ферментов, благодаря которым осуществляется копирование некоторых участков ДНК/РНК вирусных, микробных, иных инфекций.

Источником указанных возбудителей может служить практически любой биологический материал, взятый у человека: слюна кровь, моча, выделения из уретры или влагалища и т.д.

Так как в образцах крови и других биологических материалах содержание нуклеиновых кислот весьма низко, при помощи иных методов исследования выявить конкретное заболевания невозможно. В ходе ПЦР можно достичь увеличения уровня ДНК молекул, что обеспечивает достоверную постановку диагноза в будущем.

Для проведения анализа лаборанты применяют специальное оборудование – амплификатор. Данный прибор нагревает и охлаждает пробирки, в которые помещен биоматериал. Адекватный температурный режим прямо влияет на точность полученных результатов.

В итоге ПЦР лаборанты получают электрофореграмму, на которой зафиксированы фрагменты выделенных нуклеиновых кислот.

Указанное изображение сверяют с базой данных на компьютере — и таким образом определяют тип возбудителя, его концентрацию в организме.

Как выполняется и что может показать общий анализ крови — расшифровка результатов и нормы

Какие можно определить заболевания?

Посредством рассматриваемого анализа можно выявить следующие патологии:

1.Вирусные агенты, среди которых возбудители:

  • ВИЧ.
  • Гепатита А, В, С, D, G.
  • Инфекционного мононуклеоза.
  • Клещевого энцефалита.
  • Герпеса I и II типа.
  • Цитомегалии.
  • Папилломавирусной инфекции.

2. Некоторые виды бактериальных инфекций:

  • Туберкулез.
  • Хеликобактер пилори.
  • Гарднереллез
  • Листериоз.
  • Кампилобактериоз.
  • Сифилис.
  • Гонорея.

3. Внутриклеточные паразиты:

  • Хламидии.
  • Уреаплазмы.
  • Микоплазмы.

4. Инфекции, спровоцированные грибками:

На сегодняшний день к указанному тестированию весьма часто прибегают криминалисты, когда нужно установить, кому принадлежит биологический материал, взятый с места преступления.

При помощи полимеразной цепной реакции можно также установить отцовство.

Правила сбора материала для исследования

Чтобы получить максимальной точный результат, забор биообразцов для ПЦР производят следующим образом:

  1. Инструментарий, контейнеры для изъятого материала должны быть продезинфицированы. А лучше использовать одноразовые приспособления.
  2. Собранные образцы крови нужно помещать в пробирки, которые содержат антикоагулянты. А в процессе забора обращаются к специальным вакуумным системам.
  3. Забор любого биоматериала нужно осуществлять в манипуляционном кабинете.

Для диагностики могут использовать различный материал: все будет зависеть от разновидности инфекции:

  • Мaзки/сoскобы из шейки матки/уретры, утренняя мoча: при тестировании на патологии, которые передаются половым путем.
  • Крoвь: при тестировaнии на TORCH-инфекции, ВИЧ, гепатит.
  • Спиннoмозговая жидкoсть: при подозрении на дефекты в работе центральной нервной системе.
  • Мазoк из горла/зева: при проверке на цитомегаловирус, мононуклеоз.
  • Мoкрота/плевральная жидкость: при инфицировании легких.
  • Образцы ткани плаценты: для исключения либо подтверждения внутриутробной инфекции.

Подготовка к сдаче

Пациенту перед сдачей биологических материалов необходимо должным образом подготовиться:

  1. Если указанный материал извлекают из уретры, запрещены половые акты и использование антибактериальных средств для интимной гигиены за 3 дня до сдачи анализа. За 3 часа до тестирования нужно воздержаться от мочеиспускания.
  2. Кровь для исследований берут ранним утром на голодный желудок.
  3. Для тестирования мочи используют первую ее порцию после сна. Для данного анализа пациенту следует предварительно приобрести специальный контейнер в аптеке. Взятый биоматериал желательно доставить в диагностическую лабораторию через два часа.
  4. Мазок из влагалища лучше брать за пару дней до менструации, либо через 1-2 дня после ее завершения.
  5. Образец слюны нужно изымать только после тщательного полоскания (3 раза) ротовой полости физиологическим раствором.

Если есть возможность, взятый биообразец нужно сразу же отнести в лабораторию.

При невозможности срочной доставки, материал можно хранить короткое время в прохладном месте (+4…+8 С).

При необходимости длительного хранения некоторые виды биоматериалов можно замораживать, но — только единожды.

К контейнеру следует обязательно приложить направление доктора на ПЦР.

Общий анализ мочи — расшифровка результатов и физические свойства мочи

Сроки проведения ПЦР-диагностики

Продолжительность подготовки результатов рассматриваемого вида тестирования будет определяться возможностями лаборатории, в которой его будут проводить.

Чаще всего на расшифровку уходит 1-2 дня. Однако, в экстренных ситуациях ПЦР может быть выполнен в течение нескольких часов.

Показатели и расшифровка результатов ПЦР

В ходе применения качественной методики ПЦР-обследования, можно получить два варианта ответа:

  • Положительный. Указывает на то, что в организме пациента присутствует чужеродные ДНК/РНК, а значит произошло заражение. Если у пациента нету каких-либо жалоб, в целом он чувствует себя хорошо, а результаты ПЦР-диагностики положительные, это свидетельствует о начальной стадии заболевания. При подобных ситуациях лечение не отнимет много времени и денег. В крайне редких случаях результат может быть ложноположительным: при нарушении правил антисептики в ходе забора биоматериала.
  • Отрицательный. Означает отсутствие искомых вирусных агентов во взятом образце. Ложноотрицательный результат может стать следствием человеческого фактора (в первую очередь – нарушение правил хранения биообразца, неправильный его сбор).

Количественная оценка исследуемого биоматериала дает возможность делать выводы о том, какой уровень нагрузки оказывают вирусы/бактерии на организм.

В ходе расшифровки определяют число чужеродных РНК или ДНК, которые концентрируются в 1 мл. крови (МЕ/мл).

Благодаря подобной методике, доктор имеет возможность распознать стадию и форму болезни, назначить адекватное лечение, определиться с его продолжительностью.

Повторный анализ зачастую назначают через 1 месяц после лечебных мероприятий.

Точность ПЦР-диагностики

Главными преимуществами рассматриваемого тестирования являются его надежность и достоверность.

Расшифровка ПЦР-диагностики дает возможность:

  • Наиболее точно определить наличие/отсутствие инфекции в организме.
  • Диагностировать разновидность вирусного агента.
  • Отыскать бактерии даже при минимальном количестве вражеских ДНК во взятом биоматериале.

Процент неверного диагностирования минимален.

Причины ложноположительных и ложноотрицательных результатов описаны выше.

Оцените - (Пока оценок нет) Загрузка...


Смотрите также