Пцр диагностика это

ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция)

Для успешного лечения самым важным моментом является быстрая и безошибочная диагностика. В последнее время перечень методик и возможностей диагностических центров, поликлиник и больниц в сфере диагностирования постоянно расширяется. После появления относительно новой методики — ПЦР-анализа, этот метод быстро завоевал приверженцев среди медицинских работников, поскольку часто является незаменимым при выявлении инфекционных заболеваний.

Сфера применения метода, основанного на полимеразной цепной реакции, не ограничивается медициной, но самое большое распространение ПЦР-диагностика получила для выявления различных болезней.

Преимущества и недостатки

За широкий перечень преимуществ автор методики получил Нобелевскую премию, как подтверждение признания специалистов универсальности и высоких возможностей такого способа диагностики.

К неоспоримым достоинствам ПЦР можно отнести следующие:

Очень высокая чувствительность. Обычно говорят о чувствительности от 95 до 100%, но это усредненные данные. Этот показатель отличается для разных микроорганизмов. Так, для гепатита С он не бывает ниже 97% (при условии выполнения всех требований), а для определения уреаплазмоза — не менее 99%. Такая чувствительность является самой высокой на данный момент, поэтому способ почти не имеет конкурентов по этой характеристике.
Возможность применения на самых ранних стадиях. В то время, когда другие методы диагностики еще не способны выявить возбудителя из-за его малого количества в образце пробы, ПЦР уже выдает корректный результат. Обнаружить присутствие возбудителя можно даже при наличии единственного экземпляра, а в некоторых случаях — только фрагмента микроба. По этой причине способ применяется и при хронических или скрытых течениях патологий, а также в стадии инкубации.
Широкий спектр результатов. Анализ способен выявить одновременно несколько возбудителей, для этого не понадобится проводить повторные манипуляции. Иногда удается найти возбудителей, которые даже не предполагались при первичной диагностике.
Универсальность образцов. В качестве пробы могут быть представлены образцы крови, слюны, мокроты, волосы, выделения из влагалища, клетки разных тканей.
Скорость получения результатов. В большинстве случаев ответ получают через 5-6 часов. Для культурального анализа, приближающегося к полимеразной цепной реакции в плане точности, такой же результат можно получить в срок от нескольких дней до пары недель.

Количественное определение возбудителя. Этот параметр позволяет определять титр микробов в материале, а это свойство часто необходимо для оценки эффективности выбранной тактики лечения.
Выявление самого микроорганизма, а не определение его реакций. Большинство анализов основаны на ответной реакции возбудителя на химические реактивы, окрашивание и т. д. Этот способ диагностики позволяет обнаруживать непосредственно микроб, а не косвенные признаки, антитела и т. п.

Несмотря на такой широкий перечень преимуществ, у метода есть и некоторые недостатки:

Из-за загрязнения пробы предыдущим образцом может произойти ложное выявление микроорганизмов. Такое происходит при загрязнении инструментов или реактивов, участвующих в ходе анализа. Даже в воздухе присутствуют фрагменты микробов, способных отразится на результате, поэтому в таких лабораториях обязательно должен быть установлен биологический фильтр с максимальной степенью очистки воздуха.
Ложноотрицательный результат. Даже при всех явных проявлениях болезни иногда получают отрицательные данные. Причина этого – в неверно выбранном месте для взятия образца, поэтому персонал лаборатории должен обладать достаточной квалификацией, знаниями и опытом.
Оценка данных должна производиться исключительно лечащим врачом, потому что интерпретация результатов ПЦР-анализа — сложный процесс. Наличие положительного ответа не всегда означает болезнь. Дело в том, что после того, как заболевание успешно пролечено, фрагменты возбудителя долго присутствуют в крови, поэтому заключение может сделать только очень квалифицированный специалист.
Высокая стоимость диагностики с применением полимеразной цепной реакции. Цена обусловлена дорогостоящим оборудованием и высокими требованиями к условиям лабораторий и квалификации персонала.

Обязательные условия для получения точных данных в ПЦР-лабораториях:

корректный механизм забора проб и их правильная транспортировка в лабораторию;
точное соблюдение методик в ходе выполнения анализа;
высокая стерильность и максимальная автоматизация процесса;
использование одноразовых инструментов;
система внутрилабораторного контроля для подтверждения достоверности данных.

При условии выдерживания всех требований на основе данных, полученных при помощи методики ПЦР, можно не только определить болезнь, но сделать прогноз ее течения и составить алгоритм лечения.

Суть метода

Полимеразная цепная реакция позволяет быстро скопировать и воспроизвести ДНК-цепочки микроба, который вызвал заболевание. Для того, чтобы процесс шел быстро, используют специальные ферментные препараты, ускоряющие репликацию и постройку цепочки нуклеотидов.

После того, как процедура происходит в полном объеме, присутствие в пробе возбудителя увеличивается в миллионы раз, после чего его выявление и идентификация не составляют проблемы.

