Пцр при туберкулезе
ПЦР диагностика туберкулёза
Туберкулёз — специфическая инфекция, его очаг может находиться в тканях человека годами, а после чего распространиться в течение нескольких месяцев. Это хроническое заболевание, оптимальные схемы лечения которого сложно подобрать. Одна из причин этого — запоздавшая диагностика, когда микобактерии, находясь в организме человека, уже адаптировались ко многим препаратам.
Какие современные методы постановки диагноза существуют? ПЦР диагностика — что это такое? Как проводится это исследование? В каких случаях туберкулёз диагностируется этим методом и в чём его суть?
Что такое ПЦР диагностика
Это один из самых современных методов диагностики не только заболеваний, но и обнаружения биологического материала. ПЦР диагностика была изобретена относительно недавно. Около 30 лет назад в 1983 году американский биохимик Кэри Бэнкс Муллис предложил сложную схему восстановления биологического материала микроорганизмов по одному краткому сегменту. Благодаря своему открытию учёный был удостоен наивысшей награды — Нобелевской премии.
Что это такое — ПЦР диагностика инфекций? Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это диагностика выявления вирусных заболеваний, основанная на методах генной инженерии. Она широко применяется в медицинской микробиологии, иммунологии и вирусологии. Метод универсальный и помогает поставить диагноз при малом количестве материала. Выявить инфекцию можно буквально в первые часы заражения ею, задолго до того, как проявятся первые симптомы заболевания.
Суть метода заключается в получении из материала от больного человека не самого возбудителя, а фрагментов генома (частиц ДНК), его биосинтезе с последующим определением к какому классу микроорганизмов принадлежит полученный генетический материал с помощью молекулярно-генетических методов.
Несмотря на то что это сложный процесс, он занимает намного меньше времени, чем многие биологические способы обнаружения возбудителей инфекций. В течение всего нескольких часов с помощью ПЦР удаётся обнаружить микроорганизм. Для этого нет необходимости выделять его из среды (крови, спинномозговой жидкости, мокроты) и долго выращивать на искусственных питательных средах. Достаточно чтобы в исследуемом материале присутствовал небольшой фрагмент нити ДНК возбудителя инфекции.
В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.
Что необходимо для проведения ПЦР?
- Праймеры — участки ДНК, с которых и начинается биосинтез или создание.
- Нуклеотиды или сложные соединения, которые являются основой молекулы ДНК либо РНК.
- Полимеразная цепная реакция невозможна без присутствия полимеразы, которая представляет собой фермент ускоряющий ход ПЦР.
Этапы ПЦР диагностики
Как проводится молекулярная диагностика методом ПЦР? Процедура несложная и занимает короткий промежуток времени с учётом сбора материала.
- Перед началом исследования берут необходимый биологический материал — это промывные воды бронхов, кровь, желудочное содержимое, мокрота. Тип биологического материала зависит от предполагаемого возбудителя.
- Денатурация или разрушение первичной структуры ДНК, которая состоит из двух цепочек. Суть этого этапа — разъединить две цепи под воздействием высокой температуры (максимальная — 98 ºC, которая действует не более двух минут).
- На следующей стадии ПЦР, под названием — отжиг, температуру снижают на несколько градусов, чтобы праймер связался с нитью ДНК.
- Элонгация, в процессе которой происходит непосредственно синтез нужных молекул.
В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.
Нет возможности абсолютно всем людям с подозрением на туберкулёз проводить ПЦР, так как метод требует наличия дорогостоящего оборудования. Не все государственные поликлиники могут себе позволить купить его. Кроме этого, так сложилось, что привычные методы диагностики инфекции в большинстве случаев тоже себя оправдывают.
К ним относятся:
- опрос пациента, сбор анамнеза;
- полноценный осмотр человека;
- исследование с помощью туберкулиновой пробы Манту;
- рентгенография или флюорография;
- компьютерная диагностика при необходимости;
- микробиологические методы исследования: микроскопия мазка и бактериологическое исследование мокроты.
ПЦР на туберкулёз проводится в особых случаях, когда сложно поставить диагноз или нет возможности провести другие инструментальные методы.
