Пцр цмв что это

Что такое ПЦР на цитомегаловирус и как правильно подготовиться к сдаче анализа

Цитомегаловирус (ЦМВ) – одна из разновидностей герпеса. Он может приводить к появлению у человека симптомов, которые будут характерны для большого количества других заболеваний. Отличить цитомегаловирусную инфекцию (ЦМВИ) может быть достаточно сложно. Поэтому важно выявить или исключить присутствие в организме этого вируса. ПЦР на ЦМВ – простой и эффективный способ определить наличие герпесвируса.

Что такое ПЦР

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – метод лабораторной диагностики, при котором выявляется присутствие различных ДНК в забранном на анализ биоматериале. Этот метод используется для определения степени родства между людьми, для производства клонированных генов, для изучения генов в целом. Также метод ПЦР активно применяется при диагностике различных заболеваний, которые имеют инфекционную или наследственную природу. Выявление инфекционного заболевания возможно благодаря способности определить ДНК вируса в биоматериале человека.

ПЦР при цитомегаловирусе это эффективный метод, так как:

для анализа подходит практически любой материал – моча, кровь, слюна, соскоб с уретры и другие;
позволяет выявить ЦМВ на самых ранних стадиях заражения и при скрытом течении болезни;
ЦМВ определяется даже при малом его количестве в организме человека;
высокая скорость получения результатов;
гарантированная точность данных (при правильном взятии материала и предварительное подготовке к его сдаче).

ПЦР на цитомегаловирус

Как сдавать анализ

Правила подготовки к сдаче анализа на ЦМВ ничем не отличаются от рекомендаций относительно подготовки к какому-либо другому анализу. Соблюдение этих рекомендаций поможет получить достоверный результат.

Подготовка к тесту на определение ДНК cytomegalovirus DNA в крови:

Не принимать антибиотики в течение двух дней.
Не курить перед анализом.
В течение двух суток не употреблять жирную пищу и спиртные напитки.
Перед анализом нельзя проходить ректальный осмотр, физиотерапию, рентген.
Сдавать кровь натощак утром. В случае, если кровь будут сдавать вечером, нужно не есть в течение минимум 7 часов.

Если материал на ЦМВ сдаётся путём соскоба из влагалища и уретры:

Не вводить медикаменты и делать спринцевание в течение минимум 1 суток.
Не иметь половых контактов за 3 суток.
При соскобе из уретры необходимо не мочиться за два — три часа до сдачи биоматериала.

Если для ПЦР на ЦМВ будет сдаваться моча, то её нужно собирать утром после пробуждения, до приёма пищи и любых жидкостей. Биоматериал необходимо отдать на анализ в лабораторию в течение ближайших 3 часов после мочеиспускания.

Если анализироваться будет слюна на цитомегаловирус, то её следует сдавать также в утреннее время. Перед мазком на ЦМВ нельзя принимать пищу, пить различные жидкости, чистить зубы, курить.

Важно соблюдать все вышеперечисленные рекомендации. Это позволит поставить верный диагноз и возможность прогнозирования лечения. Отклонение от них может привести к получению ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Это может быть чревато усугублением состояния здоровья.

Цитомегаловирус Igg и Igm. ИФА и ПЦР при цитомегаловирусе, авидность к цитомегаловирусу

Когда ПЦР будет готов

Сроки готовности результатов ПЦР на ЦМВ зависят только от клиники или лаборатории, в которой сдавался анализ.

Многие клиники и лаборатории способны предоставить результаты ПЦР на ЦМВ на следующий рабочий день после сбора биоматериала. Часто данные можно получить уже в течение дня, когда был сдан анализ.

Однако иногда результат может быть известен только через 2-3 дня. С этим можно столкнуться при большой загруженности лаборатории, или если клиника вынуждена направлять материалы для анализа в другую лабораторию.

Сроки готовности результатов ПЦР на ЦМВ всегда озвучиваются и оговариваются заранее.

Цитомегаловирус в крови, моче, слюне, ложноположительный результат на цитомегаловирус

Расшифровка ПЦР при цитомегаловирусе

Отрицательный результат ПЦР на ЦМВ говорит об отсутствии заражения. Такой ответ бывает в двух случаях:

В материале не обнаружено ДНК фрагментов цитомегаловируса.
В материале недостаточно клеток, необходимых для проведения анализа и получения достоверного результата (нарушены правила сдачи материала или проведения анализа).

Положительный результат ПЦР на ЦМВ говорит об обнаружении патогена в организме. Такой ответ ПЦР возможен в двух случаях:

При исследовании было найдено ДНК цитомегаловируса. Пациент имеет первичное или повторное заболевание.

В биоматериале были обнаружены клетки, не специфичные для биоматериала (нарушены правила сдачи материала).

При анализе данных ПЦР на цитомегаловирус учитывается наличие антител IgM и IgG.

Наличие IgG говорит о том, что инфицирование вирусом произошло относительно давно, не менее 2 недель до проведения теста. Присутствие этих антител также может свидетельствовать о том, что заражение произошло несколько лет назад и возбудитель в организме находится в «пассивном» состоянии.

Положительная реакция на IgG может говорить, что у пациента есть иммунитет, он является носителем вируса и заражение является невозможным; что у пациента произошло повторное обострение болезни из-за снижения общей защитной функции организма.