Лаборант может сравнить полученный образец с представленными в базе данных и безошибочно назвать его, а также определить его исходное количество.

Кроме того, методика позволяет клонировать отдельные участки цепи ДНК, вызывать в них необходимые мутации, объединять и комбинировать участки между собой.

Сферы применения

Самое большое распространения ПЦР-диагностика получила в медицине. С помощью нее можно определить вирусные, инфекционные, наследственные болезни, причем сделать это можно не только в активной фазе, но и сразу после заражения.

Области медицины, в которых метод ПЦР активно используется для диагностики:

урология и гинекология — для обнаружения большинства венерических заболеваний (уреаплазмоз, герпес, сифилис, гонорея, гарднереллез, трихомониаз, хламидиоз, ВИЧ, микоплазмоз, папилломавирус человека, кандидоз и пр.);
пульмонология — при туберкулезе или пневмониях бактериальной или вирусной природы;
гастроэнтерология — при хеликобактериозе;
в гематологии — при цитомегаловирусе, различных онковирусах крови;
в области инфекционных болезней — для выявления дифтерии, сальмонеллеза, мононуклеоза, листериоза, гепатитов вирусного происхождения, энцефалита;
в онкологии — для определения рака груди, лейкемии, лимфомы.

Этот метод применяют и в неонатологии, педиатрии, офтальмологии, неврологии — практически в любой отрасли медицины он оказался необходим.

На видео подробно рассказано, какие инфекции можно выявить с помощью полимеразной цепной реакции.

Большинство заболеваний, передающихся половым путем, быстро и успешно диагностируются именно благодаря ПЦР-диагностике. Кроме определения возбудителя, этот метод позволяет узнать конкретный штамм микроорганизма, что делает возможным выбор наиболее действенного препарата при лечении.

Помимо медицины способ ПЦР используется и в других сферах:

Криминалистика и судебная медицина — помогает установить личность преступника посредством сравнения генетического материала подозреваемого человека с образцами, найденными на месте совершения преступления.
Установление отцовства — сравниваются размноженные генетические наборы родителя и ребенка, находятся идентичные фрагменты, на основании чего можно судить о степени их родства.
Наука использует методику в ходе экспериментов, применяя генные мутации, устанавливая родство эволюционных веток отдельных организмов и т.д.

ПЦР-диагностика в венерологии

Многие инфекции, вызывающие венерические болезни, на начальных стадиях очень сходны по проявлениям и симптоматике, поэтому дифференцировать их достаточно сложно. В то же время раннее определение инфекционного агента позволяет начать лечение как можно раньше и сократить время лечения до минимума, избежав развития возможных осложнений.

Полимеразная цепная реакция — эффективный механизм для определения таких групп заболеваний половой сферы:

бактериальные инфекции (сифилис, донованоз, гонорея, хламидиоз и пр.);
вирусные патологии (папилломатоз, кондиломатоз, ВИЧ, половой герпес и т.д.);
грибки (молочница, баланопостит и пр.)

В дерматовенерологии особенно полезно свойство данной методики находить инфекционных агентов в периоды ремиссий или при носительстве, когда человек может заражать партнеров, не имея при этом симптомов болезни.

Ход анализа полимеразной цепной реакции

Анализ ПЦР происходит в 4 основных этапа:

подготовка материала к копированию;
объединение фрагмента ДНК и праймера;
копирование генетического набора исследуемого материала;
идентификация и оценка полученного ДНК-набора.

Этап 1

Образец подогревают до температуры 94-98°C в специальном приборе — амплификаторе, который программируется на выдерживание точных температур с низкой погрешностью. Заданная температура держится на протяжении минуты-двух. Это необходимо для денатурации ДНК, чтобы двойная спираль разошлась на две отдельные цепочки.

Этап 2

Температура в амплификаторе понижается до 72-75°C для того, чтобы праймер смог распознать сходный с ним участок ДНК-цепи и объединиться с ним.

Праймеры — это специальные реагенты, которые подходят только к одному виду возбудителя. Если необходимо провести анализ на несколько патогенов, то в образец добавляют необходимое количество праймеров.

На этой стадии ДНК реплицирует свою матрицу, используя праймер.

Возможности лаборатории ограничены наличием праймеров для определенных микроорганизмов, поэтому диапазон возможностей определяется наличием таких образцов.

Этап 3

В этом отрезке происходит увеличение генетического материала возбудителя. К праймеру с матрицей приближается фермент и воспроизводит новую цепь ДНК, идентичную той, которая содержалась в первоначальной цепочке.

Когда синтез окончен, завершается один полный цикл полимеразной цепной реакции. По времени он продолжается в среднем до 3 минут. За это время происходит удваивание материала. Дальнейшее увеличение количества цепочек происходит в геометрической прогрессии, и к окончанию анализа успевает пройти 50-80 циклов.

Этап 4

Этап, требующий внимательности и особой тщательности со стороны персонала.

