Главная » Статьи » Определение групп крови с помощью цоликлонов

Определение групп крови с помощью цоликлонов


Что такое цоликлоны? Как с их помощью определить группу крови и резус-фактор

Цоликлоны – моноклинальные антитела, которые были получены из крови мышей с помощью генной инженерии и используются для определения группы крови системы АВО и резус-фактора.

Цоликлоны, в противовес стандартным сывороткам, отличаются высокой активностью и авидностью (временем наступления, а также выраженностью склеивания (реакции агглютинации).

Основные цоликлоны:

  • Анти-A;
  • Анти-B;
  • Анти-AB;
  • Анти-0 и т.д.

По цоликлонам определяют резус-фактор и группы крови.

Техника определения групп с помощью цоликлонов

Определение данным методом производится в лабораторных условиях. Температура воздуха должна находиться в пределах +15 – + 25 градусов по Цельсию. Исследование должно проводиться при достаточно хорошем освещении.

Реагенты необходимо хранить плотно закрытыми, так как при высыхании значительно снижается активность антител. Нельзя использовать содержащие хлопья и мутные реагенты. Для каждого из реагентов требуется отдельная пипетка.

Анализ проводится на белой тарелке или планшете с хорошо смачиваемой поверхностью. Благодаря высокой активности и авидности цоликлонов, есть возможно применение по серии реагентов анти-A и анти-B.

На планшете нужно сделать надписи с названиям антигенов анти-A/анти-B. Далее снизу от соответствующих надписей капают примерно 0,1 миллилитр цоликлонов. У реагента анти-A цвет желтовато-розовый, у анти-B – синий.

Определение групп крови

Возле моноклональных антител капают по одной капле крови, смешивают ее уголком предметного стекла или стеклянной палочкой с реагентами. Перед дальнейшим смешиванием пар капель необходимо тщательно промыть и насухо вытереть стекло или палочку.

Наблюдение за процессом агглютинацией ведут в течение 2,5 минут, при этом тарелку или планшет нужно слегка покачивать. По истечении времени оценивают результат. Стоит отметить, что наблюдения за агглютинацией не требуют каких-либо специальных приспособлений.

Агглютинаты достаточно хорошо видны даже невооруженным глазом, быстро сливаясь и образуя большие хлопья. В случае, если не происходит склеивания, капля реагента приобретает равномерную окраску красного цвета.

Расшифровка результатов

Таблица сопоставления группы крови и цоликлона позволяет разобраться в результатах.

ЦоликлонI положительнаяI отрицательнаяII положительнаяII отрицательнаяIII положительнаяIII отрицательнаяIV положительнаяIV отрицательная
Анти-А++++
Анти-В++++
Анти-D++++
  1. Если отсутствует агглютинация (с анти-A и анти-B), эритроциты не содержат антигенов A и Б. Это I группа крови;
  2. Если есть агглютинация только с анти-A, эритроциты содержат лишь антиген A, что характеризует II группу крови;
  3. Если агглютинация только с анти-B, красные клетки содержат антиген B, что характеризует III группу;
  4. Если наблюдается агглютинация c обоими цоликлонамми анти-A и анти-B, эритроциты содержат оба антигена. С целью исключения аутоагглютинации необходимо провести контрольную процедуру: в этом случае смешивают 0,1 миллилитр изотонического раствора хлорида натрия и 0,01 миллилитр исследуемой крови. Если реакция агглютинации отсутствует, определяется IV группа.
Расшифровка результатов

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора наносят на планшет большую каплю анти-D-супе, возле нее – маленькую каплю (меньше в десять раз) исследуемой крови. Производят смешивание и оценивают полученный результат. Если реакция агглютинации началась, данная методика определяет кровь как резус-положительную, если резус-фактор отрицательный – агглютинации нет.

Определение резус-фактора

Препараты цоликлонов

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D.

Существуют три разновидности:

  • Обычный анти-D-цоликлон. При его добавлении развивается реакция непрямой агглютинации;
  • Супер. Вызывает прямую агглютинацию;
  • Препарат анти-D-микс, имеющий в составе компоненты обычного и супер цоликлона анти-D). С их помощью можно как выявить группу крови, так и определить резус-принадлежность крови.