Наличие в биоматериале антител IgM свидетельствует о том, что заражение произошло относительно недавно и является только появившимся, первичным, т. е. до этого в организме пациента не было антител к этому вирусу. Также IgM могут указывать, что вирус «активизировался» и хроническое состояние латентной инфекции перешло в острое.

Присутствие IgM в расшифровке ПЦР не всегда говорит о наличии ЦМВ. Результат может быть ложноположительным. В данном случае требуется более детальное обследование и наблюдение «в динамике».

Наиболее внимательно к процессу сдачи ПЦР на ЦМВ и точности его результатов следует относиться людям с ВИЧ, родителям маленьких детей и женщинам в период беременности. Иногда потребуется неоднократная сдача анализа.

Цитомегаловирус в крови, моче, слюне, ложноположительный результат на цитомегаловирус

Цитомегаловирус присутствует в организме около 90% взрослых людей. И только у половины из них он может активизироваться и привести к развитию болезни. Симптомы, которые он вызывает, сходны со многими другими заболеваниями. Чтобы врач смог поставить верный диагноз и выбрать самый эффективный способ лечения необходимо сдать ПЦР на определение ЦМВ.

comments powered by HyperComments

Что такое пцр-диагностика цитомегаловируса

При планировании беременности всем нужно сдать анализ на цитомегаловирус пцр (полимеразная цепная реакция). Более того, зачем он нужен? Есть такая давняя шутка: нет абсолютно здоровых людей, есть недообследованные. К сожалению, здесь можно найти только небольшую долю шутки, ведь на самом деле все вполне серьезно. Например, у 80% взрослых людей обнаруживаются антитела к цитомегаловирусу, о котором наши родители даже не слышали Понятно, что для выявления микроба, ведь именно таким анализом можно выявить не следы его присутствия в организме (как при исследовании крови на антитела), а сам вирус.

Один из многих

Действительно, еще лет 20 назад о цитомегаловирусе мало кто знал, кроме медиков. Дело в том, что для большей части населения он не очень опасен, так как вызывает симптомы, похожие на проявления ОРВИ. Стоит повториться: антитела к микроорганизму выявляются у большей части взрослых, но все обследуемые даже не подозревали, что когда-то болели или являются носителями ЦМВИ.

Однако этот же вирус может спровоцировать патологии развития плода, сложные или преждевременные роды. Он же вызывает формирование серьезных патологий у людей со сниженным иммунитетом, например, с врожденным или приобретенным иммунодефицитом.

Кроме того, цитомегаловирус у ребенка до 5 лет способствует частым простудным заболеваниям, которые протекают с осложнениями (бронхит, пневмония и так далее).

Этот вирус относится к семейству герпесвирусов. Заражение, преимущественно, происходит при контакте с биологическими жидкостями – слюной, кровью, грудным молоком, спермой или слизью влагалища. Возможна передача и воздушно-капельным, контактно-бытовым путями, но таких случаев меньше.

Как уже было сказано, симптомы заражения очень похожи на ОРВИ: повышается температура тела, ухудшается самочувствие, возможна боль в мышцах, тошнота. После выздоровления в крови можно обнаружить небольшое количество антител к вирусу – остается пожизненный иммунитет, если организм поборол болезнь. Но чаще всего цитомегаловирус продолжает циркулировать просто в латентной форме, то есть, никак себя не проявляя, до тех пор, пока иммунитет человека не ослабнет при переохлаждении, серьезной нагрузке и так далее.

Одним словом, ведет себя так же, как типичный вирус, вызывающий ОРВИ, только живет в организме постоянно. Утешает то, что для взрослого человека с нормальным иммунитетом он не опасен, так как специфического лечения не существует, а неспецифическое имеет низкую результативность.

Как выявить микроорганизм

Точная диагностика цитомегаловируса возможна только при проведении ПЦР. Это самый точный и информативная методика, позволяющий найти вирус в любой биологической жидкости. Методом ПЦР можно выявить ДНК микроорганизма в искусственных условиях (инвитро) с высокой точностью, погрешность не превышает 3-5%, это действительно наилучший показатель. При этом диагностика цитомегаловируса возможна на самых ранних стадиях, до проявления симптомов, что особенно актуально при планировании беременности или иммунодефиците. Значит, можно выявить вирус и в латентной или персистирующей форме.

Принцип диагностики

В процессе цепной полимеразной реакции проводится увеличение небольшого фрагмента нуклеиновой кислоты (ДНК), полученного из биологического материала. Благодаря возможности увеличивать фрагменты, можно воспроизвести всю цепочку, а так как у каждого организма ДНК уникальная, получается легко распознать возбудителя заболевания.

Такое копирование фрагментов проводится с участием ферментов. Копируется только тот участок, который подходит под заданные условия, естественно, если он присутствует в биоматериале. Специалисты знают, какую ДНК имеет цитомегаловирус, с какой последовательностью аминокислотных пар. Изучая пробу взятой на анализ жидкости, проверяют, есть ли в ней соответствующие фрагменты. Если да – их отделяют и проводят ПЦР.