Определение микроорганизма происходит с использованием электрофореза или меток, наносимых окраской. При использовании электрофореза определяющим моментом становится длина фрагментов ДНК, а при использовании меток — развитие окраски в ходе ферментативной реакции.

Разновидности ПЦР-анализов

Вариаций такой ПЦР диагностики существует много. Выбор определенного метода зависит от многих факторов: предположительного диагноза, возможностей доступных лабораторий, метода взятия материала и пр.

Наиболее часто используются такие разновидности ПЦР:

вложенная;
ступенчатая;
с горячим стартом;
виртуальная;
ассиметричная;
в реальном времени и т. д.

Преимущественно используют ПЦР в реальном времени, так как способ характеризуется самыми точными результатами и максимальной скоростью обработки данных. После его применения заключение готово через час-два.

Метод широко используется в педиатрии для выявления вирусов и инфекций крови, генетических заболеваний, TORCH-инфекций. Неонатологи назначают такую диагностику в проблемных случаях буквально с первых дней жизни. Иногда подобная диагностика позволяет обнаружить инфицирование внутриутробных вод, составляющих опасность для развития плода в период активного формирования.

Если врач выдает направление на обследование с применением полимеразной цепной реакции, то он должен уточнить, какой именно биоматериал необходимо предоставить пациенту и каким образом подготовиться к отбору пробы.

Анализ крови

Кровь в качестве биоматериала для тестирования берут при подозрении на ВИЧ, вирусный гепатит, токсоплазмы, половой герпес и цитомегалию. Для большинства этих патогенов до использования этого метода диагностика базировалась на выявлении антител к возбудителю, что сильно затягивало время обнаружения микробов в тот период, когда антитела еще не вырабатываются.

Перед сдачей крови для диагностики в данном случае не нужны особые приготовления, но лучше, если проба будет отобрана натощак. Единственное обстоятельство, способное серьезно исказить результаты — прием антибиотиков, поэтому сдаче должен предшествовать временной отрезок после приема подобных лекарств в несколько дней или недель в зависимости от типа антибиотика.

В самых современных клиниках в последнее время для отбора крови на ПЦР используют вакуумные системы, которые минимально повреждают кожные покровы и сводят к минимуму вероятность попадания в пробу загрязняющих агентов из воздуха, инструментов или рук лаборантов.

Анализ мазка

Используется как в гинекологии, так и в венерологии для определения заболеваний, передающихся половым путем. Часто назначают ПЦР мазка во время беременности для выявления скрытых факторов, способных негативно повлиять на формирование плода или ход беременности.

Подготовка к отбору материала заключается в том, чтобы полностью исключить половые контакты за несколько суток до процедуры. Проводить спринцевания марганцовкой или настоями трав тоже нельзя. На протяжении критических дней и 2-х дней после них мазок на ПЦР-анализ не берется.

Отбор биоматериала производят в лаборатории из влагалища, шейки матки, цервикального канала или уретры.

ПЦР-анализ мазка позволяет выявить патоген, который устойчив к определенному виду антибиотиков. Кроме того, показаниями к такому виду диагностического обследования выступают:

осложненная беременность без видимых причин;
острое течение венерической болезни;
предположительное хроническое течение венерического заболевания;
выявление причин бесплодия или самопроизвольных абортов.

Анализ кала

Анализ кала с применением полимеразной цепной реакции назначается специалистом для уточнения наличия инфекции. Подготовка к отбору пробы кала для ПЦР заключается в следующем:

исключить за несколько суток слабительные средства в виде любых свечей, масел или оральных медикаментов;
не употреблять накануне лекарства или продукты, которые придают калу выраженную окраску.

Материал для ПЦР-определения лучше всего доставить в специальном контейнере для кала с палочкой. Внутреннее пространство контейнера стерильно, поэтому протирать или промывать его не следует. Во время отбора образца важно отслеживать, чтобы не задеть внутреннюю поверхность приемника, также в пробе не должно быть следов мочи. Перед отбором запрещено применение клизм.

Анализ мочи

Такое исследование с помощью ПЦР позволяет извлечь ДНК образец вируса или бактерии. Забор мочи лучше проводить утром натощак. Лучше всего, если это будет происходить непосредственно в лаборатории.

Обязательные условия подготовки для получения результатов исследования мочи в лаборатории полимеразной цепной реакции:

выдержать 3 недели после приема антибиотиков;
перед отбором жидкости не пить и не есть;
запрет вагинального секса за сутки до сдачи пробы;
в контейнер нужно поместить первую порцию материала после пробуждения.

Интерпретация результатов

Расшифровку результатов диагностики проводит специалист, направивший пациента на ПЦР-исследование. В протоколе, выданном лабораторией, может фигурировать отрицательный или положительный результат ПЦР:

Отрицательный — случай, в котором не обнаружено фрагментов возбудителя предполагаемой болезни, то есть человек здоров и не перенес этого заболевания в недавнем времени.
Положительный — в пробе обнаружены РНК или ДНК патогена и человек нуждается в лечении.