Несмотря на изобилие способов диагностики заболеваемость туберкулёзом продолжает расти. В настоящее время отмечается не только её рост, но и другие особенности:
- болезнь часто протекает в тяжёлой форме;
- повышается количество летальных случаев;
- всё чаще диагностируются устойчивые к современным химиопрепаратам формы заболевания.
Нежелание самих людей ежегодно проходить обычные профосмотры, отказ от вакцинации приводит к распространению туберкулёза. В таких условиях нужны быстрые, информативные и эффективные методы исследования, которые должны быть доступны для детей и взрослых. Все вышеперечисленные методы диагностики во многом уступают ПЦР.
Преимущества диагностики туберкулёза с помощью ПЦР
Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.
Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.
Преимущества ПЦР диагностики в следующем.
- Это быстрый анализ. По небольшому фрагменту молекулы ДНК можно установить диагноз всего за несколько часов (около пяти), что успешно используется в экстренных ситуациях, когда, например, перед операцией нужно установить не болен ли человек туберкулёзом.
- Анализ ПЦР допускается в случае, когда другие методы недоступны или запрещены (для обнаружения туберкулёза лёгких иногда приходится сделать несколько рентгенографических снимков, что составит большую дозу облучения).
- С помощью ПЦР проводится исследование любой биологической среды на присутствие в ней возбудителя. К примеру, можно провести исследование спинномозговой жидкости, если есть подозрение на туберкулёзный менингит.
- Разрешена ПЦР диагностика инфекционных заболеваний в детском возрасте, так как метод безопасен.
- Позволяет выявить возбудителя на любой стадии развития болезни.
- Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить микобактерии туберкулёза, даже если в биологическом материале всего несколько микроорганизмов.
- Хорошо его проводить для диагностики рецидива заболевания.
После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.
Недостатки ПЦР при диагностике туберкулёза
В наше время такая диагностика скорее редкость, чем закономерность. И для этого есть основания.
- Это дорогой метод исследования. Во многих поликлиниках оборудование для проведения ПЦР отсутствует из-за высокой его стоимости, но в платных лабораториях анализ всё-таки можно сделать.
- Сразу после проведённого лечения мёртвые микобактерии или живые в незначительном количестве могут ещё присутствовать в организме человека (при проведении ПЦР диагностики результат будет положительным), поэтому в это время метод будет недостоверным, проводить его нет смысла.
- Мутации микобактерий приводят к неэффективности ПЦР — не может синтезироваться нормальная последовательность нити ДНК.
- Нужно правильно выбирать среду для исследования, кровь берут только при подозрении на её заражение (сепсис), нет необходимости брать мокроту если под вопросом стоит туберкулёз органов нервной системы. В таком случае ПЦР не сможет обнаружить возбудителя и диагностика будет неинформативной.
Показания для выявления туберкулёза с помощью ПЦР анализа
ПЦР диагностика туберкулёза проводится чаще всего в спорных случаях. Когда врачи направляют на это исследование?
- Если сложно поставить диагноз обычными доступными методами, но был контакт с больным туберкулёзом.
- В случае, когда человека невозможно доставить на исследование в поликлинику для прохождения рутинных привычных исследований на туберкулёз, его легче обследовать с помощью ПЦР, так как мокроту для исследования можно доставить в баночке, а диагноз подтверждается в течение нескольких часов.
- Если человеку предстоит экстренная операция и нужно срочно выяснить болен ли он туберкулёзом.
- При необходимости беременную женщину тоже лучше обследовать на туберкулёз с помощью ПЦР, так как метод безопасен.
- На платной основе диагностику может пройти каждый, у кого туберкулёз не был подтверждён с помощью бактериологических методов и рентгеноскопии. Такое бывает, когда очаг в лёгких незаметен на прямом снимке, а человек при сдаче мокроты на исследование не смог соблюсти рекомендации по правильному забору материала. При этом человека беспокоят все симптомы, характерные для туберкулёза лёгких.
- Когда есть сомнения в результатах пробы Манту.
- Предпочтительнее делать ПЦР диагностику туберкулёза у детей. Процедура безопасна, не создаёт дополнительную лучевую нагрузку, эффективна в отношении обнаружения сложных для диагностики форм заболевания.