Преимущества этого вида исследования неоспоримы:

прямое выявление (обнаруживается живой вирус, а не следы его жизнедеятельности);
высокая специфичность, без вероятности ложного определения возбудителя;
возможность обнаружить несколько микроорганизмов в одной пробе;
выявление хронических, скрытых форм инфекций;
выявление внутриклеточных паразитов;
обнаружение возбудителей с высокой антигенной изменчивостью.

Какие жидкости можно исследовать:

кровь;
мочу;
слюну;
мокроту;
выделения из уретры;
грудное молоко;
влагалищные выделения;
спинномозговую жидкость.

Расшифровка результатов ПЦР

Диагностика цитомегаловируса проводится быстро и всегда дает однозначный результат, положительный или отрицательный.

Отрицательным считается тот, при котором в исследуемом образце не было выявлено следов искомой инфекции. Значит, человек здоров, не является носителем, а его проблемы вызваны другим возбудителем (если диагностика проводилась пациенту с определенными жалобами). Если же вирус был обнаружен, это значит, что он присутствует в организме. В зависимости от специфики случая принимается решение о лечении, профилактике осложнений и так далее.

Таким образом, значение результатов всегда точное. Дополнительные исследования, тот же анализ на антитела, позволяют выявить количество вируса, то, какие изменения в организме он уже успел вызвать.

Насколько необходимо лечение

То, что вирус выявлен, еще не означает необходимость бить тревогу и срочно лечиться. В тех случаях, когда обследуется взрослый человек без проблем с иммунной системой, никакой терапии не требуется. Часто болеющие дети, у которых простуда проходит с осложнениями, нуждаются в укреплении иммунитета и своевременной коррекции выявленных патологий внутренних органов. Что может означать положительные результаты анализа для будущей матери? Прежде всего, более внимательное отношение к своему здоровью, а также, прием иммуномодуляторов, витаминов, укрепление иммунитета.

Но цитомегаловирус, обнаруженный при обследовании, не означает невозможность беременности или обязательное рождение ребенка с патологиями. Многие женщины рожают здоровых детей без каких-либо осложнений, и только потом у них выявляются антитела к вирусу.

Как такового специфического лекарства против этой инфекции не существует, собственно, как и против большей части вирусов. Но так как организм сам может ее побороть, есть одна, универсальная для всех рекомендация: нужно укреплять иммунитет. Здоровый образ жизни, закаливание, спорт – все это повышает сопротивляемость организма, то есть, если вдруг произойдет заражение, он сам сможет справиться с вирусом. Это в одинаковой степени касается и детей, и взрослых.

ПЦР цитомегаловируса: положительный и отрицательный, расшифровка

ПЦР цитомегаловирус – один из самых эффективных современных методов диагностики. Данная техника позволяет с высокой степенью определять наличие или отсутствие инфекции в организме, а также уточнять степень ее развития.

Что такое ПЦР-анализ на цитомегаловирус и в каких случаях назначается?

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, была разработана американским ученым Кэри Муллисом в 1983 г. Метод получил всеобщее признание, и в 1993 г. принес своему автору Нобелевскую премию в области достижений по химии.

В основе ПЦР – выявление ДНК возбудителя инфекционного заболевания. Данная техника считается особенно информативной в отношении цитомегаловируса (ЦМВ), принадлежащего к ДНК-содержащим разновидностям болезнетворных микроорганизмов.

К проведению исследования методом ПЦР прибегают в следующих ситуациях:

На этапе планирования беременности.
При наличии фетоплацентарной недостаточности.
У пациентов с неопластическими заболеваниями, ВИЧ-инфекцией.
В период приема цитостатиков.
При клиническом проявлении патологии на фоне отсутствия возбудителя.
В период приема противораковых лекарственных препаратов.
При повышении температуры тела без видимой причины.
Перед процедурой сдачи крови у доноров.
При длительном течении воспалительных процессов у детей и взрослых.

Анализ на ПЦР на цитомегаловирус показан при проведении обследования новорожденных младенцев. У грудничков биоматериал берут не позже 10-14 дня после появления на свет.

Метод также используют в педиатрии во время проведения диагностики у детей с нетипичным течением пневмонии. В гинекологии он актуален для женщин при невынашивании беременности, или подозрении на внутриутробное инфицирование плода.

Помимо медицины ПЦР нашел свое применение в других сферах. Криминалисты с его помощью выявляют «хозяина» обнаруженного на месте преступления биоматериала. Иногда ПЦР используют при определении отцовства или проведении экспериментов с мутациями ДНК.

Читайте также: Терапия гарднереллеза у мужчин

Материалы для исследования

Методика полимеразной цепной реакции предусматривает работу с различными жидкими средами:

кровью;
мочой;
выделениями из половых органов;
спинномозговой жидкостью;
мокротой;
слюной;
мазками из горла;
околоплодными водами;
соскобом клеток эпителия;
грудным молоком;
биоптатами желудка и 12-перстной кишки.

Выявление цитомегаловируса в имеющемся биоматериале осуществляется в лабораторных условиях с применением высокоточной современной техники. Для этих целей предназначен специальный реактор, работающий на молекулярно-генетическом уровне.

В случаях, когда другие диагностические методы не способны предоставить нужную информацию относительно развития вируса в организме пациента, ПЦР становится единственным безошибочным способом определения инфекции.

