Диагностическая лаборатория в Уфе
Определить группу крови и резус фактор
Определение группы крови и резус-фактора Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам
Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I(0), II(А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV(АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая тарелка, предметные стекла, стерильные копьевидные иглы для прокола кожи пальца, стерильные марлевые шарики, спирт. Определение проводят в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25 ° С.
Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВ0 выпускают с определённой цветовой маркировкой: I(0) - бесцветная, II (А) - голубая, III (В) - красная, IV(АВ) - жёлтая. Маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I(0) полос нет, сыворотки II (А) - две полосы синего цвета, сыворотки III (В) - три полосы красного цвета и сыворотки IV(АВ) - четыре полосы жёлтого цвета. Сыворотки хранят при температуре 4-10 ° С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула - сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнения являются признаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, активность - высокая: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее чем через 30 с. Сыворотки с истекшим сроком хранения к использованию непригодны.
Тарелку делят цветным карандашом на четыре квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I(0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II (А), III (В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьём. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие капли разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки. Затем путём покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путём покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации (рис. 37, см. цв. вкл.).
При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зёрнышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зёрен. Возможны следующие четыре комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп.
1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь - I(0) группы.
2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь - II(А) группы.
3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I(0) и III(А) групп. Исследуемая кровь - III(В) группы.
4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV(АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV(АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе.
Выявление других комбинаций свидетельствует о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.
Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследования.
Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или, наоборот, выявляется агглютинация при её фактическом отсутствии. Невыявленная агглютинация может быть обусловлена: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.
Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объёма исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 ° С, оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.
Выявление агглютинации при её фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации, если исследование проводят при температуре окружающей среды ниже 15 ° С. Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15 ° С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил исследования.
Во всех сомнительных случаях необходимо повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритроцитов.
Определение группы крови по системе АВ0 с помощью моноклональных антител анти-А и анти-В (цоликлоны анти-А и анти-В )
Цоликлоны анти-А и анти-В применяют для определения группы крови человека по системе АВ0 вместо стандартных изогемагглютинирующих сывороток путём выявления антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в цоликлонах.
Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышечных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные цоликлоны представляют собой разведённую асцитическую жидкость мышей-носителей гибридомы, содержащую IgM против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВ0-сыворотки.
Определяют группу крови при температуре от 15 до 25 °С. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластинку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 с и проявляется образованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны следующие варианты реакции агглютинации.
1. Агглютинация отсутствует с цоликлонами анти-А и анти-В, кровь не содержит агглютиногенов А и В - исследуемая кровь группы I (0) (рис. 38, см. цв. вкл.).
2. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А - исследуемая кровь группы II(А).
3. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В - исследуемая кровь группы III (В).
4. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-В, эритроциты содержат агглютиногены А и В - исследуемая кровь группы IV(АВ) (табл. 2).
Таблица 2.
Реакция агглютинации исследуемых эритроцитов с цоликлонами анти-А и анти-В
При наличии реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти- В [группа крови IV(АВ)] для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное контрольное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора смешивают с маленькой (0,01 мл) каплей исследуемой крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови к IV(АВ) группе. При наличии агглютинации проводят определение группы крови с использованием отмытых стандартных эритроцитов.
Цоликлоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах, жидкость окрашена в красный (анти-А) и синий (анти- В) цвета. Хранят в холодильнике при температуре 2-8 °С. Срок хранения 2 года.
Биология для студентов - 14. Определение группы крови и резус фактора
14. Определение группы крови и резус фактора
Групповая принадлежность крови зависит от наличия или отсутствия природных антигенов (агглютиногенов) АВО и антител (агглютининов) a и b. Агглютиногены находятся преимущественно на форменных элементах, агглютинины преимущественно в плазме крови.
Выделяют 4сновные группы:
- Оab(I);
- Аb(II);
- Вa(III);
- АВo(IV).
Определение групповой принадлежности крови основано на существовании реакции агглютинации: при встрече «одноимённых» агглютиногенов и агглютининов – А и a, В и b – происходит склеивание (агглютинация) эритроцитов с последующим их гемолизом. В природе в крови одного человека «одноимённые» агглютиногены и агглютинины не существуют (в норме).
Определение группы крови проводят с помощью стандартных сывороток, стандартных эритроцитов известных групп крови и цоликлонов анти-А и анти-В.