Своевременная диагностика туберкулёза — это залог правильно назначенного лечения и снижения распространения заболевания. Часто знакомые методы выявления болезни не всегда эффективны. Поэтому ПЦР на сегодня является одним из самых достоверных и безопасных способов обнаружения инфекции на ранних этапах её развития.
2 недостатка ПЦР на туберкулез: анализ крови для диагностики
Специфическая туберкулезная инфекция многие годы присутствует в тканях и структурах человека, а при определенных обстоятельствах быстро распространяется по организму за 2-3 месяца. Порой оптимальный курс лечения выбрать очень тяжело по причине запоздалой диагностики и адаптации возбудителя ко многим медикаментам.
Новейшая ПЦР диагностика туберкулеза помогает обнаружить не только развившуюся болезнь, но и сам возбудитель, когда первые признаки заболевания еще не появились.
Что такое ПЦР?
Диагностирование туберкулеза способом ПЦР появилось недавно. В 1983 году микробиолог из Америки Кэри Муллис изобрёл процедуру, при которой микроорганизмы стало возможно восстановить из биологического материала по короткому сегменту. Эта работа заслужила Нобелевскую премию.
ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.
Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов. Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.
Что нужно для проведения анализа?
- Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
- Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
- Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.
В чём основа метода?
Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.
Эта сложная реакция занимает меньше времени, чем некоторые биометоды. ПЦР определяет возбудителя за несколько часов, при этом не существует надобности выделять его из биологической жидкости (мокроты, спинномозговой или кровяной среды), не нужно долго растить его на питательной среде. Достаточно, чтобы исследуемый материал содержал нить ДНК инфекционного возбудителя.
При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.
Ступени диагностирования
Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.
- Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут);
- Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
- Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.
Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.
Обязательно ли делать ПЦР при туберкулезе?
Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедура требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.
Сюда относят:- Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
- Внешний осмотр;
- Туберкулиновая проба Манту;
- Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
- По надобности компьютерное диагностирование;
- Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.
ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.
Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности: нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.
Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.
В чём ценность метода?
Это новейшее исследование отлично себя зарекомендовало. Если по ряду причин сложно поставить диагноз или в некоторых спорных случаях, ПЦР легче обнаруживает туберкулезную палочку в биологическом материале, чем другие методы.
- Это быстрое исследование, небольшой отрезок молекулы дает возможность поставить точный диагноз за короткое время приблизительно за 5 часов, это применяется в экстренных случаях, например перед неотложным оперативным вмешательством;
- Исследование крови на туберкулез возможно, когда другие методики недоступны или противопоказаны – иногда для обнаружения возбудителя tbc приходится делать множество Rg-снимков, облучающая доза при этом слишком большая;
- Используя полимеразную реакцию можно исследовать любые биологические жидкости на присутствие микобактерии. К примеру, можно проводить изучение спинномозговой жидкости при туберкулезном менингите или мочи при мочеполовом туберкулезе;
- Метод безопасен, диагностика туберкулеза у детей при помощи ПЦР не вызывает сложности;
- Способ полимерной реакции выявляет туберкулезную палочку при любых формах и стадиях недуга;
- Наличие в биоматериале всего нескольких бактерий позволяет увидеть присутствие микроорганизмов, так как это чувствительная реакция;
- ПЦР легко диагностирует рецидив болезни.
Несмотря на огромное количество плюсов, всем больным с подозрением на tbc исследование не делается, так как существуют и минусы, их так же учитывают.
Видео
Видео — ранняя диагностика
В чем недостатки?
Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины. В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается.
Существующие недостатки:- Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
- Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.
Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей. В этой ситуации диагностика будет неверной.
Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае диссеминированного туберкулеза. Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.
Кому показан анализ?
Большинство больных направляются на ПЦР диагностику в спорных и сложных случаях туберкулеза. Когда медицинские работники выдают направление на исследование?