Подготовка к анализу ПЦР

Чтобы получить достоверные результаты обследования, накануне проведения процедуры потребуется соблюдать нижеприведенные правила для пациентов:

За 6-8 часов до сдачи крови отказаться от употребления любых продуктов питания.
В течение 24-х часов, предшествующих забору биоматериала, исключить прием алкогольных напитков, физическую активность.
За сутки до обследования избегать любых форм сексуальной близости.
В течение 2-3 часов до взятия мазка из половых путей следует воздерживаться от мочеиспускания, курения.
За неделю до сдачи анализа прекратить прием каких-либо лекарственных препаратов (в первую очередь антибиотиков).

Если сдача крови предстоит грудничку или ребенку постарше, родителям потребуется обеспечить его достаточным количеством питья. За 30 минут до процедуры следует давать малышу достаточное количество кипяченой воды.

Анализ

Чаще всего для проведения ПЦР берется кровь из вены. Такой способ диагностики наиболее удобен, так как не вызывает существенного дискомфорта, может применяться для обследования пациентов любого возраста и пола. Манипуляции выполняются стерильными одноразовыми инструментами, в ранние утренние часы, натощак.

Взятие мазка на цитомегаловирус у женщин также позволяет быстро выявить наличие вируса в организме. Пациентка в этот момент находится в гинекологическом кресле, а врач выполняет забор биоматериала из влагалища и шейки матки. Для этого специалист использует маточное зеркало и тампон-зонд. У девушек, не живущих половой жизнью, зеркало не используется.

Чтобы взять мазок у мужчины, уролог использует стерильный ватный тампон. Доктор вводит его в уретру, затем вращательными движениями извлекает. Процедура часто вызывает дискомфорт, однако болезненные ощущения отсутствуют.

Вид биоматериала определяется специалистом, исходя из индивидуальных особенностей обследуемого. При отсутствии следов вируса в крови или мазках часто проводятся дополнительные тесты.

Расшифровка результатов

Проведение диагностики цитомегаловируса методом полимеразной цепной реакции позволяет быстро получить однозначный результат – отрицательный/положительный. В первом случае бланк с информацией относительно проведенного обследования содержит словесную формулировку «не обнаружено», что означает отсутствие следов искомой инфекции в биоматериале. В случае наличия жалоб проводится дополнительная диагностика с целью выявления других видов возбудителей.

Читайте также: Лечение остроконечных кондилом у женщин

Положительный результат говорит о факте заражения цитомегаловирусом, его пребывании в организме пациента в пассивной форме, или выделении в небольших количествах. После получения такого ответа обязательным становится проведение адекватной терапии. Нередко назначаются дополнительные исследования (анализ на антитела), позволяющие определить изменения, вызванные жизнедеятельностью вируса в теле пациента.

Метод ПЦР также способен показывать количество присутствующих микроорганизмов. Количественный анализ ПЦР становится особенно важным при выборе эффективной терапевтической тактики.

Существует так называемое «здоровое носительство», при котором ПЦР демонстрирует положительный результат, однако активная форма инфекции не наблюдается. В таких случаях отсутствует типичная симптоматика, лечение не проводится, однако пациенту рекомендовано наблюдаться у врача.

Где и как сдавать анализ на ПЦР на ЦМВ

Сдавать анализы на ПЦР на ЦМВ можно на усмотрение пациента – как в государственном медицинском учреждении, так и в частной клинике. Обязательными условиями успешного проведения обследования являются:

наличие в учреждении необходимого диагностического оборудования;
высокий профессионализм медицинского персонала;
добросовестная подготовка пациента к процедуре.

При необходимости прохождения повторного исследования на ЦМВ следует обращаться в заведение, в котором проводились предыдущие процедуры. Это позволит получить максимально точные результаты, т. к. показатели, соответствующие норме, могут отличаться в каждой диагностической лаборатории. Осуществление ПЦР-диагностики строится на реализации высоких требований в процессе проведения исследования.

Сдавать подобный анализ рекомендуется только в профессиональных лабораториях, имеющих проверенную репутацию и компетентных сотрудников, внедряющих строгие системы контроля за качеством медицинской практики (Инвитро, Гемотест и др.)

ПЦР на цитомегаловирус при беременности

Обследование женщин на наличие цитомегаловируса проводится как на этапе планирования беременности, так и во время вынашивания малыша. Своевременное выявление инфекции и прохождение соответствующего лечения невероятно важны, так как позволяют избежать выкидыша в первом триместре, или развития у плода необратимых патологий в более позднем сроке вынашивания (поражений ЦНС, ухудшения слуха или зрения).

Читайте также: Эффективные средства и лекарства от лобковых вшей

ПЦР у пациенток, находящихся в «интересном» положении, позволяет обнаруживать даже незначительное присутствие вируса в исследуемом биоматериале. Таковым в период беременности становится кровь, урина, выделения из влагалища, содержимое цервикального канала, цереброспинальная жидкость, слюна, амниотическая (околоплодная) жидкость.

Обследование на наличие цитомегаловируса методом ПЦР у беременных пациенток проводится на бесплатной основе. Такая услуга предоставляется в государственных медицинских учреждениях после предъявления страхового полиса.