Отличие других растворов состоит в названии, поскольку входящие в их состав антитела – иммуноглобулины М и G – предоставляют возможность только произвести типизацию крови по антигенам АВ0. Различие заключается исключительно в механизме слипания эритроцитов (агглютинация прямая/непрямая).

У каждого из этих препаратов есть свои собственные особенности использования и срок годности. Однако наибольшей популярностью в лабораторной клинической диагностике пользуются только 3 вышеуказанных препарата (анти-А, анти-В, анти-D).

Как определить группу в случае неверной трактовки результатов анализа

Иногда возможно получение недостоверных, ложных результатов. К примеру, если при добавлении к препарату крови изменился их цвет или если агглютинация наблюдается во всех ячейках планшетки.

Чтобы предотвратить такие результаты, если выполняется определение группы цоликлонами, алгоритм действий предусматривает определенные правила. Сначала следует посмотреть на срок обращения цоликлонов. Недопустимо использовать реагенты, у которых истек срок годности.

Обязательно нужно соблюдать и все условия правильного проведения процедуры. Помещение должно иметь хорошо оборудованное рабочее место с температурным режимом и достаточным освещением. Если инструкция к препарату содержит указания и касательно требуемой влажности, следует учитывать и данный фактор.

Немалое значение имеет и чистота планшетки, так как ее загрязнение может привести к возникновению ошибок в исследовании и, как следствие, к получению неверных результатов.

Где можно провести анализ?

Определение группы цоликлонами постепенно приобретает все большую популярность. Если раньше эта процедура проводилась исключительно в специализированных стационарах (к примеру, только в отделениях гематологии и хирургии), то сейчас процедура доступна почти в любой достаточно оборудованной лаборатории.

Методика цоликлонов находит применение и в поликлиниках. Там ее включают различные методы экспресс-определения группы крови, проводимые с целью скорейшего выставления пациенту диагноза.

На платной основе проведение этой услуги предлагают и многие центры косметологии и частной медицины. Бесплатно данная процедура, как было сказано выше, проводится по направлению терапевта или лечащего врача.

Если отсутствует возможность обратиться за анализом крови в поликлинику, исследование можно провести и самостоятельно при наличии набора препаратов и специальной планшетки. Однако необходимо помнить, что для получения достоверных результатов требуется соблюдать условия процедуры, в особенности это касается стерильности.

Видео

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм действий, резус-фактора, как с помощью, таблица

Определение группы крови цоликлонами делают беременным женщинам перед родами, больным людям — до проведения хирургической операции, и когда может понадобиться переливание крови. Есть и другие способы с применением различных веществ, но этот метод самый точный и применяется чаще всего.

Что такое цоликлон

Цоликлоны для определения группы крови представляют собой антитела, получаемые по специальной технологии. Чтобы получить цоликлоны, используют лабораторных подопытных крыс. Грызунам делают инъекцию специального средства, а затем берут кровь из брюшины, она включает вещества, которые нужны для анализа.

Цоликлоны по своему составу относятся к иммуноглобулинам, они реагируют с антигенами, находящимися на оболочке эритроцитов. Типы этих веществ используются для выявления группы. Во время анализа цоликлоны разных видов вступают в реакцию с агглютиногенами, это дает возможность выявить группу и резус-фактор человека.

Препарат производят в жидком виде в бутылках по 5 и 10 мл. Каждый вид препарата обладает своими характеристиками.

Цоликлоны отличаются преимуществом перед другими сыворотками, т.к. не требуют долгой подготовки к обследованию и дают возможность сделать его быстро. Они не представляют собой человеческие клетки, ввиду чего при контакте с ними медики не смогут заразиться какой-либо инфекцией.

Подготовка к процедуре

В кабинете должна отсутствовать пыль, мухи, насекомые, которые могут помешать выполнению теста. Помещение должно быть хорошо освещено. Флакон с цоликлонами должен быть плотно закрыт, чтобы реагенты не пересохли, в противном случае достоверность анализа снизится. Для определения группы крови и резуса при помощи цоликлонов нужна специальная подготовка. В лабораторном кабинете температура воздуха может быть +15…+25ºC, в этом случае результат будет точным.