- Если произошел контакт с человеком, у которого достоверно поставлен диагноз туберкулёза, но обычными способами диагностику сложно провести;
- При тех обстоятельствах, если больного предоставить в поликлинику невозможно для рентгенографии или других исследований. В такой ситуации его проще обследовать при помощи полимерного метода. Анализ мокроты просто доставляется в лабораторию в специальной таре, а результат становится известен спустя несколько часов;
- Перед операцией бывает необходимо срочно определить болен ли пациент туберкулезом, в этом случае показано проведение ПЦР;
- Из-за безопасности способа, можно проводить обследование беременной женщины или ребёнка, при этом не создается дополнительная рентген-нагрузка;
- Сомнительные результаты теста Манту.
Каждый желающий может пройти обследование платно, если туберкулез не подтвердился при помощи бактериологии и рентгеноскопии. Так случается, если очаг в лёгочной ткани невидим на Rg- снимке в прямой проекции, а пациент не смог собрать мокроту правильно, но признаки туберкулеза человека беспокоят.
Современная ПЦ реакция для диагностики – это залог успешного лечения, в результате которого распространенность заболевания снижается. Традиционные способы определения недугов не всегда дают желаемый эффект.
Так ПЦР анализ на сегодняшний день стал одним из достоверных и безопасных методов диагностирования на ранних сроках развития болезни.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter. Мы исправим ошибку, а Вы получите + к карме 🙂
ПЦР на туберкулез: диагностика туберкулеза, анализ крови, тест на микобактерии
Несмотря на колоссальные достижения в области медицины, человечество до сих пор не может полностью взять под контроль такое опасное заболевание, как туберкулез. В борьбе с этой инфекцией усовершенствовались методы диагностики, вакцинация, способы лечения. Но туберкулез по-прежнему нередко приводит к смертельному исходу. Уберечься от страшной инфекции можно, если вести здоровый образ жизни, проводить плановую вакцинацию и регулярное обследование. Полностью исцелиться в случае заражения поможет только ранняя диагностика. Анализ крови ПЦР на туберкулез позволяет на самых ранних сроках выявить палочку Коха.
Туберкулез что за инфекция
Туберкулез (устаревшее название чахотка) ― это инфекционная патология, поражающая чаще всего органы дыхания. Микобактерии туберкулеза распространяются воздушно-капельным путем при чихании и кашле зараженного человека или животного. Опасность для инфицирования также представляет слюнная жидкость больного туберкулезом. После попадания в организм часто наличие инфекции никак не проявляется, то есть заболевание протекает в скрытой форме.
В зависимости от течения болезни выделяют две формы туберкулезной инфекции:
- Закрытую стадию туберкулеза фтизиатры относят к малоопасной либо вообще неопасной, с точки зрения заражения окружающих. Микобактерии при скрытой форме в мокроте не выявляются доступными диагностическими методами, в том числе и посредством анализа ПЦР. Опасно это состояние тем, что в одном из десяти случаев оно может переходить в активную стадию, то есть в открытую форму туберкулеза.
- Открытую стадию туберкулезного инфицирования характеризует обнаружение в мокроте и в иных биологических жидкостях организма палочек Коха. При такой форме заболевания пациент крайне опасен для окружающих его людей даже при соблюдении норм гигиены.
К востребованным диагностическим мероприятиям по обнаружению туберкулезных микобактерий относятся флюорография, томография и рентгенография грудной клетки и иных пораженных органов. С успехом проводятся исследования разного биологического материала, а также кожная туберкулиновая проба она же реакция Манту. Но наиболее эффективен молекулярно-генетический анализ полимеразной цепной реакции, сокращенно именуемый ПЦР.
Что представляет из себя исследование ПЦР на туберкулезную инфекцию
Полимеразная цепная реакция ― это точнейшая молекулярно-генетическая диагностика. Анализ ПЦР при туберкулезном инфицировании позволяет с большой достоверностью выявить присутствие ДНК или РНК возбудителя в изучаемой пробе крови или иных биологических жидкостях организма.
К многочисленным достоинствам диагностического метода ПЦР относится то обстоятельство, что для проведения исследования при помощи особого фермента полимеразы, может быть достаточно совсем незначительного числа бактерий, хватит и единичной клетки.
Другие преимущества при ПЦР диагностике туберкулеза:
- Безупречная точность полимеразной цепной реакции при анализе на туберкулезное заражение достигается за счет особенного фрагмента, относящегося к конкретному возбудителю, в данном случае микобактериям туберкулеза.