Сроки готовности ПЦР-анализа

Для проведения анализа ПЦР требуется временной промежуток в пределах 24-х часов. Окончательный результат предоставляется по истечении 1,5-2 дней.

В случае необходимости процедура выявления цитомегаловируса может быть проведена за несколько часов. Достоверность результатов при этом остается на уровне 99-100 %.

Некоторые специалисты рассматривают в качестве минуса метода ПЦР неспособность определять характер инфекции – первичный или повторный. Кроме этого в случае с ЦМВИ и другими патологиями данная техника не позволяет обнаруживать отличия между активным и «спящим» вирусом.

Стоимость процедуры

Стоимость проведения диагностики методом ПЦР в различных лабораториях варьируется в незначительных пределах, определяется разновидностью и сроком исследования биоматериала. Средняя цена обычной диагностики составляет от 6, 95 $ до 15 $. Ускоренное проведение обследования предусматривает двукратное увеличение стоимости услуги.

Для пациентов, желающих сэкономить материальные средства, существует специальный фиксированный пакет анализов.

Такая услуга предоставляется большинством частных клиник, проводящих обследования с использованием методики ПЦР.

Цитомегаловирусная инфекция

Цитомегаловирус (ЦМВ) или вирус герпеса 5 типа, – ДНК-содержащий вирус Cytomegalovirus hominis семейства Herpesviridae подсемейства Betaherpesvirinae. Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) человека – хроническая антропонозная болезнь вирусной этиологии, характеризующаяся многообразием форм патологического процесса и клинических проявлений – от латентной инфекции до клинически выраженного генерализованного заболевания. Заболевание ЦМВИ классифицируют в зависимости от сроков и механизмов заражения (врожденная и приобретенная инфекция, пренатальная, интранатальная и постнатальная), степени активности вируса (латентная, персистирующая и реактивированная инфекция), первичного или повторного заражения (острая инфекция, реактивация вируса и реинфекция).

Отличительными особенностями инфекции являются возможность ЦМВ персистировать во многих органах и способность его к инфицированию практически всех клеток организма человека, что предопределяет многообразие клинических проявлений, как при врожденной, так и приобретенной формах инфекции. ЦМВ рассматривается в качестве основного возбудителя внутриутробной инфекции, имеющей самые различные исходы: от инфицирования без реализации инфекции, формирования пороков развития и заболевания новорожденных до гибели плода и мертворождения.

ЦМВИ – типичный антропоноз. Источником инфекции является больной человек либо вирусоноситель. Пути передачи: вертикальный, половой, воздушнокапельный, фекально-оральный, артифициальный (парентеральный). Факторами передачи являются кровь, цервикальный и вагинальный секреты, сперма, женское молоко. Вирус выделяется с мочой, фекалиями, слюной, мокротой, в меньшей степени – со слезной жидкостью. Заражение может происходить также при переливании крови, трансплантации органов и тканей. Цитомегалия — широко распространенная инфекция, среди взрослого населения РФ у 73–98% обнаружены АТ-ЦМВ.

ЦМВИ относится к оппортунистическим инфекциям, особую опасность представляет для больных с иммунодефицитами различной природы. Иммуносупрессия приводит к реактивации латентной инфекции и развитию манифестных вариантов болезни с поражением различных органов и систем, способных привести к летальному исходу. Манифестная ЦМВИ занимает одно из первых мест в структуре оппортунистических заболеваний у ВИЧ-инфицированных пациентов. Данная патология встречается у 20–40% больных СПИДом, не получающих антиретровирусной терапии. Клинически выраженная ЦМВИ — одно из серьезных инфекционных осложнений при трансплантации органов, инфекция обостряет процессы, приводящие к реакции отторжения трансплантата.

При персистенции ЦМВ в организме человека выделяют две стадии, которые сменяют друг друга – продуктивную (с репликацией вируса) и латентную. Выход вируса из латентной стадии означает реактивацию, что может быть предопределено снижением иммунорезистентности либо появлением иных факторов, способствующих его репродукции. Выявление прямых маркеров репликации вируса (виремия, ДНК или АГ) свидетельствует о наличии инфекции.

При первичном заражении на 5–7 день вырабатываются АТ IgM, через 10–14 дней – низкоавидные АТ IgG, затем постепенно авидность этих АТ увеличивается, они становятся высокоавидными. АТ IgM исчезают через один месяц, низкоавидные АТ IgG – через 1–3 месяца, высокоавидные АТ IgG циркулируют в крови носителя пожизненно. При первичном инфицировании в стадии “серологического окна”, до начала синтеза АТ, происходит активная репликация вируса, в этот период единственным маркером инфекции является ДНК вируса в крови. При реактивации возможно появление АТ IgM и/или IgA, а также низкоавидных АТ IgG; в пик реактивации выявляются ДНК либо АГ ЦМВ в плазме крови.

Решающим условием антенатальной ЦМВИ является виремия у матери вследствие первичного или повторного заражением вирусом или его реактивации. ЦМВ способен преодолевать плацентарный барьер и поражать плод в различные сроки беременности, вызывая врожденную инфекцию. По данным различных авторов, активная форма ЦМВИ выявляется у женщин с отягощенным акушерским анамнезом в 35–60% случаев. Входными воротами для вируса в антенатальном и интранатальном периодах течения беременности могут быть плацента и плодные оболочки, в неонатальном периоде и позже – дыхательные пути и пищеварительный тракт, возможно заражение и через кровь.