В практике чаще используют метод определения групповой принадлежности крови при помощи стандартных сывороток: Оab(I), Аb(II), Вa(III) групп. Для контроля каждую сыворотку берут 2- х серий. Сыворотки и исследуемую кровь смешивают в соотношении 1:10. Реакция наблюдается в течение 5 минут и делается заключение:
- если реакции агглютинации нет ни с одной группой сывороток, исследуемая кровь будет Оab(I) группы;
- если агглютинация есть с Оab(I) и Вa(III) и нет с Аb(II), то кровь будет Аb(II) группы;
- когда агглютинация есть с Оab(I) и Аb(II) и нет с Вa(III), то кровь имеет группу Вa(III);
- при наличии агглютинации со всеми тремя группами сывороток – группа крови АВo(IV). В таком случае проводят контрольное исследование с сывороткой АВo(IV).
Rh – принадлежность крови.
Rh – принадлежность крови обусловлена наличием природных антигенов (агглютиногенов) системы резус.
В практике определяют и учитывают фактор Rho, который определяют, как резус-положительный (Rh + фактор) и фактор Hr – определяют, как резус-отрицательный (Rh – фактор).
Природных антител (агглютининов) в системе резус не существует, они могут образовываться только при переливании пациенту инорезусной крови.
Для определения Rh – принадлежности крови исследуемую кровь смешивают с сывороткой, содержащей антитела анти – Rh: при наличии агглютинации исследуемая кровь имеет Rh- положительный фактор, при отсутствии агглютинации – Rh- отрицательный фактор.
Определение группы крови и резус фактора
Практически сразу после рождения у ребенка берется анализ крови на группу крови и резус-фактор. Эти данные остаются неизменными на всю жизнь. Однако не всегда родители запоминают группу крови и резус малыша. Следовательно, не могут их сообщить, когда ребенок повзрослеет. Поэтому многие люди самостоятельно сдают анализ на группу крови и Rh. Современная медицина предлагает несколько методов определения группы крови и резус-фактора. Вот самые популярные из них.
Цоликлоны для определения группы крови и резуса
Узнать группу крови можно с помощью цоликлонов. Этот довольно новый метод позволяет получить практически 100% достоверный результат.
Цоликлонами называются моноклинальные антитела, которые синтезированы благодаря разработкам генной инженерии из жидкой ткани стерильных мышей. Они используются для того, чтобы выявить, какая группа у крови по системе АВО.Такой вид анализа выполняется в условиях лаборатории. Для получения достоверного результата во время исследования должны быть соблюдены ряд правил. Прежде всего, температура воздуха в помещении, где проводятся анализы, не должна быть ниже +15 градусов по Цельсию и выше +25 градусов по Цельсию. Также в лаборатории должно быть хорошее освещение. Для выполнения анализа используются только качественные реагенты. Они не должны иметь замутнения и содержать хлопья. Для каждого реагента должна быть применена отдельная пипетка, чтобы не допустить смешивание. Помимо этого, для исследования потребуется обильно смоченная тарелка белого цвета.
Алгоритм действия в данном случае будет следующим. На двух противоположных сторонах тарелки выполняются надписи анти-А и анти-В, под которые лаборант помещает по 0,1 мл соответствующего цоликлона. Определить их можно по оттенку. Так, у цоликлона анти-А он желто-розовый, а анти-В – синий. Далее, под реагент помещается капля крови. С помощью стеклянной палочки обе субстанции смешиваются. После этого берется чистая палочка, и такая манипуляция выполняется с двумя другими субстанциями.
Затем, ведется наблюдение за процессом агглютинации. Это должно продолжаться в течение 2,5 минут. Тарелку при этом следует слегка покачивать. Для того чтобы определить агглютинацию не нужно никакого дополнительного оборудования. Ее определяют визуально. В том случае, если она происходит, то появляются крупные хлопья. Если же процесса агглютинации нет, то цоликлон приобретает красный цвет. После этого происходит определение группы крови:
- Если агглютинация не идет ни с одной, ни с другой стороны тарелки, то в эритроцитах нет антигенов А и В, следовательно, кровь принадлежит к первой группе.
- Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-А, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген А. Следовательно, кровь принадлежит второй группе.
- Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-В, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген В. Следовательно, кровь принадлежит к третьей группе.
- Если процесс агглютинации идет в обоих случаях, то в эритроцитах есть антигены А и В. В такой ситуации рекомендуется сделать дополнительный анализ. Для его проведения берется капля крови пациента и смешивается с изотоническим раствором хлорида натрия в количестве 0,1 мл. Если при этом агглютинация не наблюдается, то определяют четвертую группу крови.
На белую тарелку помещается цоликлон анти-D, а рядом с ним капля крови пациента. Она должна быть в 10 раз меньше реагента. Обе субстанции смешиваются и в том случае, если агглютинация началась, то определяется положительный резус-фактор, в том случае, если нет, то резус-фактор отрицательный.