- Гарантия стопроцентного результата благодаря чувствительности анализа ПЦР, которая составляет от десяти до тысячи клеток в исследуемом образце, в биологическом материале реально выявить даже единственную клетку туберкулезной микобактерии.
- Самое срочное получение результатов обследования всего лишь в течение 3,5–5,5 часов с момента сдачи анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза.
Анализ ПЦР при туберкулезе несомненный прорыв в области постановки ранних и точных диагнозов. С момента появления молекулярно-генетического метода диагностики стало возможным обнаружить туберкулез и другие смертельно опасные инфекции на самой ранней стадии, спустя дни или максимум несколько недель после заражения. Когда возбудители только начинают атаку на организм, их еще можно уничтожить без последствий для органов и систем тела человека.
Микобактерии туберкулеза обладают характерной особенностью, значительно усложняющей излечение этого заболевания, ― способность приспосабливаться к медикаментозному воздействию некоторыми препаратами. Анализ ПЦР при туберкулезе дает возможность выяснить восприимчивость микобактерий туберкулеза к назначенному препарату и тем самым установить эффективность терапии. При проведении исследования ПЦР с целью определения устойчивости микобактерий туберкулеза к лекарственным препаратам используют способность генов возбудителя «запоминать» невосприимчивость к конкретному препарату. Результат исследования генов на устойчивость к лекарствам можно получить уже через два дня после сдачи анализа ПЦР.
Как выполняется метод ПЦР при туберкулезе
Сущность диагностики путем полимеразной цепной реакции состоит в выделении из биологических жидкостей пациента часиц ДНК возбудителя и последующей классификации его по типу микроорганизма. Для обнаружения возбудителя достаточно даже самого микроскопического его фрагмента цепочки ДНК. К длинному списку достоинств анализа на туберкулез посредством ПЦР можно добавить и абсолютную простоту данного исследования.
Этапы диагностики туберкулеза при помощи полимеразной цепной реакции:
- В качестве исследуемых образцов используют кровь, мокроту, промывные жидкости бронхов.
- Далее, биологический материал в течение нескольких минут подвергают воздействию высоких температур, доходящих до 97 градусов по Цельсию. За счет чего происходит разрушение (денатурация) первоначальной структуры ДНК возбудителя, состоящей из пары цепей.
- Следующей операцией является отжиг, при котором температура снижается, чтобы дать праймеру соединиться с одной из разъединенных во время предыдущей процедуры цепей ДНК.
- Завершающим этапом выступает элонгация, во время которой осуществляется биологический синтез необходимых молекул.
Понадобится около 25–30 циклов, чтобы получить требующееся количество копий ДНК возбудителя, которые уже можно классифицировать в зависимости от принадлежности к определенному штамму. Для выполнения исследования посредством полимеразной цепной реакции требуется специальное дорогостоящее оборудование. Установка подобных приспособлений не везде возможна.
Поэтому анализы ПЦР при подозрении на туберкулез нельзя назвать самыми доступными по финансам. Но в некоторых обстоятельствах, когда дорога каждая минута, в силу возраста или каких-то особенностей организма противопоказаны иные методы диагностики, ПЦР анализу нет равных, так как он абсолютно безопасен. Диагностика ПЦР при туберкулезной патологии назначается в случае спорной ситуации, если отсутствует яркая клиническая картина, а другие способы исследования показывают противоречивые результаты.
Эффективно подобное обследование крови или других биологических жидкостей при рецидиве туберкулеза.
Помимо отсутствия или наличия штамма конкретной микобактерии туберкулеза. При помощи полимеразной цепной реакции существует возможность определить на какой стадии находится заболевание. Но необходимо учитывать, что если анализ ПЦР будет проводиться у лиц, прошедших курс терапии от туберкулезного поражения. Тогда в крови и иных исследуемых образцах может оставаться незначительное количество погибших или еще на стадии умерщвления микобактерий туберкулеза и ответ может быть ложноположительным.