ЦМВ обладает преимущественно нейротропным, эпителиотропным, гепатотропным и кардиотропным действием на плод. Его воздействие может быть и опосредованным, приводящим к различным нарушениям в плаценте: расстройству маточно- плацентарного кровообращения, отклонению в эволюционном формировании плаценты. Клиническим эквивалентом этих расстройств могут быть сокращение продолжительности беременности и преждевременное родоразрешение, рождение детей с симптомами перенесенной гипоксии или признаками внутриутробной гипотрофии, общая задержка внутриутробного развития.

Наибольшее значение для развития ранних перинатальных поражений плода имеет гематогенный путь инфицирования. Кроме того, для интранатальных и более поздних поражений характерными являются вертикальный и контактный пути передачи ЦМВ, нередки также случаи смешанного инфицирования. Острая ЦМВИ может протекать в виде генерализованной формы с присоединением вторичных инфекций и иметь летальный исход уже в первые недели жизни ребенка. При инфицировании плода во время реактивации латентной ЦМВИ чаще имеют место поздние проявления инфекции в виде нарушений зрения, слуха, задержки психического развития, двигательных нарушений. При отсутствии выраженных иммунологических нарушений острая ЦМВИ переходит в латентную с пожизненным присутствием вируса в организме человека. Развитие иммуносупрессии, в частности связанной с ВИЧ-инфекцией, ведет к возобновлению репликации ЦМВ, появлению вируса в крови и манифестации заболевания. Летальность больных ВИЧ-инфекцией, страдающих ЦМВИ, составляет 25–27%.

Клинический диагноз ЦМВ-инфекции требует обязательного лабораторного подтверждения. Выявление в крови пациента АТ-ЦМВ IgМ и/или IgG недостаточно ни для установления факта активной репликации ЦМВ, ни для подтверждения манифестной формы заболевания.

Показания к обследованию

Женщины, планирующие беременность;
женщины с отягощенным акушерским анамнезом (перинатальные потери, рождение ребенка с врожденными пороками развития);
беременные женщины (в первую очередь имеющие УЗИ-признаки внутриутробной инфекции, лимфоаденопатии, лихорадку, гепатит и гепатоспленомегалию неясного генеза);
беременные женщины с иммунодефицитом, в т. ч. с ВИЧ-инфекцией;
матери, родившие ребенка с признаками внутриутробной инфекцией или врожденными пороками развития;
дети, имеющие симптоматику врожденной инфекции, пороки развития или рожденные женщинами из группы риска по внутриутробной передаче ЦМВ;
пациенты (в первую очередь новорожденные) с сепсисом, гепатитами, менингоэнцефалитом, пневмонией, поражением ЖКТ;
пациенты с наличием иммунодефицита с клинической картиной органных или генерализованных поражений.

Дифференциальная диагностика

Врожденная ЦМВИ – краснуха, токсоплазмоз, неонатальный герпес, сифилис, бактериальная инфекция, гемолитическая болезнь новорожденных, родовая травма, наследственные синдромы;
мононуклеозоподобное заболевание – инфекции, вызываемые вирусом Эпштейна-Барр, герпес-вирусами 6 и 7 типов, острая ВИЧ-инфекция, стрептококковый тонзиллит, дебют острого лейкоза;
заболевание органов дыхания у детей раннего возраста – коклюш, бактериальный трахеит или трахеобронхит, РС-вирусной инфекция, герпетический трахеобронхит;
у больных с иммунодефицитом – пневмоцистная пневмония, туберкулез, токсоплазмоз, микоплазменная пневмония, грибковые и герпетические инфекции, бактериальный сепсис, лимфопролиферативные заболевания, ВИЧ-энцефалит, нейросифилис, прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия;
полинейропатия и полирадикулопатия – полирадикулопатия, вызванная герпесвирусами 2 и 6 типов, синдром Гийена-Барре, токсическая полинейропатия, связанная с приемом лекарственных средств, алкоголя, наркотических психотропных веществ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает микроскопические исследования, выявление возбудителя в культуре клеток, обнаружение АГ или ДНК, определение АТ IgM, IgА, IgG, авидности АТ IgG.

Материал для исследования

Кровь (сыворотка, плазма), лейкоциты крови, моча, слюна, СМЖ – культуральные исследования, выявление ДНК;
пуповинная кровь, амниотическая жидкость – выявление ДНК;
слюна, моча – выявление АГ;
сыворотка/плазма крови – определение АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Использование метода ПЦР позволяет определить наличие ДНК вируса в тканях и биологических жидкостях. Исследование обладает высокой специфичностью (100%) и чувствительностью (85–100%). ДНК ЦМВ может быть выявлено и при латентной ЦМВИ, указывая на продолжающуюся репликацию вируса даже при полном отсутствии клинических симптомов болезни. Использование ПЦР в реальном времени позволяет определить уровень виремии («вирусную нагрузку») в крови и СМЖ.