Перед анализом подготавливают нужные медицинские инструменты:

  • пробирку;
  • планшет, на который наносят реагент;
  • пипетки;
  • палочки для изъятия лабораторных образцов.

Если медицинский работник не только выполняет исследования, но и берет анализ у пациента, то надо подготовить:

  • жгут;
  • спирт для медицинской обработки;
  • одноразовый шприц;
  • пробирки;
  • ватный тампон;
  • салфетки;
  • специальный лабораторный маркер.

Как проводится исследование

Алгоритм определения группы крови цоликлонами состоит в следующем. Лабораторное тестирование осуществляется при помощи 3 видов этих веществ:

  • «Анти-A» красного цвета, такой же оттенок имеет бутыль, крышка и этикетка препарата.
  • «Анти-B» имеет синий цвет, а также крышку, бутыль и этикетку, окрашенные в синий тон.
  • «Анти-D» — бесцветный и находится в прозрачной бутылке.

При определении резус-фактора цоликлонами нельзя применять некачественные реагенты. Если флакон имеет дефекты или внутри жидкости есть осадок, то реагент потеряет свое действие. Чтобы определить группу, медицинский работник наносит цоликлоны на лабораторную пластину, выполненную в виде таблицы. Наносятся реагенты разных типов (A, B и D). Каждый образец подписывается. Цоликлон наносят на отмеченный участок. Каждый вид реагента берут своей пипеткой.

Рядом с сывороткой капают по 1 капле крови человека, затем чистой палочкой ее размешивают с реагентами. Через несколько секунд начнется реакция. Лаборант проводит наблюдение за реагентами 3 минуты. Потом можно расшифровывать результат анализа.

Расшифровка результатов

Определение типа крови с помощью цоликлонов происходит при расшифровке результатов анализов. Если в образце нет реакции склеивания, значит, в анализе нет агглютиногена данного типа. В этом случае анализ относится к 1 группе. Если клетки вступают в реакцию с реагентами «Анти-A» и «Анти-D», значит, у человека 2 тип (A).

Взаимодействие эритроцитов с цоликлонами типа «Анти-B» и «Анти-D» показывает, что у человека 3 группа (тип B). Если тельца вступили во взаимодействие со всеми видами цоликлонов, то у больного 4 группа крови (тип D). При выявлении группы крови при помощи этих реагентов не придется проводить дополнительную проверку, т.к. цоликлоны не имеют каких-либо добавок, вызывающих неправильную реакцию. Группа крови определяется в медицинском учреждении, анализ осуществляется в специальной лаборатории.

Таблица расшифровки результатов исследования:

Этот тест позволяет узнать жизненно необходимые данные о группе и резус-факторе пациента. Результаты позволяют оказать медицинскую помощь и перелить кровь больному после операции. Чтобы узнать свою группу, можно провести анализ в лаборатории любого медицинского учреждения. Информацию заносят в анкету пациента и хранят полученные данные в поликлинике в течение нескольких лет.

Определение группы крови цоликлонами - что это и как проводится

Определение группы крови и резус-фактора играет основополагающую роль в случаях, когда речь идет о спасении жизни человека. Именно по этой причине подобное исследование проводят всем пациентам в предоперационный период, беременным женщинам перед родами и во многих других ситуациях, которые могут потребовать срочного переливания. Существует несколько способов определения группы крови с использованием разных лабораторных реагентов, и один из них основывается на применении химических веществ под названием цоликлоны. Что же представляет собой определение группы крови цоликлонами и как проводится процедура?

Определение группы крови цоликлонами

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Таблица групп крови и резус-факторов

Что такое цоликлоны?

Цоликлоны – это антитела, которые получают посредством технологий генной инженерии. Обычно для получения цоликлонов берутся лабораторные мыши – животным вводится специальный препарат, после чего производят забор жидкости из брюшной полости – именно она и содержит необходимые для проведения анализа вещества. С научной точки зрения, цилоклоны можно отнести к иммуноглобулинам М, которые способны реагировать с агглютиногенами – специфическими клетками, присутствующими на поверхности красных кровяных телец.