Анализ ПЦР на выявление туберкулезного инфицирования ― это частичное решение проблемы, в дополнение к массовой вакцинации, в борьбе со смертельными исходами в случае заболевания туберкулезом. Теперь не нужно ждать обнаружения красноречивых симптомов или появления характерных для туберкулеза очагов на снимке после флюорографии. При любом подозрении на возможное инфицирование дабы полностью исключить страшные последствия всегда есть возможность провести анализ на ПЦР.
ПЦР на туберкулез
План статьи: 1. Что такое ПЦР? 2. Достоинства проведения ПЦР 3. Недостатки проведения метода 4. Процесс сбора анализов 5. Расшифровка результатовТуберкулез – одно из самых опасных заболеваний, от которого человечество страдает уже сотни лет. Даже несмотря на то, что ученым удалось определить возбудителя и изобрести антибиотики для его ликвидации, лечение не всегда проходит успешно. Основная причина — большой период латентной или скрытой формы болезни, который может длиться несколько лет. Несвоевременная диагностика значительно уменьшает шансы больного на выздоровление и полноценную жизнь.
Что такое ПЦР?
Для обнаружения микобактерий туберкулеза в организме уже более ста лет успешно применяется проба Манту. Хорошо себя зарекомендовали и другие методы: бактериологический посев в искусственной среде, микроскопия мазка, ИФА. Однако большое количество осложнений и ложноположительных результатов, а также длительность некоторых способов потребовало внедрения новых технологий в методику диагностики. Огромным прорывом в области микробиологии стало появление анализа ПЦР на туберкулез. Вот уже несколько десятилетий он показывает свою эффективность и широко применяется для дифференциальной диагностики различных форм туберкулеза.
ПЦР анализ на туберкулез или полимеразная цепная реакция – это метод обнаружения ДНК бактерий или их фрагментов, в основе которого лежит увеличение молекул нуклеиновой кислоты под действием фермента ДНК-полимеразы. Для положительного результата достаточно всего одной молекулы болезнетворной ДНК, поэтому этот метод считается высокочувствительным. Диагностика ПРЦ при туберкулезе более эффективна, чем посев микобактерий в искусственной среде, так как в отличие от культурального метода позволяет различить дикие и вакцинные штаммы, привитые БЦЖ. Это позволяет избежать ложноположитеьного результата и сделать диагноз более точным.
Достоинства проведения ПЦР
ПЦР диагностика на туберкулез позволяет обнаружить палочку Коха в любой биологической среде организма с определением их количественного состава даже на начальной стадии заболевания, когда микобактерии пребывают в «спячке». Диагностика болезни в латентной фазе позволяет вовремя начать профилактическое лечение, предотвратить развитие очагов воспаления в легких и появление осложнений в других органах и системах. Кроме этого ПЦР тест на туберкулез имеет ряд преимуществ:
- высокая специфичность – 90-100%;
- высокая скорость – от 4 часов до 2 суток;
- высокая чувствительность, особенно при иммунодефиците;
- дифференциальная диагностика.
Главное достоинство метода в том, что ПРЦ диагностика туберкулеза у детей дает возможность различить диссеминированную форму заболевания от ограниченной очаговой, даже при отрицательных результатах других анализов. Дифференциальная проверка позволяет выбрать правильную схему лечения и повысить эффективность терапии.
Высокая специфичность анализа достигается исключением перекрестных реакций с другими молекулами нуклеиновой кислоты, а высокая чувствительность дает возможность обнаружить микобактерии даже в малом объеме собранного материала. Метод ПЦР мокроты на туберкулез имеет наибольшую достоверность, его специфичность достигает 100% по сравнению с исследованием других биологических материалов.
Особый механизм ПЦР дает широкие возможности для выявления палочки Коха у пациентов с иммунодефицитом. По методике анализа реакция обнаруживает антигены, поэтому совсем неважно вырабатывает организм антитела к возбудителю, или нет. Таким образом, можно диагностировать внелегочные формы заболевания и запущенные случаи у больных с погрешностями в иммунной системе, что невозможно при использовании других методов.