Методика определение группы крови по системе АВО
Как определить группу крови по системе АВО? Методика распознания группы крови и резус-фактора по системе АВО не менее популярна, чем предыдущая. Исследование также проводится в лабораторных условиях. Техника выполнения анализа по системе АВО проста. Ее суть заключается в следующем. Берется белая тарелка, на которой указывается данные пациента и группы крови в разных местах: О – первая, А – вторая, В – третья. Это и есть так называемая система АВО. Далее, под обозначениями помещаются соответствующие сыворотки. К ним добавляются капли крови, размеров раз в 10 меньше. Затем, субстанции смешиваются, и наблюдается реакция. Спустя 5 минут, лаборант может начать расшифровку. Оценивается агглютинация, при которой возникают хлопья, а сыворотка становится бесцветной. Метод АВО выдает такие результаты:
- агглютинации нет нигде, следовательно, у человека первая группа крови;
- агглютинация идет в сыворотках О и В, значит, кровь 2 группы;
- агглютинация идет в сыворотках О и А, значит, кровь 3 группы;
- агглютинация идет во всех сыворотках АВО, значит, требуется дополнительное исследование, в котором будет задействована сыворотка для определения четвертой группы. Если в данном случае процесс агглютинации не состоялся, значит, исследуемая кровь относится к 4 группе.
Для этого на тарелку в разные места помещается сыворотка антирезус и контрольная сыворотка, над которыми выполняются соответствующие надписи. К данным субстанциям добавляется кровь пациента. Обе жидкости смешиваются и оставляются на 5 минут. Если за это время в сыворотке антирезус произошла агглютинация, то резус-фактор положительный, если нет, то отрицательный. Если же агглютинация пошла и в контрольном экземпляре, значит, реагент непригоден для использования.
Как узнать группы крови в домашних условиях
Как узнать группу крови без обращения в лабораторию, чтобы не сдавать анализы? Сделать это можно и в домашних условиях. Так, узнать группу крови можно в том случае, если ориентироваться на пристрастия в еде. Для людей с первой группой крови характерна любовь к продуктам из мяса. Здесь вряд ли встречаются вегетарианцы. Если у человека вторая группа крови, то он отдает предпочтение овощам и фруктам. Также в данном случае отмечены пристрастия к всевозможным кашам. Люди с третьей группой крови очень любят молочные продукты. У людей с четвертой группой крови нет особых пристрастий в еде.
Помимо этого, самостоятельно группа крови определяется по характеру. Если человек стремится к лидерству и считает, что главное – это победа, а не участие, то, скорее всего, у него первая группа крови. В том случае, если у человека спокойный, тихий характер, то, вероятно, у него вторая группа крови. Для третей группы крови характерны эксцентричность и коммуникабельность, а для четвертой – творческое мышление.
Как узнать группу крови с помощью специального онлайн-калькулятора? В данном случае процедура довольна проста. В сети находится специальная программа, куда заносится группа крови и резус-фактор мамы, а также папы. Однако эффективность такого метода научно необоснована, поэтому узнать группу и резус лучше всего, обратившись в лабораторию.
В Австралии не так давно был разработан тест для самостоятельного определения группы крови. Он предназначается для использования в домашних условиях, следовательно, не нужно посещать лабораторию и сдавать анализы. Такой тест весьма прост в применении. На специальную полоску наносится капля крови. После этого из нее в осадок выпадают все присутствующие в ней бактерии. В результате этого на полоске появляется группа крови человека. Такой тест еще не доработан, поэтому не поставлен на поток для массового производства. Однако в данной области продолжаются вестись разработки, и не исключено, что в скором времени такой тест появится на прилавках аптек и магазинов.
Определение группы крови и резус-фактора лучше всего доверить профессионалу. Только в лабораторных условиях можно получить достоверный результат.Определение группы крови и резус-фактора
Резус — фактор это врожденная особенность белых кровяных телец организма (эритроцитов) иметь одинаковую природу за счет нахождения антигенов резуса в них . Другие обобщенные системы не влияют на человеческий резус – фактор, который способен по наследству передаваться . Этот признак крови не меняется на протяжении всей жизни.
Группа крови может рассказать о человеке многое. Антигены резуса находятся не у всех людей, только около 85- ти процентов населения земного шара. Кровь таких людей с антигенами резуса является положительной. У человека, не имеющего резус-фактор, эритроциты крови именуется отрицательными.Содержание
Антигенов различают несколько разновидностей, и ни одна из них не «враждует» с естественными антителами организма. Борьба антител и антигенов может возникнуть лишь в случае беременности, когда кровь ребенка имеет отрицательный резус – фактор, а кровь матери – положительный.