Самостоятельно трактовать полученные данные не стоит, так как возрастные нормы могут значительно отличаться, а различные титры — свидетельствовать о совершенно разных стадиях болезни и подходах к терапии.

Вооружившись результатами ПЦР-диагностики, врачу будет легко определить перечень необходимых мер лечения.

Точность ПЦР-диагностики сделала эту методику незаменимой в диагностировании огромного перечня заболеваний и позволила эффективнее выявлять и ликвидировать патогенные процессы, происходящие в организме человека.

ПЦР анализ, что это такое? Расшифровка и описание

Впервые об анализе методом ПЦР заговорили в 1983 году. Данная методика была разработана Кэри Мюллисом и сотрудниками его лаборатории. С тех пор популярность исследования неуклонно возрастает, т.к. оно обладает существенным рядом преимуществ перед другими методиками.

На сегодняшний день ПЦР диагностика является эталоном или стандартом в выявлении инфекций и возбудителей заболеваний, особенно протекающих бессимптомно. В первую очередь это доклиническая диагностика.

ПЦР анализ, что это такое?

Проведение анализа в ПЦР машине

Сущность ПЦР анализа заключается в том, что в пробирке клонируются (многократно увеличиваются) последовательности нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), характерных для определенного вида возбудителей.

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как — полимеразно цепная реакция.

Главная отличительная черта данного метода – это амплификация, т.е. создание огромного числа копий необходимого гена или его фрагмента. Все это производится вне организма, т.е. в пробирке.

Так, если проведено 20 циклов ПЦР, то получается примерно 1 миллион копий и более. Это позволяет обнаружить инфекцию даже при её незначительном количестве в исходном материале, когда другие методы анализа бессильны. Это определяет высокую чувствительность данного метода.

Простыми словами можно провести такую аналогию — одну маленькую песчинку на полу вы не заметите, но после увеличения количества песчинок в миллион раз (проведение ПЦР), кучка песка уже будет хорошо видна.

Основными преимуществами анализа на инфекции ПЦР-методом являются:

наиболее высокая чувствительность и специфичность в сравнении с другими методами, используемыми для выявления инфекционных агентов;
возможность выявления микроорганизмов в разнообразных биологических материалах (кровь, моча, влагалищный секрет, слюна и т.д.);
возможность выявить одновременно несколько причинных микроорганизмов, если таковое наблюдается. Для сравнения — использование бактериологических методов не дает такой возможности, т.к. необходимо применение различных сред для выращивания различных болезнетворных микробов;
возможность транспортировки биологического материала, т.к. для выявления возбудителя не обязательно сохранять его в живом виде;
скоростьвыполнения анализа;
точность проводимой этиологической диагностики;
возможность количественного определения возбудителей — особенно актуально для условно-патогенных микробов, которые только по достижении определенной концентрации способны вызывать заболевание;
способность контролировать течение инфекционного процесса при проведении лечения.

В настоящее время методом полимерзной цепной реакции определяют большинство половых (и других) инфекционных заболеваний. Диагностика получила широкое распространение за счет своей высокой чувствительности и специфичности.

Особенно большой популярностью пользуется анализ ПЦР на хламидии.

Это связано с тем, что данные микроорганизмы обитают внутриклеточно, что создает определенные трудности в их обнаружении.

ПЦР-диагностика позволяет выявлять даже минимальное количество хламидий, которые, как правило, еще не приводят к появлению клинических симптомов. Даже наличие только 2 молекул нуклеиновых кислот в исследуемом материале позволяет выявить причинную инфекцию.

А это залог успешного лечения, которое начинается еще на доклиническом этапе.

Также производится определение инфекций:

ВИЧ;
вирусные гепатиты;
туберкулез;
клещевой энцефалит;
различные венерические заболевания и т.д.

ПЦР-диагностика позволяет решать и ряд других важных задач:

мониторинг терапии и оценка ее эффективности;
определение «нагрузки вирусами», на основании которой производится индивидуальный подбор дозы препарата;
выявление штаммов микроорганизмов, отличающихся фармакологической устойчивостью (нечувствительностью к лекарственным препаратам).

Подготовка к сдаче анализа

Целенаправленно готовиться к сдаче анализа, который будет проводиться методом ПЦР, не требуется. Однако очень важно, чтобы специалист производил забор материала с соблюдением всех необходимых условий стерильности.

Так, например, для взятия крови следует применять специальные вакуумные системы, для взятия секрета половых органов следует использовать специальные пробирки и т.д.

В некоторых случаях в лабораторию материал следует транспортировать. Чтобы это сделать правильно, необходимо герметично закрыть емкость с биологическим материалом. Это позволит предупредить проникновение туда иных микроорганизмов, обитающих во внешней среде.