Цоликлоны

Именно агглютиногены, а точнее их типы, и служат основой для классификации групп крови: так, у носителей первой группы данные вещества отсутствуют, у обладателей второй имеются агглютиногены типа А и т. д. В ходе проведения процедуры определенные цоликлоны вступают в реакцию с разными типами агглютиногенов, что и позволяет определить группу крови пациента.

Группа крови и резус фактор – фото

Цоликлоны выпускаются в виде жидкости, разлитой во флаконы по 5 мл или 10 мл, причем каждый ее тип имеет специфические характеристики:

  • анти-А представляет собой жидкость красноватого цвета;
  • анти-В имеет синий оттенок;
  • анти-АВ (анти-D) – бесцветный прозрачный раствор.

Преимущество цоликлонов перед другими химическими реагентами заключается в том, что они не требуют специальной подготовки к анализу и позволяют провести его в кратчайшие сроки. Кроме того, они не являются клетками человеческого организма, поэтому инфекционное заражение медперсонала при контакте с веществами полностью исключено.

Определение групп крови по системе АВ0 при помощи цоликлонов Анти-А и Анти-В

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

  1. Стороны планшета помечают, чтобы не перепутать, на какую из них будет нанесен тот или иной тип цоликлонов.

    Процедура определения группы крови цоликлонами

  2. На поверхность капают по одной капле реагентов (обычно цилоклоны анти-А и анти-В) и крови, причем объем химических веществ должен в 8-10 раз превышать объем биоматериала.
  3. Подождать 3-5 минут, аккуратно покачивая планшет, чтобы жидкости хорошо смешались, а эритроциты не оседали по краям образцов.

Планшет для определения группы крови

Важно! Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов процедуры проводится визуально – жидкости либо полностью соединяются, либо наступает склеивание (агглютинация) кровяных телец, вследствие чего биоматериал сворачивается и в нем образовываются мелкие хлопья.

Интерпретация результатов

Расшифровка осуществляется следующим образом:

  • если реакция отсутствует во всех образцах биоматериала, его можно причислить к I группе (это означает, что агглютиноген в клетках крови отсутствует);
  • вступление кровяных клеток в реакцию с цоликлоном анти-А свидетельствует о том, что кровь исследуемого человека относится к II группе;
  • склеивание эритроцитов с цоликлоном анти-В – признак III группы крови;
  • если биоматериал вступил в реакцию со всеми веществами, то он принадлежит к IV группе.

Исследуемая кровь группы О(I)

Для проверки точностии результатов и определения резус-фактора к образцам биоматериала добавляют цоликлон АВ – если произошла реакция агглютинации, он в крови определяется как положительный (отсутствие склеивания эритроцитов говорит об отрицательном резус-факторе). Чтобы исключить заболевания, при которых агглютинация происходит при контакте с любыми раздражителями, капля крови пациента смешивается с физраствором. В случаях, когда визуально определить результат невозможно, анализ переделывают, а образцы рассматривают под микроскопом.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Группа крови Реакция с цоликлоном анти-А Реакция с цоликлоном анти-В
I группа ОтсутствуетОтсутствует
II группа Положительная Отсутствует
III группа ОтсутствуетПоложительная
IV группа ПоложительнаяПоложительная

Цоликлон Анти-B флакон-капельница

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

  • реагенты должны храниться в холодном месте при температуре +2-8 градусов во флаконах с плотно закрученной крышкой (в случае нарушения правил хранения они быстро теряют свои свойства);
  • для проведения анализа нельзя использовать цоликлоны с истекшим сроком хранения (он составляет около 30 дней) или жидкости, которые содержат осадок, хлопья или мусор;
  • исследование выполняется в хорошо освещенном помещении при температуре воздуха не ниже +15 и не выше +25 градусов, причем в нем не должно быть грязи, пыли и других факторов, способных исказить результат;

    Температура воздуха во время процедуры должна соответствовать

  • при нанесении биоматериала и реагентов на поверхность планшетки следует точно соблюдать пропорции – если крови будет слишком много, реакцию сложнее отследить, а в противоположном случае (при малом объеме) она будет слишком медленной;
  • нельзя допускать, чтобы капли крови, смешанные с разными типами цоликлонов, сливались вместе – если это случилось, исследование проводят заново; по этой же причине для смешивания реагентов с биоматериалом следует использовать разные палочки.

Процесс определения группы крови

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Что может повлиять на результат?