Своевременное определение группы крови матери и отца будущего ребенка облегчает эту борьбу. Также нежелательно переливать человеку кровь с отрицательным резус- фактором, если у него самого положительная кровь. Именно поэтому существуют определенные нормы и ограничения по переливанию плазмы и крови.
Перед таким важным медицинским процессом важно проверить кровь донора и нуждающегося на обоюдную совместимость, смешивая в отдельной медицинской таре и проходя тщательный лабораторный анализ.
Определение группы крови и резус – фактора – важный процесс, без него не обойтись на любых операциях. Кровь исследуется уже при рождении, каждая мать знает, с какой группой и фактором крови малыша она родила. Человек всю свою жизнь носит с собой информацию о своей крови.
Группа крови определяется путем смешивания крови (эритроцитов) с различными коллоидными веществами, к примеру, желатином или протеолитическими ферментами. Этот химический процесс называется агглютинацией, конглютинацией.
Методы определения группы крови
Методов определения группы крови существует несколько — определение группы крови цоликлонами, определение группы крови стандартными сыворотками.
Определение группы крови с помощью стандартных сывороток – самое распространенных в современных лабораториях при больницах.
Реакция агглютинации
Далее, про распознавание группы крови при помощи реакции агглютинации. Для получения реакции агглютинации нужно иметь исследуемые эритроциты, специальную сыворотку, антирезусные стандартные сыворотки и примерные варианты положительных и отрицательных белых кровяных телец.
В чашку добавляется по две капельки стандартной антирезусной сыворотки в два ряда по три точки. В первые три точки сыворотки добавляются контрольные положительные тельца- эритроциты, во вторые три точки добавляются резус – отрицательные тельца- эритроциты, в последние три точки добавляют исследуемые тельца — эритроциты.
Сыворотку и добавленные эритроциты аккуратно смешивают и нагревают на водяной бане при температуре не более 46—48° примерно 10 минут. Результатом исследуемых телец- эритроцитов будет появившаяся агглютинация в виде небольших капель, заметная при свете.
Реакции конглютинации
Существует также возможность определения группы крови при помощи реакции конглютинации. Для получения реакции конглютинации необходим желатин, пробирки, сыворотка стандартная , стандартные резус – положительные и стандартные резус – отрицательные эритроциты, белые кровяные тельца для исследования.
В два ряда пробирок, установленных в невысоком штативе, вводятся положительные, отрицательные исследуемые эритроциты и стандартная сыворотка. Потом в каждую пробирку вводится разжиженный желатин и все содержимое нагревают на воде около пяти минут при температуре не более 50-ти градусов.
После подогрева в емкость доливается разогретый хлорид натрия. Это химическое вещество позволяет рассмотреть образовавшуюся агглютинацию. Должен появиться осадок на дне медицинской тары, он и покажет резус – принадлежность исследуемых телец- эритроцитов.
Резус-фактор при беременности
Следует также отметить важность резус – фактора в гинекологическом обследовании. Определение резус фактора у беременной женщины является обязательной процедурой. Если будущий малыш имеет кровь с отрицательным резус – фактором, а его мать – положительный, могут возникнуть тяжелые осложнения беременности.
Определение резус фактора у беременной женщиныТакой случай возможен в том случае, если отец ребенка имеет отрицательные эритроциты в крови. Отрицательные эритроциты в крови плода могут попадать в кровь матери через плаценту. Организм будущей мамы начинает вырабатывать антитела к инородным для него отрицательным телам — эритроцитам. В таком случае развивается гемолиз плода. Если беременность женщины первая, можно избежать последствия резусных несовпадений.
Анализ на группу крови обязательно сдавать не только будущей матери, но и отцу. На особом наблюдении находится женщина с отрицательным резус-фактором крови, если отец ее ребенка имеет положительный резус. Такая беременность протекает сложно, женщина нуждается в постоянной профилактике резусного конфликта. Ультрафиолетовое облучение, применение особого рода витаминов, викасола, хлористого кальция ослабляют резусный конфликт и защищают плод от гемолиза.
Техника определения группы крови во всех случаях одинаковая, вне зависимости от того, какая сыворотка или антитела применяются. Антирезусные сыворотки, моноклинальные анти-Д-антитела, сыворотка для экспресс-метода, цоликлон анти-Д-супер – все эти вещества позволяют точно определить принадлежность крови к определенному фактору и группе.
Набор для определения группы крови стандартный – используемая сыворотка или специализированное вещества, набор образцов положительных белых телец и отрицательных эритроцитов, исследуемые белые кровяные тельца, стандартная сыворотка, пипетка, медицинские тары, хлорид натрия.