Расшифровка результата ПЦР

Результаты ПЦР-анализа могут быть двух вариантов:

положительный – возбудитель обнаружен;
отрицательный – возбудитель не выявлен.

Следует знать — даже при отсутствии клинической симптоматики может быть получен положительный результат.

В данном случае ориентироваться необходимо на данные полимеразной реакции, т.к. она позволяет выявить заболевание на доклинической стадии.

Иногда может быть получен сомнительный ответ, когда количество выявленных копий соответствует верхней границе нормы. Чтобы уточнить причину заболевания, следует повторить анализ, уделив особое внимание условиям сбора биологического материала.

Насколько точна ПЦР-диагностика?

Основные преимущества ПЦР-диагностики можно сформулировать в виде нескольких тезисов:

возможность получения огромного числа копий патогенных микроорганизмов;
большое количество копий – это залог успешного секвенирования (выявления).

Это обеспечивает высокую точность ПЦР-анализа для обнаружения внутриклеточных возбудителей и медленно растущих микроорганизмов.

Поэтому метод особенно информативен для выявления туберкулезных микобактерий и других подобных инфекционных агентов. Он обладает высочайшей точностью и не нуждается в перепроверке полученных результатов (кроме казуистических случаев).

Для получения наиболее достоверных результатов необходимо выполнение двух основных условий, которые предупреждают экзогенное (внешнее) инфицирование:

правильный забор материала;
правильная транспортировка.

Автор: Администратор
Распечатать

ПЦР-диагностика: что это такое?

ПЦР-диагностика была разработана в США еще в 1983 году известным химиком Кэри Мюллисом, которого ровно через 10 лет наградили за свое открытие нобелевской премией. Что это за диагностический метод такой? И какие заболевания можно выявить при помощи него?

Что это такое?

Полимеразная цепная реакция – именно такое название и имеет данная диагностика, которая позволяет выявить у человека различного рода заболевания даже на той стадии, когда они еще не развились. Причем это касается не только болезней, касающихся генетической природы, но также и инфекционных, и онкологических заболеваний.

Для врачей анализ ПЦР иногда является единственным методом, благодаря которому они могут поставить окончательный диагноз. Ведь бывают такие случаи, когда остальные методы диагностики (вирусологические, иммунологические ит.д.) не дают однозначных ответов.

Преимущества ПЦР-диагностики заключаются в следующем:

позволяет выявить присутствие возбудителя на специфическом участке ДНК;
определить уникальность участка ДНК, что позволяет исключить постановку неправильного диагноза (для каждого возбудителя характерен тот или иной участок ДНК);
выявить единичные зараженные вирусами и бактериями клетки при одновременном исследовании 10-1000 клеток;
вывить сразу несколько возбудителей одновременно в одном исследуемом образце;
обнаружить патогенны до возникновения симптомов болезни и после получения соответствующего лечения;
расшифровка анализа проводится довольно в короткие сроки (как правило, она готова уже через 4-5 часов).

Сегодня данная диагностика постоянно усовершенствуется и на медицинский рынок поступают все больше и больше разновидностей анализа ПЦР. Благодаря этому врачам удается своевременно выявлять различные патологии, что дает высокие шансы больному на полное выздоровление.

Когда назначается ПЦР?

ПЦР назначается в различных ситуациях, так как данный анализ является настоящей «находкой» для врачей. В большинстве случаях данный метод используется для диагностирования вирусных заболеваний и атипичных вирусов, выявить которых при помощи обычных средств диагностики очень сложно, а порой и вовсе невозможно.

Кроме того, ПЦР также может использоваться для выявления причины бесплодия. Ведь на репродуктивную систему могут влиять не только внешние факторы, но и внутренние. Заболевания органов малого таза, щитовидной железы и других органов и желез может повлечь за собой изменение гормонального фона, что и становится причиной бесплодия.

Особое место ПЦР занимает в области диагностирования туберкулеза и определения его вида. Ведь в отличие о других методов диагностики, ПЦР не требует сбора мокроты, в которой содержится огромное количество палочки туберкулеза, разносящуюся по всему отделению больницы. А также он помогает избежать излучения, которое негативно воздействует на организм.

Как проводится?

Для проведения ПЦР-диагностики могут использоваться как серологические, так и культуральные методы исследования биологического материала. Серологическим методом специалистам удается вывить антитела к тому или иному возбудителю в крови. Культуральный метод является самым достоверным и эффективным, так как дает намного больше информации и состоянии ДНК человека.

Однако применяют его крайне редко, потому что для того чтобы получить все необходимые данные, необходимо провести засевание особой среды, которая будет являться благоприятной для активного роста возбудителя. А эта процедура может занимать довольно длительное время – от нескольких дней до нескольких недель.

Для ПЦР совершенно не имеет никакого значения, с каким биологическим материалом человека работать. Это может быть кровь больного, слюна, кал, моча или любо что-то другое.