Цоликлоны чувствительны к факторам окружающей среды, соответственно, при проведении исследования необходимо соблюдать температурный режим и правила гигиены – помещение должно быть чистым и сухим, а отдельные образцы крови не должны контактировать друг с другом. Кроме того, при некоторых патологиях кровь человека способна менять свои характеристики, вследствие чего проведение исследования существенно усложняется. Так, при дисфункции печени, селезенки, септических процессах и обширных ожогах у пациентов наблюдается так называемая панагглютинация крови – эритроциты выпадают в осадок даже при реакции с физраствором. У больных лейкозом и новорожденных младенцев наблюдается иная картина – кровяные тельца не реагируют на раздражители, из-за чего отследить реакцию склеивания становится невозможно.

Что влияет на результаты процедуры

Обратите внимание! Кроме того, у близнецов, людей с пересаженным костным мозгом или у тех, кто перенес неоднократное переливание крови, в биологических жидкостях уживаются разные типы эритроцитов – соответственно, при проведении анализа наблюдаются непредсказуемые результаты. Для определения группы в вышеперечисленных случаях требуются дополнительные лабораторные анализы с использованием специального оборудования.

Анализ с использованием цоликлонов – один из наиболее простых и точных способов определения группы крови человека. При соблюдении всех правил и условий проведения процедуры вероятность ошибочного результата сводится к минимуму, поэтому химические реагенты данного типа применяются практически во всех современных лабораториях.

Видео — Определения групп крови с помощью цоликлонов

алгоритм 7 определение группы крови с цоликлонами

Определение группы крови с цоликлонами анти-А и анти-Б

1Вступительное слово: Мы проводим определение группы крови с цоликлонами в процедурном кабинете по назначению врача. На мне шапочка, очки, маска, халат, фартук, перчатки. Руки предварительно обработаны гигиеническим способом.

2 Оснащение:

  1. Цоликлоны анти-А, анти-Б

  2. Исследуемая кровь (пробирка)

  3. Тарелка для определения группы крови.

  4. Стерильные стеклянные палочки 2 шт ( в стакане, чашке Петри)

  5. Изотонический раствор натрия хлорида

  6. Стерильная пипетка 1 шт.

  7. Стерильный капилляр с грушей.

  8. Ёмкость с 3% раствором хлорамина.

3 Техника манипуляции:

  1. Внести цоликлоны в отдельные лунки по одной большой капле.

  2. Внести капилляром маленькие (0,01 мл) капли крови рядом с каплями цоликлонов, избегая контакта капилляра и крови.

  3. Отдельными палочками смешать цоликлоны и кровь.

  4. Покачивать тарелку, наблюдать агглютинацию 2,5 минуты.

  5. Внести пипеткой в лунки, в которых произошла агглютинация по 1й капле физиологического раствора

  6. Покачивать, наблюдать агглютинацию.

  7. Форма ответа:

При определении группы крови с помощью цоликлонов …

  1. Агглютинация не наблюдается ни в одной из лунок – первая группа

  2. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-А – вторая группа

  3. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-Б – третья группа

  4. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-Б – четвертая группа

  1. После проведения манипуляции все использованные предметы замачиваются в емкости с трехпроцентным раствором хлорамина.

4 Возможные ошибки:

Грубые ошибки:

  1. Не использование средств защиты медработника.

  2. Повторное использование палочек.

  3. Перенос палочек, контактировавших с кровью над лотком с чистыми палочками.

  4. Не соответствие картины агглютинации заключению о групповой принадлежности.

  5. Не продезинфицированы предметы, контактировавшие с кровью.

Не грубые ошибки:

  1. Время ожидания агглютинации менее 2.5 мин.

  2. Не внесен физраствор в лунки, в которых произошла агглютинация.

  3. Удерживание палочек за концы, а не за центр.

5 Критерии оценивания:

Сдал – отсутствие грубых ошибок, наличие не более двух не грубых ошибок.

Не сдал – наличие грубых ошибок, наличие более двух не грубых ошибок.

При совершении грубой ошибки преподаватель может попросить повторить соответствующий этап манипуляции. Если ошибка повторяется – не сдал. Допускается не более одного повторения.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Смотрите также