Недостатки проведения метода
Несмотря на множество преимуществ и высокую чувствительность анализа, ПЦР на туберкулез может давать ложноотрицательный результат. Поскольку для диагностики берется очень небольшой объем биоматериала, не исключен тот факт, что возбудитель «прячется» в клетке или воспалительном очаге и не выделяется наружу.
Чувствительность данного метода у детей составляет 25-80%. Так, например, при рандомных исследованиях у группы больных с клинически доказанным диагнозом, анализ крови ПЦР на туберкулез дал положительный результат только у 50% пациентов. В связи с этим при проверке ребенка на патогенные микобактерии нельзя заменять один метод диагностики другим. Для того чтобы полностью удостовериться в отсутствии заражения нужно провести комплексное исследование сразу несколькими способами.
Процесс сбора анализов
Главным условием достоверности ПЦР диагностики является соблюдение правил сбора биологических жидкостей на анализ. Загрязненный или неправильно собранный материал может стать причиной неправильного результата. Наиболее распространенными являются анализ мокроты, крови и мочи, но для более глубокой дифференциальной диагностики можно брать пробы из содержимого желудка, синовиальной жидкости, спинномозговой жидкости, смывной жидкости бронхов, спермы, секрета простаты.
ПЦР мочи на туберкулез сдают утром после гигиены наружных половых органов путем мочеиспускания в стерильный контейнер. Во время процедуры важно не касаться внутренних стенок емкости, чтобы не допустить попадания сторонних микроорганизмов. Женщинам, которые живут регулярной половой жизнью обязательно нужно поставить тампон во влагалище, чтобы избежать попадания сторонних выделений.
Анализ крови сдают утром натощак, а ПЦР мокроты на туберкулез может быть сделан в любое время суток с обязательной предварительной гигиеной полости рта. Это нужно чтобы удалить остатки пищи, которые могут попасть в контейнер. При отхаркивании мокроты важно не допустить попадания слюны и слизи из носоглотки в емкость, это может исказить данные анализа.
Исследование содержимого желудка проводят в условиях стационара рано утром, пока мокрота, проглоченная за ночь, находится в желудке. Для обнаружения микобактерий туберкулеза таким методом делают трехкратный посев, который с большой вероятностью позволяет выделить палочку Коха.
Расшифровка результатов
Качественный анализ ПЦР дает 2 вида результатов «обнаружено» или «не обнаружено». Они означают положительный и отрицательный вердикт соответственно. Ответ «обнаружено» означает, что в исследуемом образце присутствует ДНК инфекционного агента, и с вероятностью 97% организм заражен туберкулезом. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии ДНК палочки Коха во взятой пробе биологического материала, и дает 97% вероятность, что в теле нет большого количества микобактерий, и 60%, что человек не заражен.
Наибольшую специфичность для диагностики туберкулеза имеют анализ крови и мокроты. При положительном результате они указывают на инфицирование организма, которое требует проведения срочных терапевтических мероприятий. Исследования других биоматериалов могут указывать не на течение заболевания, а всего лишь на присутствие чужеродных бактерий. Это происходит, когда человек является носителем болезни, но не распространяет инфекцию в окружающую среду и не заражает здоровых людей.
Количественный анализ ПЦР проводят реже, и расшифровкой его результатов занимается лечащий врач. Показатели исследования используют для определения активности заболевания и степени поражения организма. Опираясь на полученные данные, специалист может определить эффективность лечения, и при необходимости скорректировать терапевтическую схему.
Туберкулез всегда был и остается одной из самых серьезных проблем для здоровья всего человечества. Современные методы диагностики позволяют обнаружить заболевание на ранней стадии, чтобы вовремя начать лечение. Туберкулиновая проба, микроскопия мазка, посев бактерий на искусственные питательные среды хорошо зарекомендовали себя в сфере лабораторной диагностики туберкулеза. Однако длительное ожидание результатов и повышенная частота ложноположительных показаний сделало их устарелыми и вывело на первый план более современные технологии. ПЦР анализ является высокоспецифичным и высокоэффективным методом диагностики туберкулеза. Его результаты наиболее достоверны среди всех предложенных лабораторных методик обнаружения палочки Коха. Он позволяет не только вынести окончательный вердикт, но и провести необходимую дифференциальную диагностику.