Для диагностирования различного рода инфекций применяется только серологический метод, который позволяет выявить наличие антител в организме человека, которые вырабатываются в результате развития инфекции.

Чтобы провести ПЦР диагностику, необходим целый набор различных реактивов, которые добавляются в биологический материал, взятый у больного человека. Когда они вступают в реакцию с материалом, число искомых фрагментов в участке ДНК увеличивается, что приводит к их быстрому обнаружению.

Запуск ПЦР происходит в циклическом режиме. Если в исследуемом образце присутствуют возбудители, то они обязательно выявятся, ведь каждый цикл они будут накапливаться и создавать свои копии. Это позволяет специалистам выявить не только факт наличия возбудителя, но и определить точное их количество.

Типы ПЦР

ПЦР бывает двух типов:

отрицательный, то есть в исследуемом образце не были обнаружены возбудители инфекции, а значит, человек полностью здоров;
положительный, который указывает 95% вероятности присутствия в исследуемом образце возбудителя.

Бывают и такие случаи, когда ПЦР анализ дает неверные результаты, которые, как раз таки, и занимают эти 5%. Бывает такое редко и случается чаще всего из-за неправильного сбора биологического материала или его хранения.

Допустим, вы решили сдать анализ ПЦР и для этого решили собрать мочу. Собирать ее нужно по всем правилам: вымыть наружные половые органы, взять стерильную емкость и только в нее собирать мочу. Причем делать это необходимо непосредственно перед сдачей анализов, ну или за 1-2 часа до него.

Во время проведения ПЦР врачами используется такое понятие, как вирусная нагрузка. Ее увеличение свидетельствует о развитии инфекционного заболевания, а снижение об успешном лечении.

Как проводится сдача ПЦР анализа?

Анализ ПЦР проводится в медицинских учреждениях, как правило, в утренние часы. Что именно вам придется сдавать, скажет врач: соскоб, мазок, кровь или мочу.

Учитывая тот факт, что ПЦР является самым высокоэффективным методом диагностики, который может выявить возбудителя даже в загрязненном биологическом материале, специалисты стараются создать все условия, которые позволяют получать только достоверные результаты.

К ним относятся:

воздержание от половых контактов, если требуется сбор соскоба из половых органов;
запрет на использование антибактериальных средств и спринцеваний в течение нескольких дней до предполагаемой даты.

Если у вас берется мазок из уретры, не рекомендуется мочиться в течение 2-3 часов до сдачи анализа. Ну а если вы просто сдаете кровь, то придерживаться каких-либо правил вообще не нужно. Обычно ее берут для определения вируса, так как он свободно передвигается по венам.

Расшифровка анализа ПЦР

Расшифровка анализа ПЦР не требует никаких особых медицинских знаний, так как она простая и доступна в понимании каждому человеку. Как правило, представляется она в виде небольшой таблицы. В первом столбце указывается название возбудителя, а во втором результат – отрицательный или положительный. Единица измерения МЕ/мл, что означает присутствие в одном мл образца того или иного количества копий ДНК. И чем выше эти показатели, тем в более тяжелой форме протекает болезнь.

Сроки выполнения

Как правило, результаты анализа ПЦР уже полностью готовы на следующие суки. Но, если требуется изучение какого-либо тяжелого случая, то может потребоваться использование культурального метода, который проводится в течение нескольких недель.

Стоимость ПЦР

Анализ ПЦР платный и в каждом регионе страны имеет разную стоимость. Варьируется она в пределах 400-1000 рублей. Однако может быть и выше. Здесь все зависит от применяемого метода – культурального или серологического. Естественно, что первый намного дороже.

ПЦР-диагностика: область применения и суть, плюсы и минусы диагностирования, подготовка к сдаче, болезни выявляемые при полимеразной цепной реакции

ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция) применяется для выявления активной стадии заболевания в комплексе с уже традиционными исследованиями, когда нет реакции иммунологическими и микробиологическими методами диагностики.

[list h3 h4]

Определенный период ПЦР-диагностику применяли только в научных целях, и только начиная с конца XX века и начала 21-го этот анализ стал своеобразным «золотым стандартом», приносящим большую пользу в различных областях медицины.

В чем суть ПЦР-диагностирования?

ПЦР-диагностика, в отличие от иммуноферментного анализа, способного обнаружить следы пребывания антител (АТ), устанавливает не только первопричины патологического состояния, но и выявляет наличие возбудителя инфекции на специфическом определённом участке ДНК или РНК при помощи ферментов в лабораторных условиях.

Анализ методом ПЦР имеет высокую точность, исключая возможность ложных реакций и совершенно необязательно брать кровь из вены на исследование, достаточно небольшого количества образцов ткани, биологической жидкости.