Выделение вируса из лейкоцитов крови, мочи, слюны, ликвора, спермы и др. в культуре клеток долгое время называли «золотым стандартом» в диагностике ЦМВИ. В настоящее время, с появлением высокочувствительных и специфичных молекулярно-биологических методов, вирусологические исследования уже не занимают главного места в лабораторной диагностике ЦМВИ. Это обусловлено как особенностями вируса – на результат культивирования влияет неустойчивость ЦМВ к изменению температуры и замораживанию, так и необходимостью выполнения исследований в специально оборудованной вирусологической лаборатории, которыми обычно не располагают лечебно-профилактические учреждения. Кроме того, вирусологическое исследование не позволяет отличить первичное инфицирование от рецидивирующей формы ЦМВИ, особенно при бессимптомном течении. Некоторые лаборатории используют “быстрый культуральный метод” с предварительным внесением биоматериала в культуру фибробластов и выявлением цитопатического действия ЦМВ при применении РИФ.

Для обнаружения АГ вируса в слюне и моче используют метод РИФ, по количеству светящихся клеток можно приблизительно оценить интенсивность выделения вируса. В связи с персистенцией ЦМВ обнаружение АГ не указывает на активность инфекционного процесса, для ее оценки требуются дополнительные исследования – выявление отдельных АГ вируса (р55, рр65 и др.).

При проведении микроскопического исследования (световая микроскопия) основными морфологическими признаками ЦМВИ являются гигантские клетки с внутриядерными включениями (цитомегалы). Их можно обнаружить в эпителии почечных канальцев, желчных протоках, выводных протоках слюнных желез, поджелудочной железы, ткани легких, клетках глии, нейронах, эндотелиоцитах. Наличие таких клеток указывает на репродукцию вируса, однако они обнаруживаются не во всех случаях активной инфекции. Диагностическая чувствительность метода не превышает 50%.

Для определения АТ-ЦМВ обычно используют метод ИФА. Наличие АТ IgM свидетельствует в пользу острой инфекции или реактивации. Реактивация гораздо чаще сопровождается гиперпродукцией АТ IgА, чем IgM. Выявление АТ IgG имеет низкое диагностическое значение. Диагностическую ценность теста повышает определение авидности АТ IgG: выявление низкоавидных АТ IgG свидетельствует о текущей или недавно перенесенной ЦМВИ, снижение индекса авидности возможно и при реактивации. Обнаружение высокоавидных АТ позволяет исключить первичную инфекцию, однако реактивация может протекать при наличии высокоавидных АТ, что подтверждается обнаружением ЦМВ, его АГ («ранних белков») или ДНК, а также выявлением АТ IgА.

Определение специфических АТ к вирусу помогает в распознавании заражения человека ЦМВ, но ввиду длительного периода нарастания титра АТ от момента инфицирования, последующего долгого сохранения их в крови, трансплацентарного перехода АТ IgG от матери к плоду (выявляются у ребенка до 1,5 лет) диагностическая ценность исследования ограничена. При наблюдении в динамике (2–4 недели) повышение титра АТ IgG в 4 раза указывает на активную ЦМВИ. Однако необходимость длительного периода наблюдения (до 4 недель) и возможность сохранения повышенного титра АТ на протяжении ряда лет лимитирует использование такого подхода к диагностике.

Дополнительным исследованием при поражении мозга, вызванного ЦМВ, может быть параллельное обнаружение АТ IgG в периферической крови и СМЖ методом ИФА с последующим расчетом их соотношения. Значение соотношения позволяет выявить интратекальную продукцию АТ и соответственно вовлечение в инфекционный процесс ЦНС.

Иммуноблот позволяет детектировать АТ IgM и IgG к отдельным белкам ЦМВ, подтвердить специфичность исследования, следить в динамике за появлением и исчезновением отдельных белков, что имеет высокое диагностическое и прогностическое значение. Наличие АТ к отдельным АГ вируса подтверждает формирование иммунного ответа к ЦМВ.

Показания к применению различных лабораторных исследований и интерпретация их результатов у разных категорий обследуемых

Диагностика первичного заражения, в т. ч. в период беременности, возможна только у пациентов, в крови которых отсутствуют АТ-ЦМВ. Независимо от клинических вариантов заболевания, при первичной ЦМВИ выявляются прямые (присутствие вируса, его ДНК или АГ) и косвенные (АТ-ЦМВ) лабораторные маркеры активной репликации ЦМВ. При обследовании больных при подозрении на активную ЦМВИ и манифестную форму заболевания (ЦМВ-болезнь) необходимо количественное определение содержания ДНК ЦМВ в крови. Определение ДНК ЦМВ в ликворе, плевральной жидкости, БАЛЖ, биоптатах бронхов, биоптатов органов выполняют при наличии соответствующей органной патологии.

Выявление прямых маркеров репликации вируса (виремия, ДНК или АГ) свидетельствует о наличии инфекции. Выявление ДНК ЦМВ или АГ вируса в крови беременной женщины – основной маркер высокого риска заражения плода и развития врожденной ЦМВИ.

Отсутствие АТ-ЦМВ IgM, IgА и IgG означает отсутствие ЦМВ в организме. Однако у лиц с выраженным иммунодефицитом при активной репликации ЦМВ продукция специфических АТ может быть снижена до неопределяемого уровня.