К вышеперечисленному варианту биологической среды материала для тестирования, содержащего предполагаемый инфекционный возбудитель по решению врача могут быть назначено несколько вариантов сразу, в том числе это может быть:

мазок (выделения из половых органов);
соскоб со слизистой (рта, носа, половых органов);
слюна, мокрота или плевральная жидкость;
сок простаты, исследование секрета предстательной железы на наличие вредителя;
плацентарная ткань или околоплодная жидкость;
общий анализ мочи на исследование осадка (после центрифугирования) при необходимости выявления микобактерий туберкулеза;
спинномозговая жидкость на предмет выявления инфекционного поражения ЦНС;
забор клеток или тканей (биоптата) из печени, двенадцатиперстной кишки, желудка и пр.

Данные образцы помещаются в специальный реактор и анализируются при многократном удвоении (амплификации) исследуемых фрагментов ДНК, путём повторных циклов репликации и денатурации с добавлением специфических ферментов для синтеза. По типу цепной реакции данный метод идентифицирует вид и индивидуальные характеристики ДНК или РНК патогена. В конечном итоге процесс проведения ПЦР при сравнительном анализе клонированного генетического материала позволяет выявить даже единичные клетки живого вируса, легко отличая уреаплазму от микоплазмы или же хламидии.

Преимущества и недостатки ПЦР-диагностики

У этого ПЦР-диагностики есть как преимущества, так несколько недостатков.

Преимущества диагностики:

определение возбудителя даёт прямое указание на наличие в генетическом материале нетипичного участка ДНК или РНК;
ПЦР диагностика дает 100% точности благодаря присутствию в исследуемом материале частиц нуклеиновых кислот (фрагменты ДНК или РНК) характерных только конкретному вирусу или бактерии;
высокая чувствительность ПЦР-системы, в сравнении с иными методами диагностики. ПЦР-анализу для определения наличия возбудителя достаточно одной клетки живого вируса (10-100 клеток в пробе), что даёт возможность обнаружения патогенного микроорганизма на раннем этапе заболевания при отсутствии выраженных симптомов, и в запущенных формах;
высокотехнологичная автоматизированная амплификация методом ПЦР повышает скорость выполнения анализа, проводя тестирование в день забора (выделяя не более 4-6 часов на диагностику). Это повышает производительность и даёт преобладание над культуральными методами исследования;
универсальность анализа позволяет с помощью генетического материала ДНК или РНК, забранного различными вариантами, обнаружить нескольких возбудителей из одной биологической пробы.

Если говорить о недостатках, то, учитывая чувствительность ПЦР-системы, одним из малоприятных моментов, являются:

изменчивость микроорганизмов. Недостаток состоит в том, что микроорганизмам присуща мутация, приводящая к изменению исследуемого генотипа возбудителя. И тест-система ПЦР в амплифицируемом участке генома не может уловить гибрид уже эволюционирующего возбудителя, так же как и иммунная система человека не распознает его, поэтому реакции на определение наличия инфекционного заболевания не произойдёт. Но для этого проходят различные разработки для усовершенствования метода ПЦР;
возможность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Чтоб не столкнуться с ложными результатами на одном из этапов ПЦР-диагностики, её нужно проходить внимательно, без нарушения процесса, соблюдая правила забора материала. Образцы могут поменять свою структуру или вовсе разрушиться, что может привести к ложноотрицательному или ложноположительному результату. Следует понимать, что такой результат может быть, когда инфекция уже убита, но мертвые клетки ещё не успели обновиться и при клонировании были учтены. Поэтому на ранних сроках после проведённого лечения применяют другие методы (например, БАК-посев), а уже после полного выведения из организма неактивных возбудителей инфекции проводиться анализ-контроль методом ПЦР. И уже лечащий врач принимает окончательное решение о целесообразности терапии, взяв во внимание все аргументы «за» и «против».

Подготовка к ПЦР-диагностике и условия сдачи анализов

Обратить внимание стоит на простую подготовку к ПЦР, для этого необходимо строго выполнить все рекомендации лечащего врача и соблюдать минимум несколько неоспоримых условий для более точного результата.

В зависимости от метода забора материала на обследование необходимо помнить, что:

для диагностики с помощью венозной крови пациенту необходимо сдавать анализ натощак, исключая даже употребление жидкости;
для сдачи мазка необходимо воздержаться от полового контакта как минимум на пару суток, допускается провести гигиену половых органов с вечера, но не в день сдачи анализа. Стоит выбрать оптимальное время для проведения исследования с учетом: за два дня до или после менструального цикла;
для любого метода забора материала следует прекратить за пару недель до сдачи применение антибактериальных лекарственных препаратов, предварительно проконсультировавшись с лечащим врачом, поскольку это может повлиять на достоверность результата;
для сдачи анализа мочи на определение наличия возбудителей необходимо не только соблюдать стерильность и гигиеничность, но и качественность собранного материала для исследования, несущего более точную информацию. Поэтому допустимо выдержать 2-3 часа с последнего мочеиспускания до сбора мочи или использовать утренний образец, дающий большую вероятность показать наличие воспалительного процесса.

Применение ПЦР и выявляемые заболевания

Для поиска возбудителей многих заболеваний не следует игнорировать вышеупомянутые рекомендации, а назначенное обследование врачом именно методом ПЦР-диагностики может обезопасить от серьёзных осложнений не только взрослого человека, но и маленького, ещё не родившегося, ребёнка в утробе матери.

[su_youtube_advanced url=»https://www.youtube.com/watch?v=CY3qc0GdvoA» width=»560″ https=»yes»]

Ведь чаще некоторыми типами вирусов (ВПЧ) страдает именно женская половина населения, существенно увеличивая возможность возникновения рака шейки матки или бесплодия. И, ввиду возможного негативного влияния на течение беременности и на развития плода, следует учитывать, что разнообразные группы микроорганизмов, передаваемых половым путём или при иммунодефиците трудно отнести к той или иной группе возбудителя, так как они очень взаимосвязаны (например, ТОРЧ-инфекции и ИППП). Зато полимеразная цепная реакция способна найти чужеродную структуру, определив конкретный тип вирусного ДНК в женском организме.

Расшифровка результатов анализа позволяет подтвердить или опровергнуть наличие болезней. Охватывая большой спектр возбудителей такой анализ очень актуален для своевременного выявления многих инфекций, таких как:

обнаружение ВИЧ-инфекции. Тяжёлого нарушения иммунитета инфекцией, поражающей в первую очередь иммунокомпетентные клетки, имеющиеся на поверхности иммунной системы на рецепторах СD4, впоследствии теряющих свою возможность защищаться от инфекций, и перестают реагировать на присутствие в плазме крови РНК вируса. В случае положительного результата при анонимном обследовании, его проходят повторно с добавлением дополнительных исследований;
вирусные гепатиты, чаще всего — гепатита С (содержащего РНК возбудитель), который в силу своей легкой переносимости трудно диагностировать иными методами, ведь ПЦР-метод является более оптимальным для распознания возбудителя в крови или биоптате печени. Острый гепатит проявляет себя на поздней стадии, формируя злокачественный воспалительный процесс. Однако стоит учесть, что если при сдаче анализа на наличие антител в крови (АТ) результат будет положительный, а ПЦР-анализ даст результат отрицательный, это может говорить о наличие вируса в организме в очень низком количестве, либо поражённые клетки находятся в ожидающей стадии в геноме клеток печени без выхода в кровяное русло. В таком случаи будет проводиться ряд повторных исследований для окончательного диагноза и методики лечения;
онкогенные вирусы, такие как ВПЧ (вирус папилломы человека) имеющих более 100 различных типов вируса, передающийся половым путём или во время медицинских манипуляций, через родовые пути проходит заражение новорожденного от матери, если она носитель папилломавирусной инфекции;
ИППП (инфекции, передающиеся половым путем);
подходит для выявления всех ЗППП (уреаплазмоз и микроплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, трихомониаз) и ТОРЧ-инфекций;
с большой степенью точности указывает на наличие инфекции мононуклеоза, характеризующегося поражением лимфатической и ретикулоэндотелиальной системы (увеличением лимфатических узлов, селезёнки, печени), можно выявить с помощью ПЦР-диагностики, взяв в качестве исследуемого материала сыворотку крови. Болезнь Филатова по внешним параметрам может проявиться как высыпания, желчность кожного покрова, белый налёт на языке.
цитомегаловирусная инфекция, проникающая в кровь больных СПИДом и перенёсших трансплантацию органов с применением препаратов для подавления иммунитета;
герпетическая инфекция, представляя из себя тот или иной тип герпеса, способного поразить половые органы, слизистую оболочку глаз или кожный покров;
туберкулез. При наличии основных симптомов болезни назначается прохождение ПЦР-анализа после результатов бронхоскопии, позволяя диагностировать активную стадию туберкулёза гораздо быстрее, чем с помощью бактериологического или бактериоскопического метода;
вирусное инфекционное заболевание, такое как клещевой энцефалит (Боррелиоз). Характеризуется поражением клеток нервной системы, интоксикацией, воспалением головного мозга и впоследствии развитием паралича. Для обнаружения антигена с помощью ПЦР-диагностики для выделения РНК-вируса берётся кровь и спинномозговая жидкость.
выявление хеликобактерной инфекции (приводящая к хроническому гастриту, язвенной болезни, опухоли желудка) методом ПЦР-диагностики позволяет обнаружить ДНК (генетический материал) хеликобактер пилори в биоптате, кале, слюне, различая штаммы патогенных бактерий по степени злокачественности.

ПЦР-диагностика инфекций развивается ускоренными темпами и успешно используется в онкологии, гинекологии, урологии, гастроэнтерологии, вирусологии и список постоянно пополняется, но не ограничивается только поиском возбудителей инфекционных заболеваний. Среди остальных практических применений ПЦР-метода можно также выделить использование исследования для установления отцовства и идентификации личности.