Выявление АТ-ЦМВ разных классов позволяет определить фазы инфекционного процесса (репликативная или латентная). АТ IgM чаще оценивают как маркер первичной герпес-вирусной инфекции. При выявлении АТ IgM для подтверждения инфицирования ЦМВ рекомендуются дополнительные исследования: определение АТ IgА или авидности АТ IgG, выявление АТ к отдельным белкам с использованием иммуноблота; повторное обследование женщины или ребенка через 2 недели. Выявление АТ IgА и(или) низкоавидных АТ IgG подтверждает наличие инфекции. При повторном выявлении АТ IgM и отсутствии IgА и(или) низкоавидных IgG результат выявления АТ IgM считают ложноположительным.

Выявление АТ IgM и IgG к предранним белкам-антигенам и низкоавидных АТ IgG свидетельствует о первичном инфекционном процессе.

Обнаружение только АТ IgG не позволяет охарактеризовать период заболевания. При наличии иммуносупрессии классического (4-х кратного) увеличения АТ IgG во время рецидива не наблюдают.

Установление факта инфицирования плода осуществляется на основании обнаружения ДНК ЦМВ. Выбор биологического материала определяется с учетом срока гестации, обусловливающего возможность проведения того или иного метода инвазивной пренатальной диагностики: амниотическая жидкость – 16–23 недели, пуповинная кровь – 20–24 недели. Косвенным подтверждением факта инфицирования плода является обнаружение АТ IgM и/или АТ IgА в пуповинной крови (проведение исследования возможно с 22 недели беременности).

Лабораторная диагностика врожденной ЦМВИ основана на обнаружении ЦМВ, его ДНК или АГ в различном биологическом материале (периферическая кровь, моча, слюна, смывы и мазки от ротоглотки, СМЖ) и выявлении в сыворотке или плазме крови АТ IgМ и IgА в течение первых 7 дней после рождения. Проведение исследования в более поздние сроки не позволяет дифференцировать врожденную и приобретенную инфекцию. Выявление ДНК ЦМВ или АГ вируса в крови, моче, соскобах со слизистой ротовой полости через 4–6 недель жизни ребенка при отсутствии вируса в первые 2 недели говорит об интранатальном или раннем постанатальном заражении. Подтверждением манифестной ЦМВИ у детей первых месяцев жизни является наличие ДНК ЦМВ в крови.

При сомнительных результатах дополнительную диагностическую информацию может дать выявление АТ IgМ к отдельным белкам-антигенам вируса методом иммуноблота. Отсутствие АТ-ЦМВ у детей с врожденной ЦМВИ может быть связано с развитием иммунологической толерантности к АГ вируса цитомегалии (инфицирование ЦМВ не сопровождается эффективным синтезом АТ-ЦМВ).

При обследовании детей в постнеонатальном возрасте показано выявление возбудителя (классический или модифицированный вирусологический метод), его ДНК или АГ («ранних белков») и АТ IgМ и IgА. Выявление анти-ЦМВ IgМ у детей первых недель жизни считают критерием внутриутробного заражения вирусом. Недостатком определения АТ IgМ служит их частое отсутствие в крови при наличии активного инфекционного процесса и не менее частые ложноположительные результаты. При обследовании детей в возрасте до 4–6 месяцев жизни целесообразно одновременное определение АТ у ребенка и матери с последующим сопоставлением величины их уровня (титра) и характера авидности. При обследовании ребенка в возрасте старше 6 месяцев может быть исследована только кровь ребенка. Для исключения ЦМВИ у детей первого года жизни рекомендуется определение ДНК или АГ в моче.

Выявление АТ IgG в сыворотке крови новорожденного без сопоставления с уровнем АТ в крови матери не является диагностически значимым вследствие возможности их трансплацентарного переноса из материнского организма. Только при динамическом (с интервалом в 14–21 день) сравнении уровня АТ IgG новорожденного ребенка с уровнем АТ IgG в крови матери можно судить об их природе. Если титры АТ IgG у ребенка при рождении равны материнским, а при повторном исследовании через 3–4 недели снижаются приблизительно в 1,5–2 раза, то АТ, выявленные у ребенка, являются материнскими.

Скрининг беременных женщин – выявление АТ IgМ и низкоавидных АТ IgG. Для исключения реактивации целесообразно определение АТ IgА и низкоавидных АТ IgG.

Обследование больных с наличием иммунодефицита при подозрении на активную ЦМВИ и манифестную форму заболевания (ЦМВ-болезнь) включает гистологическое исследование биопсийных материалов для выявление цитомегалов (окраска гематоксилином и эозином), обнаружение ДНК ЦМВ в ликворе, плевральной жидкости, БАЛ, биоптатах бронхов, биоптатов внутренних органов при наличии соответствующей органной патологии; выявление АГ ЦМВ в крови, определение концентрации ДНК ЦМВ в крови методом ПЦР. В диагностике ЦМВИ у ВИЧинфицированных наиболее информативно наличие в крови ДНК ЦМВ в высокой концентрации (в плазме крови >10000 копий/мл, в лейкоцитах > 1000 копий/ 105 лейкоцитов).